张春雨
- 作品数：42 被引量：50H指数：6
- 供职机构：吉林省农业科学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅重点项目吉林省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 马铃薯Y病毒瞬时ELISA检测试剂盒的研制
- 马铃薯病毒检测方法主要有生物学检测法、电子显微镜检测法、分子生物学检测法和血清学检测法。ELISA属于血清学检测方法,具有高通量、不依赖特定仪器设备,稳定性好等优点,但操作繁琐耗时较长。为了建立马铃薯Y病毒(PVY)快速...
- 梁雨欣李小宇张春雨侯吉超王永志
- 关键词：马铃薯Y病毒单克隆抗体抗原表位
- 文献传递
- 吉林、黑龙江毛葱病毒病调查被引量：3
- 2021年
- 本研究为明确吉林和黑龙江省毛葱病毒病发生率,从两省5个地区共采集255份毛葱样品。根据毛葱4种主要病毒基因组序列设计特异性引物,对胡葱黄条病毒Shallot yellow stripe virus(SYSV)和青葱X病毒Shallot virus X(SVX)、洋葱黄矮病毒Onion yellow dwarf virus(OYDV)和葱潜隐病毒Shallot latent virus(SLV)进行双重RT-PCR检测。结果表明,229份样品检出病毒,带毒率为89.8%,SLV的检出率最高,达87.06%,OYDV次之,为36.86%,SYSV检出率偏低,为0.78%;同时存在病毒复合侵染,其中双病毒复合侵染为SLV和OYDV,检出率为33.3%;三病毒复合侵染为SYSV、OYDV和SLV,检出率为0.78%,未发现4种病毒复合侵染。本研究为吉林和黑龙江种植区毛葱病毒病防治提供了参考依据。
- 刘建青王永志周琦黄淑敏梁雨欣张春雨魏健程兆伟李小宇
- 关键词：毛葱病毒病双重RT-PCR
- 百合斑驳病毒靖宇分离物全基因组序列测定与进化分析被引量：1
- 2023年
- 以采自吉林省白山市靖宇县的野生百合感病叶片为试材,采用小RNA深度测序法检测到1株百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV),采用分段克隆方法,对LMoV靖宇分离物(LMoV-JY)的全基因组进行测定并分析,以期对吉林省百合病毒病的检测和防控提供参考依据。结果表明:LMoV-JY基因组大小为9648个核苷酸(nt)序列(GenBank登录号MT795719),该核苷酸序列在第154~9444位存在1个大的开放阅读框(ORF),编码1个多聚蛋白(分子量351.46kD)。LMoV-JY与GenBank中登录的其他LMoV分离物的全基因组核苷酸序列比较,其一致性为82.82%~97.85%,在氨基酸水平上的一致性为92.96%~98.64%,其中与百合斑驳病毒大连分离物LMoV-DL(HM222521)的一致性在该2种水平上均为最高。对比LMoV-JY外壳蛋白与其他54个分离物的氨基酸序列,发现可将LMoV分离物分为2个类群。
- 张春雨李小宇王晨黄瑞贤黄淑敏王永志
- 关键词：百合斑驳病毒基因组
- 基于全基因序列的中国北方3省(区)马铃薯Y病毒遗传多样性分析被引量：1
- 2020年
- 本研究以马铃薯Y病毒(PVY)全基因组为基础,分析吉林、黑龙江和内蒙古3省(区)PVY群体遗传多样性和群体分化,并评估突变、重组、选择等遗传力所起的作用。根据已报道的PVY全基因序列保守区设计4对引物,采用片段重叠法对来自内蒙古和吉林的24个PVY分离物全基因序列进行测定,并联合NCBI中已登录的9个黑龙江分离物全基因组序列进行遗传多样性参数评估、群体分化检验和分子变异等分析。结果显示,我国北方3省(区)PVY群体遗传多样性高,其中内蒙古和黑龙江PVY群体遗传多样性高于吉林群体,并且3个群体之间呈现一定程度的遗传分化。分子变异分析发现在PVY基因组中存在1786个变异位点,表明我国北方3省(区)PVY群体变异程度较高,并且这种高变异度有85.54%来自各个马铃薯种植区内PVY个体的遗传变异。重组分析和系统发育分析发现,我国北方3省(区)PVY群体中重组株系占比高达90.3%,并具有明显的株系多样性,表明PVY重组株系已成为我国北方3省(区)马铃薯种植区的流行株系。选择压力分析显示,使用FEL和IFEL法分别检测出501个和315个净化压力选择位点,这表明3省(区)PVY群体受净化选择压力为主。以上结果表明,中国北方3省(区)PVY群体遗传多样性高,突变、重组和自然选择都对遗传多样性和群体分化存在一定影响。
- 马俊丰李小宇张春雨周雪平王永志
- 关键词：基因组序列
- 在原核细胞中增殖功能性马铃薯Y病毒的方法
- 本发明涉及生物技术领域，具体而言，提供了一种在原核细胞中增殖功能性马铃薯Y病毒的方法。本发明通过在马铃薯Y病毒cDNA的类原核启动子区插入内含子，用于降低或消除类原核启动子区的启动子活性，经修饰马铃薯Y病毒cDNA编码的...
