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辣椒胶孢炭疽菌CFEM效应因子鉴定及转录组分析被引量：2: 2021年; [目的]本文旨在研究辣椒胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)常见真菌细胞外膜蛋白(common in several fungal extracellular membrane proteins,CFEM)的组成和结构。[方法]以辣椒胶孢炭疽菌CSLL^(-1)1的基因组为研究对象,通过生物信息学分析其CFEM效应因子的信号肽、跨膜结构域和亚细胞定位信号等结构特征;利用转录组学途径分析其在病菌与寄主互作过程中的表达特征,并对部分CFEM效应因子进行亚细胞定位分析。[结果]CSLL^(-1)1共编码30个CFEM效应因子,其中26个具有信号肽并可分泌至胞外;17个含有数目不等的跨膜结构域。CFEM效应因子Cghn02929、Cghn09727、Cghn12645和Cghn14146在侵染辣椒果实各阶段均具有较高表达水平,推测其可能参与病菌整个侵染过程。Cghn14146、Cghn09727和Cghn13279定位于细胞膜和细胞质,而Cghn02929、Cghn13471定位于细胞核、细胞膜和细胞质。[结论]明确了辣椒胶孢炭疽菌CFEM效应因子的组成和结构特征,探明了CFEM效应因子间的表达水平和亚细胞定位差异。; 刘思珍欧阳超满益龙盛家伟陈岳张鑫郑立敏李智强李大伟张德咏刘勇王运生谭新球; 关键词：辣椒胶孢炭疽菌生物信息学分析亚细胞定位

番茄斑萎病毒核衣壳蛋白N及膜多糖蛋白Gn的多克隆抗体制备及应用被引量：5: 2018年; 由番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt orthotospovirus (TSWV)侵染引起的番茄斑萎病毒病在我国蔬菜、花卉等作物上造成了严重的经济损失。本研究克隆了TSWV核衣蛋白N基因及膜多糖蛋白Gn基因,利用Gateway系统获得N和Gn基因的原核表达载体。将其转化到大肠杆菌表达菌株Rosetta (DE3)细胞内,IPTG诱导表达N蛋白和Gn蛋白,以此为抗原分别免疫新西兰大白兔,制备N蛋白和Gn蛋白的多克隆抗体。Western blot检测结果表明,N蛋白的多克隆抗体能够与N蛋白发生特异性结合反应,间接酶联免疫吸附(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,in-ELISA)分析检测表明抗体滴度为1∶12 800,而Gn蛋白的多克隆抗体特异性差,效价未检出。本研究制备的N蛋白多克隆抗体可用于田间病株的病害诊断,同时有助于开展病毒在介体昆虫内定位、病毒和介体昆虫互作及功能分析的研究。; 潘慧赵忠豪章松柏张德咏张德咏张洁李俊凯; 关键词：番茄斑萎病毒 N蛋白多克隆抗体

番茄斑萎病毒侵染的西花蓟马酵母双杂交cDNA文库的构建和分析被引量：4: 2022年; 【目的】探明番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt tospovirus,TSWV)和介体西花蓟马(Frankliniella occidentalis)之间的分子互作关系,探索介体因子如何参与病毒侵染过程,以期为解析西花蓟马蛋白调控介体传毒机理奠定基础。【方法】通过若虫期饲毒获得高带毒西花蓟马群体,借助SMART技术构建TSWV侵染的西花蓟马酵母双杂交三框cDNA文库。【结果】3种读码框初级cDNA文库的库容量分别为3.0×10^(6)、2.0×10^(6)和2.0×10^(6) cfu,文库实际扩增基数大于1.5×10^(6) cfu(3种读码框均大于5×10^(5))。扩增文库平均插入片段主要分布在0.5~3.0 kb。对文库随机挑选16个克隆,测序后与GenBank数据库比对,结果显示各插入片段具有同源序列。【结论】构建的cDNA文库具有较高的库容量和重组率,可用于后续筛选西花蓟马与TSWV互作的蛋白。; 叶倩卢冰心魏艳陈建斌刘勇张松柏章松柏郑立敏; 关键词：番茄斑萎病毒西花蓟马

