- 过表达RIPK3对SH-SY5Y细胞CX3CL1基因表达的影响
- 2016年
- 【目的】建立受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)过表达的人神经母细胞瘤细胞SHSY5Y细胞模型,筛选表达水平受到RIPK3影响的基因,以探讨RIPK3在神经系统中可能具有的生物学效应。【方法】采用分子克隆的方式在实验组SH-SY5Y细胞内上调RIPK3的表达水平。激光共聚焦显微镜下观察GFP蛋白的表达情况确认转染结果;以Western blotting确认RIPK3表达变化。通过MTT实验中细胞增值活性的改变确认外源性RIPK3在细胞内是否具有生物学活性。通过转录组测序技术(RNAseq)从m RNA水平对对照组和实验组基因表达水平的变化进行检测,通过生物医学分析研发软件暨资料库(ingenuity pathway analysis,IPA)对RNAseq数据进行分析,获得重要的下游效应分子及相关信号通路,并对其相关作用分子表达发生的改变进行统计。采用Western blotting对部分实验数据进行验证。【结果】RIPK3表达水平上调后,实验组SH-SY5Y细胞增殖活性受到抑制,IPA分析结果显示:CX3CL1的表达水平出现明显上调;与其相关的部分信号分子也发生了相应的改变。其后Western blotting结果从蛋白水平验证了CX3CL1表达水平的变化。【结论】RIPK3能够在m RNA及蛋白水平上调节CX3CL1表达,并对其相关分子产生影响,进而在神经系统各种生理与病理条件下发挥重要的作用。
- 张国禄程世翔徐忠伟衣泰龙廖吉连涂悦张赛
- 关键词：神经母细胞瘤
- RIPK3蛋白对SH-SY5Y细胞损伤-修复相关基因表达的调节作用
- 赵明亮张国禄衣泰龙程世翔张赛
- RIPK3蛋白对SH-SY5Y细胞损伤-修复相关基因表达的调节作用
- 目的：受体相互作用蛋白激酶-3（Receptor-interactingproteinkinase3，RIPK3）是受体相互作用蛋白家族（Receptor-interactingproteinkinases，RIPKs）...
- 张国禄
- 关键词：SH-SY5Y细胞基因转录调控
- 受体相互作用蛋白-3分子功能及其在神经疾病中的研究进展
- 2015年
- 细胞死亡一直以来被简单分为凋亡和坏死两种主要形式,其中坏死被公认为是组织细胞受到损害因素下发生的被动、不可逆、非调控性的死亡过程。然而最新的研究证实,在某些特定条件下坏死仍可受到调控并具有被逆转的可能,这种新型细胞死亡方式被称为程序性坏死。程序性坏死途径参与了生物体的生长发育、衰老和死亡等生理学进程,尤其在多种神经系统疾病(颅脑创伤、感染、神经退行性病变)的发生、发展中扮演了重要角色。受体相互作用蛋白-3(RIP3)作为细胞凋亡和坏死之间相互转换的关键性分子,在介导神经细胞损伤的程序性坏死、NF-κB通路激活以及诱发线粒体活性氧自由基(ROS)的生成等机制中发挥着重要作用。本文就RIP3的分子功能及其与神经疾病的关系进展予以综述。
- 张国禄程世翔张赛徐忠伟涂悦
- 关键词：程序性坏死神经疾病
- RIPK3过表达对mTOR及其相关基因转录的调控作用被引量：2
- 2016年
- 目的探索受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)的下游信号通路。方法向实验组SH-SY5Y细胞内转染pCMV6-RIPK3质粒上调细胞内RIPK3的表达水平,对照组细胞转染相应的空载质粒。通过Western blot检测细胞内RIPK3的表达水平。3-(4,5-二甲基噻唑)[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl),MTT]实验获得2组细胞增殖曲线确定外源性RIPK3在细胞内具有的生物学活性。通过RNAseq检测2组细胞基因转录差异,并在生物通路分析(ingenuity pathway analysis,IPA)数据库中进行数据分析,获得RIPK3的下游信号通路及其中的关键分子哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)。采用微滴式数字化PCR(droplet digital PCR,ddPCR)对mTOR转录水平的差异进行验证。结果质粒DNA整合到细胞基因组内,Western blot提示外源性RIPK3在实验组细胞内稳定表达,MTT结果证明其在细胞内能够抑制细胞增殖。RNAseq及IPA分析结果提示过表达RIPK3能够导致mTOR转录水平发生上调,并对其下游的基因,包括固醇反应结合蛋白(sterol-response binding proteins,SREBPs)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70ribosomal S6protein kinases,S6K)、真核生物起始因子4E结合蛋白(eukaryotic initiation factor 4E-binding proteins,4E-BPs)和ULK(unc-51-like kinase)激酶复合体的转录具有明显的调节作用。ddPCR实验结果中mTOR表达改变趋势与RNAseq基本一致。结论 RIPK3能够调控mTOR及其下游信号通路中SREBPs、S6K、4E-BPs和ULK基因转录水平,进而在神经系统生长发育和疾病进展中发挥重要作用。
