张晓璐
- 作品数：12 被引量：7H指数：2
- 供职机构：西南大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 敲低Seroin1基因的家蚕双元转基因系统及家蚕纯裸蛹品种的制备方法
- 本发明公开了敲低Seroin1基因的家蚕双元转基因系统及家蚕纯裸蛹品种的制备方法，通过CRISPR/Cas9系统介导Seroin1基因敲除表达，获得seroin1基因功能缺陷的家蚕品系，由于丧失吐丝结茧能力，致使蚕变为裸...
- 赵萍张晓璐董照明郭凯雨夏庆友
- 家蚕丝氨酸蛋白酶BmSP141的表达特征及对饥饿的响应被引量：3
- 2016年
- 【目的】分析家蚕(Bombyx mori)丝氨酸蛋白酶基因BmSP141序列信息,明确其时空表达模式,结合饥饿与重新喂食处理对其表达的影响,探究该基因在家蚕中的功能。【方法】对家蚕丝氨酸蛋白酶基因BmSP141进行T-A克隆,得到其编码区核苷酸序列;应用生物信息学在线网站对该基因编码区推导的氨基酸序列、分子量、结构域等信息进行分析;利用Clustal X1.8和MEGA5.02软件对BmSP141与其他物种的丝氨酸蛋白酶进行多序列比对和系统发生树分析;构建原核表达载体p28-BmSP141,并转化到Rosetta(DE3)菌株中诱导表达,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白。利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR方法对其组织和时期表达特征进行分析;采用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术,分别分析BmSP141蛋白在家蚕5龄第3天各组织的表达情况和5龄幼虫中肠的表达变化;通过免疫荧光定位分析BmSP141蛋白在4龄幼虫中肠的分布情况;利用实时荧光定量PCR和Western blot方法对饥饿处理和再喂食后BmSP141的表达情况进行分析。【结果】BmSP141编码含有292个氨基酸的蛋白,其中第1—17位氨基酸为信号肽,其成熟体蛋白预测分子量为25.9 k D,等电点为7.8。同源序列比对表明,BmSP141与烟芽夜蛾丝氨酸蛋白酶和蓓带夜蛾丝氨酸蛋白酶序列同源性较高,分别达到62%和63%。这些同源序列具有保守的催化三联体,与活性相关的基序也很保守,但与胰凝乳蛋白酶保守的底物特异性位点相比,BmSP141的底物特异性位点发生改变。在16和37℃条件下诱导后,重组蛋白均以包涵体形式表达,经镍柱亲和层析纯化后得到了较纯的重组蛋白,并用该蛋白制备了效价较高的多克隆抗体。组织和时期表达特征分析表明,该基因主要在家蚕幼虫的中肠组织特异性表达,且在幼虫起蚕到食桑期表达逐渐增加,但眠期表达下降,蛹期和成虫期表达水平较低。Western blot分析也表�
- 刘华伟李游山唐新张晓璐赵萍
- 关键词：家蚕丝氨酸蛋白酶中肠饥饿
- 家蚕丝胶蛋白Ser4在提高蚕丝性能中的应用及其方法
- 本发明公开了家蚕丝胶蛋白Ser4在提高蚕丝性能中的应用及其方法，通过无缝克隆和同源重组，将分子量超过250kDa的完整Ser4蛋白表达到了蚕茧丝胶层中，育成的转基因品系提高了蚕丝力学性能的提高，过表达Ser4品系的蚕丝更...
- 赵萍郭凯雨张晓璐董照明夏庆友
- 家蚕BmSPI51突变蛋白BmSPI51M及其制备方法和应用
- 本发明公开了家蚕BmSPI51突变蛋白BmSPI51M及其制备方法和应用，突变蛋白BmSPI51M的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，突变蛋白由家蚕BmSPI51的活性位点由...
- 赵萍张晓璐郭凯雨董照明夏庆友
- 文献传递
- 家蚕小分子丝蛋白SPI51和Seroin1的功能研究
- 家蚕因能吐丝结茧而被列为重要的经济昆虫。蚕丝是一种天然的动物蛋白质纤维，中华民族的祖先早在公元前两千多年就开始利用蚕丝制作纺织服饰。自古以来，蚕丝制品以其华丽的外观、优雅的光泽、舒适的体感而被大众喜爱。近几十年来，研究者...