番茄抗番茄斑萎病毒病材料的创制被引量：2: 2021年; 番茄斑萎病毒(tamato spotted wilt virus, TSWV)是世界10种危害性最大的植物病毒之一,番茄受侵染后损失可达80%甚至绝收。近年来番茄斑萎病毒越来越严重,抗病品种育种速度远远不能满足市场需要,为了加快抗番茄斑萎病毒病的育种速度,本研究以长沙、昆明、三亚三地穿梭育种,达到一年三代,结合分子标记辅助筛选,2年内能获得抗番茄斑萎病毒病的材料,为育种者提供快速转育的新方法。; 白占兵欧阳娴郑立敏周晓波周晓波谭放军张战泓; 关键词：番茄番茄斑萎病毒抗病育种穿梭育种

SRBSDV P8蛋白的多克隆抗体制备及其应用被引量：5: 2020年; 克隆了南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)的核心蛋白P8基因,并利用Gateway原核表达系统,将P8基因构建到原核表达载体pDEST17上,经转化大肠杆菌表达菌株Rosetta细胞,通过IPTG诱导P8蛋白表达。以原核表达的P8蛋白作为抗原免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。制备的多克隆抗体经Western blotting检测,结果显示抗体能够特异性地结合P8蛋白。Dot-ELISA分析表明,制备的P8抗体能够检测感染SRBSDV的水稻植株。间接ELISA分析表明,抗体滴度为1∶3 200。说明本实验所制备的抗体可用于田间南方水稻黑条矮缩病的检测,同时也为研究SRBSDV P8蛋白的功能及其与昆虫和寄主之间的互作奠定了基础。; 赵忠豪潘慧刘勇史晓斌章松柏郑立敏; 关键词：水稻南方水稻黑条矮缩病毒多克隆抗体

内蒙古和贵州地区粉虱发生对番茄褪绿病毒流行的影响被引量：1: 2020年; 番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)对我国番茄种植业破坏极大,而粉虱类昆虫是其主要传播介体。本研究调查了我国内蒙古自治区赤峰市和贵州省贵阳市的番茄褪绿病毒病发生情况,发现赤峰市的发病率为73.3%,贵阳市的发病率为53.3%。两个地区均存在Q型烟粉虱和温室白粉虱,赤峰市的Q型烟粉虱和温室白粉虱分别占75.9%和24.1%;贵阳市的Q型烟粉虱和温室白粉虱分别占39.8%和60.2%。对两个地区的两种粉虱种群在室内进行传毒特性研究,结果发现,经过48 h获毒后Q型烟粉虱和温室白粉虱的获毒量没有明显差异,但无论1头或10头粉虱,Q型烟粉虱的传毒量都高于温室白粉虱。结果说明,近年来随着Q型烟粉虱发生的日益严重,番茄褪绿病毒通过Q型烟粉虱的传播值得人们重视和进一步研究。; 王帅鑫史晓斌张战泓郑立敏刘勇张德咏谭新球周序国; 关键词：Q型烟粉虱温室白粉虱

