石瑜
- 作品数：8 被引量：1H指数：1
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- HTRA1基因突变对人脑血管平滑肌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响
- 目的 探讨HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染对人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)增殖、迁移及凋亡的影响.方法 将HBVSMC分为三组,正常的人脑血管平滑肌细胞组(NC)、野生型病毒感染细胞组(OE-WT H...
- 石瑜胡怀强王晓玲王敏曹秉振
- HTRA1基因突变对血管平滑肌细胞功能的影响及其与氧化还原反应关系研究
- CARASIL是一种直接影响脑小血管的单基因疾病，是由编码HtrA丝氨酸肽酶/蛋白酶1（HTRA1）的HTRA1基因突变引起。CARASIL在成年早期发病，多发生于男性，其确切发病率尚不清楚。主要临床表现为缺血性脑卒中或...
- 石瑜
- 关键词：丝氨酸蛋白酶基因突变血管平滑肌细胞氧化还原反应
- HTRA1基因对突变血管平滑肌细胞氧化反应的影响
- 目的探讨氧化应激在HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)中的作用。方法 HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染HBVSMC后,在特定的时间点收集NC、OE-WT HT...
- 石瑜胡怀强王晓玲王敏曹秉振
- 文献传递
- 慢病毒介导的HTRA1突变基因感染对人脑血管平滑肌细胞内氧化应激反应的影响
- 2016年
- 检测HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染HBVSMC后,HBVSMC内氧化应激水平的变化。以HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染HBVSMC后,在特定的时间点收集NC、OE-WT HTRA1及OE-MU HTRA1三组细胞的总RNA及总蛋白,分别用RT-PCR和Western Blot的方法检测三组细胞的NOX4 mRNA及蛋白水平的表达情况;用DCFH-DA法检测三组细胞内的活性氧水平。从定量PCR结果可以看出,人脑血管平滑肌细胞中,OE-MU组NOX4基因表达丰度是NC组的2.015倍。从Western blot结果可以看出,在正常的人脑血管平滑肌细胞中NOX4蛋白水平表达较低,而在慢病毒LV-HRTA1及LV-HRTA1-MUT感染后NOX4蛋白表达水平增高。在正常的人脑血管平滑肌细胞中ROS水平表达较低,而在慢病毒LVHRTA1及LV-HRTA1-MUT感染后ROS蛋白表达水平增高,在突变型病毒感染细胞组表现更为明显。说明:1HTRA1突变型基因感染人脑血管平滑肌细胞后,细胞内活性氧产量增加,NOX4 mRNA水平的表达正常细胞升高,但较HTRA1野生型基因无明显差别;NOX4在蛋白水平表达较其他两组均升高;2HTRA1突变型基因感染的人脑血管平滑肌细胞出现增殖减少、迁移活力降低以及凋亡增加可能与细胞内的氧化应激有关,为进一步研究CARASIL发病机制奠定基础。
- 石瑜王晓玲王敏李传芬曹秉振
- 关键词：HTRA1活性氧NADPHNOX4
- HTRA1基因突变对人脑血管平滑肌细胞的增殖、迁移、凋亡的影响
- 目的探讨HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染对人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)增殖、迁移及凋亡的影响。方法将HBVSMC分为三组,正常的人脑血管平滑肌细胞组(NC)、野生型病毒感染细胞组(OE-WT HTR...
- 石瑜胡怀强王晓玲王敏曹秉振
- 文献传递
- 慢病毒介导的HTRA1基因稳定过表达人脑血管平滑肌细胞株的建立
- 2016年
- 目的:构建并包装针对HTRA1基因以及其1091T>C突变基因(HTRA1-Mut)的过表达慢病毒载体,以及建立稳定表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)株。方法:采用RT-PCR方法扩增HTRA1及HTRA1-Mut基因片段并将其连接于GV287载体质粒,采用慢病毒包装三质粒系统(GV287/p Helper 1.0/p Helper 2.0)转染293T细胞,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液并标定病毒滴度,慢病毒感染经培养和鉴定的HBVSMC细胞株。结果:成功构建含HTRA1及HTRA1-Mut基因的慢病毒重组载体,PCR鉴定阳性的克隆进行测序和BLAST比对分析显示与源基因序列一致,并能够有效的感染并在293T细胞中表达。表达载体包装后测定病毒滴度为:2E+8 TU/mL。过表达慢病毒感染后HBVSMC有荧光表达,并且荧光率达80%以上,细胞生长良好传后细胞几乎无死亡现象。结论:成功构建了过表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的慢病毒表达载体,得到了较高滴度的病毒悬液,建成了稳定表达HTRA1及HTRA1-Mut基因的HBVSMC细胞株,为进一步探讨HTRA1基因及突变后细胞的功能变化提供了良好的研究工具。
- 石瑜王晓玲王敏李传芬曹秉振
- 关键词：慢病毒表达载体HTRA1
- 慢病毒介导的HTRA-突变基因感染对人脑血管平滑肌细胞生物学特性影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨HTRAJ基因及tfTRA，突变基因[1091T〉C（点突变）]慢病毒表达载体感染对人脑血管平滑肌细胞（HBVSMC）增殖、迁移及凋亡等生物学特性的影响。方法构建野生型HTRAJ基因及突变型HTRAJ基因慢病毒表达载体，并将其感染经培养和鉴定的HBVSMC，以空载体感染libVSMC为对照组。采用CCK-8法连续5d检测细胞增殖情况，Transwell实验检测细胞的迁移，流式细胞术检测细胞凋亡。结果与对照组相比，野生型HTRAI基因慢病毒组细胞增殖无明显变化，至第3天起突变型HTRAl基因慢病毒组细胞增殖减缓，差异具有统计学意义（P〈0．05）。对照组、野生型HTRAl基因慢病毒组、突变型HTRAI基因慢病毒组细胞迁移率分别为0．474±0．079、0．612±0．037、0．283±0．064，差异有统计学意义（p〈0．05）。与对照组细胞凋亡率（3．68％±0.23％）相比，野生型HTRAI基因慢病毒组细胞凋亡率（3．13％±0．07％1降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；突变型HTRAI基因慢病毒组细胞凋亡率（3.70％±0.20％）增多不明显，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论突变型HTRAI基因感染HBVSMC后引起该细胞增殖能力和迁移活性减弱，但对细胞凋亡无影响。
- 石瑜曹秉振王晓玲王敏李传芬
- 关键词：慢病毒表达载体
- HTRA1基因对突变血管平滑肌细胞氧化反应的影响
- 目的 探讨氧化应激在HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染人脑血管平滑肌细胞(HBVSMC)中的作用.方法 HTRA1及HTRA1-Mut基因慢病毒载体转染HBVSMC后,在特定的时间点收集NC、OE-WT H...
- 石瑜胡怀强王晓玲王敏曹秉振
