张伟
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
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- 14型肺炎球菌多糖双抗体夹心ELISA检测方法的建立
- 2020年
- 目的建立并验证测定14型肺炎球菌多糖(pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14,PS14)浓度的双抗体夹心ELISA。方法采用Protein G亲和层析纯化兔血清,得到兔抗PS14多克隆抗体(多抗)。以鼠抗PS14单克隆抗体(单抗)为捕获抗体,兔抗PS14多抗为检测抗体,碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG为二抗,PS14为参考品建立双抗体夹心ELISA。确定鼠抗PS14单抗和兔抗PS14多抗的工作浓度,建立标准曲线,并验证该方法的准确性、精密度和特异性,考察佐剂对该方法的影响。结果鼠抗PS14单抗的最适工作浓度为5 μg/ml,兔抗PS14多抗的最适工作浓度为1 μg/ml,标准曲线的范围为9.375 ~ 600.000 ng/ml,线性良好,相关系数为0.999。测定多糖样品的PS14回收率为110% ~ 140%,多糖蛋白结合物样品的PS14回收率为90% ~110%。平均批内和批间精密度分别是5.64%和7.14%。13价结合物混合样品的PS14回收率为85%~100%;含有佐剂的疫苗样品的PS14回收率为85% ~110%。结论成功建立了双抗体夹心ELISA,该方法准确性、精密度、特异性良好,且检测结果不受佐剂的影响,具有一定耐用性。
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- 关键词：链球菌疫苗酶联免疫吸附测定
- 磷酸铝佐剂对9V型肺炎球菌多糖结合物的免疫促进及琥珀酸的影响被引量：1
- 2022年
- 目的探讨不同性质的磷酸铝佐剂对9V型肺炎球菌多糖(Streptococcus pneumococcal 9V polysaccharide,9V-PS)结合物的免疫促进作用,及琥珀酸对免疫应答的影响。方法采用3种磷酸铝佐剂与9V-PS结合物制备疫苗,另外在相同配方的疫苗中加入琥珀酸,同时将无佐剂的9V-PS结合物作为对照。用所制疫苗皮下免疫小鼠,收集不同针次免疫后血清,ELISA测定免疫后小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度。结果采用不同磷酸铝佐剂的3种疫苗之间比较,小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度差异无统计学意义(t值为0.38~0.86,P值均>0.05)。磷酸铝佐剂配伍的疫苗与无佐剂组相比,小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度均显著提高,差异有统计学意义(t值为3.75~4.35,P值均<0.05);佐剂A和B组加入琥珀酸与未加入比较,小鼠血清中抗9V-PS IgG抗体浓度差异无统计学意义(t值分别为1.39、0.45,P值均>0.05)。结论磷酸铝佐剂可以显著提高9V-PS结合物的免疫应答。不同磷酸铝佐剂的免疫促进作用无明显差异。添加琥珀酸对免疫应答不产生明显影响。
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- 关键词：佐剂免疫磷酸铝琥珀酸
- 7F型肺炎链球菌多糖竞争ELISA检测方法的建立被引量：2
- 2016年
- 目的：建立检测7F型肺炎链球菌荚膜多糖的方法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）,检测发酵过程中多糖的浓度.方法：包被物为7F型肺炎链球菌多糖,竞争物为待测多糖,建立间接竞争ELISA方法,并验证其准确性和精密度.结果：最佳多糖包被质量浓度为2.5ug/ml,多糖抗体血清稀释度为1：8×104.在检测范围为2.5～30μg/mL时呈线性相关,7F的最低检测限为1.5μg/mL.回归方程为B/B0=-0.4075 Pn7F＋0.7632,R2=0.9952.样品加标回收率为95.13%-105%.结论：本研究新建的ELISA方法准确性和精密度较好,能特异性地检测7F型肺炎球菌多糖.
- 曾华英张伟林宏辉
- 关键词：肺炎链球菌多糖竞争ELISA
- 菌种筛选对1型肺炎链球菌产糖量的影响被引量：1
- 2014年
- 目的用无动物源性培养基筛选高产糖1型肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae semtype1，PN1）。方法配制无动物源性培养基，并用此培养基进行高产糖PN1单菌落筛选。比较筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量。结果无动物源性培养基筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量分别为420和960mg／L，筛选后PN1的产糖量明显高于筛选前PN1。结论以无动物源性培养基筛选PNI可使PN1的产糖量明显提高。
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- 关键词：链球菌肺炎多糖类菌种筛选