- 张国禄程世翔徐忠伟衣泰龙涂悦张赛
- 关键词：神经母细胞瘤基因表达调控
- RIPK3基因转染的SH-SY5Y细胞中HIF-1α基因及其信号通路相关基因表达变化被引量：1
- 2016年
- 目的观察受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)基因转染的神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中低氧诱导因子1α(HIF-1α)mRNA及其信号通路相关基因表达变化。方法构建表达RIPK3基因的p CMV6-AC-GFP质粒(重组质粒),培养SH-SY5Y细胞,分为实验组及对照组,分别转染重组质粒和空载质粒。采用Western blotting法检测细胞中的RIPK3蛋白,分别于培养8、14、20、26、32、38 h后,通过MTT实验检测细胞增殖情况(OD值)。采用转录组测序技术(RNAseq)及Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件检测并筛选RIPK3-HIF1α下游信号通路中的关键基因。采用微滴式数字PCR(dd PCR)检测两组细胞中的HIF-1αmRNA。结果实验组细胞中RIPK3蛋白相对表达量(0.806±0.097 5)高于对照组(0.455±0.088 6),P<0.05。随培养时间延长,实验组细胞增殖受到抑制。实验组细胞中HIF-1αmRNA相对表达量(0.015 43±0.003 47)低于对照组(0.046 28±0.010 26),P<0.05。在HIF-1α为核心的相互作用关系网络中,筛选出关键分子泛素缀合酶样蛋白(UBC)、希佩尔-林道蛋白(VHL)、转录延伸因子B多肽1(TCEB1)、血管内皮生长因子A(VEGFA)。结论 RIPK3基因转染SH-SY5Y后,细胞中HIF-1αmRNA表达下调,同时HIF-1α信号通路相关基因(UBC、VHL、TCEB1、VEGFA)的表达水平受到影响。
- 张国禄程世翔徐忠伟衣泰龙廖吉连涂悦张赛
- 关键词：低氧诱导因子1Α血管内皮生长因子A
- RIPK3蛋白对SH-SY5Y细胞损伤-修复相关基因表达的调节作用
- 目的 本实验采用SH-SY5Y细胞作为主要研究对象，通过上调细胞内RIPK3分子表达水平，检测细胞内损伤-修复相关基因表达变化情况。方法 通过质粒转染构建对照组和实验组细胞，通过MTT与Western blot实验验证外...
- 张国禄衣泰龙程世翔张赛
- 关键词：基因转录调控
- SH-SY5Y细胞中过表达RIPK3对ZFP36基因转录的影响
- 2016年
- 目的探讨SH-SY5Y细胞中受体相互作用蛋白激酶-3(RIPK3)下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法通过质粒转染的方式在实验组SH-SY5Y细胞内表达外源性RIPK3蛋白,将转染空载质粒载体SH-SY5Y细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白(GFP)在细胞中的表达情况以验证转染结果,Westernblot对外源性RIPK3表达进行验证。MTT法检测细胞增殖活性,观察过表达RIPK3对细胞活性的影响,以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术(RNAseq)分别检测2组细胞内基因转录丰度并应用IngenuityPathway Analysis(IPA)数据库进行分析,获得RIPK3下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化PCR(dd PCR)对部分RNAseq结果进行验证。结果外源性RIPK3在细胞内具有生物活性,能够抑制SH-SY5Y细胞的增殖。RNAseq数据经IPA分析后得出锌指蛋白36(ZFP36)为RIPK3下游效应分子,其相关效应分子包括血管内皮生长因子(VEGF)、人脱帽酶2(DCP2)、脑源性神经营养因子(BDNF)、肿瘤坏死因子(TNF)的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3能够参与对ZFP36以及与其相关效应分子的转录调控,进而在神经系统的发育、炎症和肿瘤发生等生理、病理过程中发挥重要作用。
- 张国禄程世翔徐忠伟衣泰龙廖吉连涂悦张赛
- 关键词：锌指血管内皮生长因子类肿瘤坏死因子类
- RIPK3蛋白对SH-SY5Y细胞损伤-修复相关基因表达的调节作用
- 张国禄衣泰龙程世翔张赛