- 王永志苏颖李小宇张春雨 马俊丰
- 文献传递
- 转Cp4 epsps基因大豆快速DAS-ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2021年
- 为了快速检测转Cp4 epsps基因大豆,本研究以纯化后的CP4-EPSPS单克隆抗体1D12为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的羊抗CP4-EPSPS多克隆抗体8092为检测抗体,通过优化抗体工作浓度和抗原抗体反应时间,成功建立转Cp4 epsps基因大豆快速双抗夹心ELISA检测方法。结果显示:最佳检测条件为捕获抗体浓度10μg/mL,检测抗体浓度1.25μg/mL,样品与检测抗体先后加入酶标板37℃共同孵育60 min。该方法的检测范围为0.3125~80μg/mL,待检叶片、籽粒最佳检测范围为10~80倍稀释;板内变异系数为1.64%~5.42%,板间变异系数为3.05%~9.13%,符合ELISA定性试剂盒参考标准;对100份大豆叶片、20份大豆籽粒进行检测,与Western blot结果和标准结果进行比较,符合率为100%,表明该检测方法具有良好的准确性和重复性。该检测方法75 min内即可完成检测,适用于快速检测转Cp4 epsps基因大豆,为转Cp4 epsps基因快速检测试剂盒的开发奠定了基础。
- 候吉超李忠鹏梁雨欣张春雨李小宇王永志
- 关键词：大豆
- 一种利用中药渣生产的保健饲料添加剂及制备方法
- 本发明提供一种利用中药渣生产的保健饲料添加剂及制备方法，涉及饲料技术领域。一种利用中药渣生产的保健饲料添加剂，按照重量份数计，其主要原料包括：中药渣110～150份、植物粉15～25份、第一菌种8～18份、第二菌种0.5...
- 王永志李小宇张春雨
- 文献传递
- 马铃薯Y病毒瞬时ELISA检测试剂盒的研制
- 马铃薯病毒检测方法主要有生物学检测法、电子显微镜检测法、分子生物学检测法和血清学检测法.ELISA属于血清学检测方法,具有高通量、不依赖特定仪器设备,稳定性好等优点,但操作繁琐耗时较长.为了建立马铃薯Y病毒(PVY)快速...
- 梁雨欣李小宇张春雨侯吉超王永志
- 关键词：马铃薯Y病毒单克隆抗体
- CP4-EPSPS蛋白抗体的制备及其夹心ELISA定量检测方法的建立
- 2020年
- 为了快速高效地检测转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆,本研究利用已制备的CP4-EPSPS蛋白免疫实验动物,获得5株CP4-EPSPS蛋白鼠单克隆抗体及3份羊抗血清,建立了CP4-EPSPS蛋白双抗夹心酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,同时利用该方法对结荚期的Cp4 epsps转基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子进行定量检测。结果显示,最佳检测条件为捕获抗体1D12,工作浓度1.25μg/mL,包被酶标板,4℃静置过夜,检测样品20℃孵育45 min,检测抗体8092,工作浓度2.5μg/mL,20℃孵育30 min;CP4-EPSPS蛋白在模拟大豆环境中最低检测限为3.6 ng/mL,检测范围为7.5~125 ng/mL;重复性变异系数小于15%。利用上述检测条件,在转Cp4 epsps基因抗除草剂大豆的根、茎、叶、种子中均检测到CP4-EPSPS蛋白的表达,且各组织部位表达量差异显著,其中CP4-EPSPS蛋白在叶片中表达量最高,茎、种子、根中CP4-EPSPS蛋白表达量逐渐降低。
- 候吉超李忠鹏李小宇张春雨于寒松王永志
- 关键词：大豆抗体
- 非洲猪瘟病毒p30蛋白在本氏烟草中的表达及其抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2024年
- 为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗体间接ELISA检测方法,利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白,并以表达的蛋白作为包被抗原,对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列,按照本氏烟草密码子的偏好性,对p30基因(231~536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆,通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间,构建PVY-p30重组病毒质粒,以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片,14 d后,通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况,并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白,Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性,将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原,建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示,构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草;p30重组蛋白能够在本氏烟草叶片中表达,且具有良好的反应原性;纯化的p30重组蛋白效果较好,能够被p30蛋白单克隆抗体识别。建立的ELISA检测方法最佳反应条件为抗原质量浓度0.5 mg/L,37℃包被1 h;待检血清1∶400倍稀释,37℃孵育0.5 h;HRP标记二抗37℃孵育0.5 h;TMB室温避光显色10 min;阴阳性临界值为0.461。当ASFV阳性血清稀释度为1∶2560时,仍检测为阳性,具有较高的敏感性;该方法与其他常见病阳性血清不发生交叉反应,能够特异性地检测ASFV抗体;重复性试验显示批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%;该方法与ASFV商品化检测试剂盒相比,总体符合率为85.0%。结果表明,本研究构建的PVY-p30重组病毒载体能介导p30重组蛋白在本氏烟草中表达,以植物表达的p30重组蛋白为抗原建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法可用于疾病的临床检测及疫情监测,同时为可饲疫苗的研发提供了基础材料
- 刘悦魏天张春雨张建峰王成宇张芳毓朱日宁鞠安琪王思月曲磊张守峰扈荣良梁静王永志
- 关键词：间接ELISA非洲猪瘟病毒马铃薯Y病毒植物生物反应器
