李焕
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：西南大学生命科学学院三峡库区生态环境教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 尼罗罗非鱼IgT重链基因的克隆与表达分析被引量：1
- 2016年
- 目的进一步了解尼罗罗非鱼免疫球蛋白的结构和功能。方法通过RACE技术得到Ig T c DNA全长,从m RNA水平检测其在不同发育时期和不同组织中的表达情况,并通过q PCR检测在嗜水气单胞菌刺激情况下Ig T和Ig M的免疫应答规律,构建重组表达载体体外表达部分恒定区序列并制备单克隆抗体。结果克隆得到全长为1 759 bp的c DNA序列,编码506个氨基酸,表达重组蛋白,纯化得到目标蛋白,并获得CH3的单克隆抗体。RT-PCR结果显示,Ig T在受精后的第8天即可检测到,Ig T在4月龄鱼头肾和脾脏中表达,在6月龄鱼中,除在以上2个组织中表达之外,在皮肤、肠、鳃、卵巢和精巢中也可检测到。嗜水气单胞菌刺激后,q PCR结果显示:Ig T和Ig M在头肾、肾、脾脏、肠、鳃和皮肤中均有不同程度的上调。结论克隆得到尼罗罗非鱼Ig T重链c DNA序列并成功制备了单克隆抗体,为免疫球蛋白及其免疫系统的研究奠定了基础。
- 李焕张武凤张小萍
- 关键词：尼罗罗非鱼IG蛋白表达嗜水气单胞菌
- 胭脂鱼IgM重链基因克隆与表达分析被引量：1
- 2016年
- 目的认识胭脂鱼IgM的结构与功能,研究其免疫应答规律。方法通过同源克隆和RACE技术构建胭脂鱼IgMμcDNA全长,重组表达恒定区序列并制备抗血清,分别从mRNA水平和蛋白水平检测胭脂鱼IgM各组织及发育早期的表达情况;利用抗血清探究经灭活嗜水气单胞菌免疫后胭脂鱼IgM免疫应答规律。结果获得胭脂鱼IgμcDNA全序列,长2028 bp,编码580 aa,重组表达IgMμCH_(1-4)区,获得相对分子质量约45 000的重组蛋白,成功制备rIgM多抗,免疫印迹分析可见,anti-rIgM抗血清能够特异性识别rIgM和胭脂鱼血清IgM;各组织RT-PCR结果表明,被检测组织除肌肉、皮肤和心脏外均有IgM表达;发育各时期RT-PCR结果显示,胭脂鱼卵中含有IgM转录本,出膜第30天可明显检测到IgM表达。Western blot检测结果表明,免疫相关组织IgM含量均较高,心脏、皮肤未检测到IgM转录本,却含有大量的IgM蛋白,脑和肌肉始终未检测到IgM蛋白。灭活嗜水气单胞菌免疫实验表明,胭脂鱼在初次免疫第21天菌特异性IgM滴度有明显变化,加强免疫后迅速升高,并在最高滴度维持2个月后缓慢降低。结论成功获得濒危物种胭脂鱼IgMμcDNA全序列及anti-IgM多克隆抗体,为胭脂鱼免疫球蛋白结构分析、免疫监测及抗原诊断提供有力工具。
- 王亚凤张小萍李焕王志坚
- 关键词：胭脂鱼IGM抗血清嗜水气单胞菌