- 张晓璐
- 关键词：家蚕丝胶蛋白蛋白酶抑制剂
- 文献传递
- 家蚕丝胶蛋白Ser4在提高蚕丝性能中的应用及其方法
- 本发明公开了家蚕丝胶蛋白Ser4在提高蚕丝性能中的应用及其方法，通过无缝克隆和同源重组，将分子量超过250kDa的完整Ser4蛋白表达到了蚕茧丝胶层中，育成的转基因品系提高了蚕丝力学性能的提高，过表达Ser4品系的蚕丝更...
- 赵萍郭凯雨张晓璐董照明夏庆友
- 具有抗菌活性的Sericin3蛋白的重复基序及其应用
- 本发明公开了具有抗菌活性的Sericin3蛋白的重复基序及其应用，Sericin3蛋白的重复基序的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，分子大小为5kDa的多肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌都具有抗菌活性，由于...
- 赵萍郭凯雨张晓璐夏庆友
- 家蚕表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及其与几丁质的结合特性被引量：4
- 2017年
- 【目的】探讨家蚕(Bombyx mori)表皮蛋白BmCPAP3-G的表达特征及与几丁质的结合方式,为家蚕表皮蛋白的功能研究提供依据。【方法】应用生物信息学方法分析家蚕CPAP家族表皮蛋白及BmCPAP3-G的结构域的序列特征;利用原核表达的方法表达BmCPAP3-G的融合蛋白,通过镍柱亲和层析技术纯化可溶性蛋白,利用5800 MALDI-TOF/TOF质谱鉴定正确后进行多克隆抗体制备,并利用几丁质亲和层析技术验证BmCPAP3-G与几丁质的结合;利用半定量RT-PCR和Western blot方法对BmCPAP3-G的组织和时期表达情况进行检测;利用几丁质亲和层析技术探讨体外BmCPAP3-G的结构域与几丁质结合能力强弱的关系。【结果】BmCPAP3-G蛋白具有18个氨基酸组成的信号肽,分子量为27 k D,等电点为4.82,位于第15号染色体上,由3个相同的Cht BD2结构域组成,并且其结构域中的半胱氨酸和芳香族氨基酸的同源性较高;对BmCPAP3-G进行了克隆和原核表达,并利用镍柱亲和层析技术纯化到了较纯的可溶性蛋白,经5800 MALDI-TOF/TOF鉴定正确后制备了其多克隆抗体,通过几丁质亲和层析技术验证了BmCPAP3-G能够与几丁质进行结合;利用半定量RT-PCR和Western blot的方法对BmCPAP3-G的组织和时期表达情况进行检测,发现转录水平和蛋白水平的结果一致,BmCPAP3-G在头和表皮中的表达量较高,在中肠、生殖腺和丝腺中的表达量较低,从表皮和丝腺的时期表达情况分析BmCPAP3-G在4龄眠期的表达量最高,随着5龄期的进行表达量呈逐渐下降的趋势;为了探讨BmCPAP3-G结构域与几丁质结合的关系,对该蛋白的结构域进行原核表达及镍柱亲和层析纯化,成功纯化了有活性的结构域3、结构域1-2、结构域2-3,将这3个结构域进行几丁质亲和层析验证其与几丁质的结合能力,发现它们均能够与几丁质进行结合,但是结合能力有差异,结构域3相比于结构域1-2和结构域2-3的结合能力要弱,即两
- 张薇薇董照明张艳张晓璐张守亚赵萍
- 关键词：家蚕表皮蛋白CPAP表达谱
- 敲低Seroin1基因的家蚕双元转基因系统及家蚕纯裸蛹品种的制备方法
- 本发明公开了敲低Seroin1基因的家蚕双元转基因系统及家蚕纯裸蛹品种的制备方法，通过CRISPR/Cas9系统介导Seroin1基因敲除表达，获得seroin1基因功能缺陷的家蚕品系，由于丧失吐丝结茧能力，致使蚕变为裸...
- 赵萍张晓璐董照明郭凯雨夏庆友
- 家蚕BmSPI51突变蛋白BmSPI51M及其制备方法和应用
- 本发明公开了家蚕BmSPI51突变蛋白BmSPI51M及其制备方法和应用，突变蛋白BmSPI51M的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，突变蛋白由家蚕BmSPI51的活性位点由...
- 赵萍张晓璐郭凯雨董照明夏庆友
- 文献传递