湖南省长沙市番茄黄化曲叶病毒的检测与系统发育分析被引量：2: 2018年; 【目的】对湖南省长沙市发生的疑似番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)样本进行检测,明确TYLCV在湖南长沙的发生情况,为TYLCV的防控提供科学依据。【方法】2016年3和11月,在湖南长沙采集疑似TYLCV样本48份,采用已发表的TYLCV不同株系的全基因组序列,利用DNAMAN进行序列比对,根据保守序列设计特异性引物TY-T-F和TYT-R、TY-P-F和TY-P-R对番茄样本的DNA进行PCR、Southern印迹杂交(Sourthern blotting)检测和系统发育分析。对呈阳性条带的PCR产物进行切胶回收并送样测序,在NCBI上进行BLAST比对分析,利用系统发育分析TYLCV湖南长沙分离物与国内外株系的相似性。【结果】采集的48份样本中有42份样本能扩增出目的条带,阳性检出率为87.5%;将42个阳性克隆序列导入MEGA 7.0,得到27个分离物。对测序结果进行同源性分析、多重比对、聚类分析及进化分析,结果显示27个湖南长沙TYLCV分离物与我国其他省(市)分离物的相似性在98.5%~99.8%,与伊朗株系(AJ132711和GU076453)、墨西哥株系(FJ012358)、澳大利亚株系(GU178814)和葡萄牙株系(AF105975)的相似性分别介于90.7%~91.5%、95.4%~95.5%、98.6%~98.8%和99.3%~99.4%。【结论】TYLCV已在湖南长沙发生危害,需加强检疫工作,防止从疫区调运感病番茄,以控制病害扩散蔓延。; 鲁清华张宇张松柏彭静张松柏彭静郑立敏; 关键词：番茄黄化曲叶病毒番茄

本氏烟中与番茄斑萎病毒N蛋白互作的寄主因子的筛选被引量：2: 2021年; 【目的】番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是植物多分体负义链RNA病毒的代表性成员。TSWV的N蛋白在病毒感染的寄主植物内表达量高,可能调控病毒对寄主的感病,探究N蛋白通过影响哪些寄主蛋白的表达来完成病毒的侵染,以期为深入解析寄主蛋白调控病毒的分子机制提供理论基础,为后续有效的防控TSWV提供新的思路。【方法】以TSWV N蛋白作为诱饵蛋白,采用酵母双杂交(Yeast two-hybrid,Y2H)的方法筛选本氏烟内与TSWV N相互作用的寄主蛋白。【结果】共筛选获得15种与TSWV N相互作用的寄主蛋白。【结论】这些介体因子主要参与色素的生物合成、类囊体膜的组装、植物防御反应和核糖体生物发生的过程,调节脂质代谢和细胞功能,可能是翻译调控的辅助蛋白,在植物发育和对非生物胁迫的反应中发挥着重要作用。; 苗淑月高晓晓郑立敏陈建斌赵星月程菊娥陈莎章松柏刘勇; 关键词：N蛋白酵母双杂交

番茄环纹斑点病毒侵染辣椒挥发物成分分析及对西花蓟马行为反应影响被引量：4: 2018年; 本试验以辣椒为寄主植物,研究西花蓟马对番茄环纹斑点病毒侵染辣椒后的行为反应,比较分析病毒侵染前后辣椒挥发物的异同。研究发现,与模拟接毒辣椒相比,西花蓟马偏好选择机械接毒辣椒,但在产卵量上二者没有显著性差异。从模拟接毒和带毒辣椒植株挥发物中共收集26种化合物,含量差异显著的物质有14种。结果表明,西花蓟马对机械接毒辣椒植株有一定的偏好,番茄环纹斑点病毒侵染能诱导辣椒植株挥发物种类和含量的变化。; 郑雪陈勇郑立敏郑宽瑜赵立华陈永对张洁; 关键词：西花蓟马辣椒挥发物

番茄斑萎病毒及其与传播介体西花蓟马互作的研究进展被引量：10: 2017年; 番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)是一种世界性危害农业生产的植物病毒,主要通过西花蓟马(Frankliniella occidentalis)以持久增殖型方式进行传播,可对番茄、生菜、辣椒等蔬菜及花卉、烟草等经济作物生产造成严重损失。从番茄斑萎病毒的特征、传播介体、传播途径、病毒与介体互作对番茄斑萎病毒传播的影响等方面进行归纳总结,旨为番茄斑萎病的预防和控制提供参考。; 陈建斌刘勇郑立敏张松柏杨春晓张德咏; 关键词：番茄斑萎病毒西花蓟马

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郑立敏

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