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靶序列富集多重PCR结合DHPLC同时检测5种食源性致病菌被引量：5: 2015年; 目的建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌5种食源性致病菌的简便、灵敏的高通量方法。方法根据GenBank公布的5种致病菌的特异性靶基因序列,设计5对特异性引物,与通用引物连接构成复合引物。经过反应条件的优化,建立了5种致病菌的靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)扩增方法,扩增产物采用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术进行检测。结果采用Tem-PCR-DHPLC方法,检测48株试验菌株,未发现非特异性结果。对5种致病菌检测灵敏度,除金黄色葡萄球菌为620 cfu/mL外,其余都小于100 cfu/mL。对4种样品的检测结果与国家标准方法相符合。结论 Tem-PCR-DHPLC检测方法,相比传统多重PCR方法,能有效地解决引物扩增效率不均衡的问题,不需优化引物浓度,方法特异性强,灵敏度高,具有较好的实用性。; 刘忠梅曾繁华罗佳徐义刚曲敏莫春生刘新亮李苏龙; 关键词：变性高效液相色谱沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏菌志贺氏菌

3种食源性致病菌Tem-PCR检测方法的建立被引量：16: 2016年; 应用靶序列富集多重聚合酶链式反应（t arget-enriched multiplex-polymerase chain reaction,Tem-PCR）技术建立金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌3种食源性致病菌的快速检测方法。分别以金黄色葡萄球菌fem A基因、沙门氏菌inv A基因和志贺氏菌ipa H基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了Tem-PCR检测方法。结果显示,建立的Tem-PCR方法特异性强,对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的检测灵敏度分别为1.1×10^3、2×10^3 CFU/m L和1.2×10^3 CFU/m L。Tem-PCR检测方法有效地解决了传统多重PCR引物扩增效率不均衡的问题。; 刘忠梅徐义刚曲敏莫春生刘新亮李苏龙; 关键词：沙门氏菌金黄色葡萄球菌志贺氏菌

应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究被引量：1: 2016年; 应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题.; 曲敏莫春生刘佳刘忠梅徐义刚李苏龙; 关键词：沙门氏菌单核细胞增生李斯特氏菌

食源性致病菌Tem-PCR结合DHPLC高通量检测技术的研究: 在食源性致病菌的检测中,利用多重PCR扩增存在效率不均衡的问题,通过提高检测效率,并检测通量,拟建立起金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌和大肠埃希氏菌0157等五种食源性致病菌的检测方法,即简便、...; 莫春生; 关键词：食源性致病菌变性高效液相色谱; 文献传递

冰提苜蓿冰结构蛋白及其对冷冻面团的影响被引量：1: 2017年; 以紫花苜蓿草粉为原料,采用冰结合磷酸盐缓冲溶液法提取苜蓿冰结构蛋白。通过对苜蓿冰结构蛋白提取率的计算,对提取过程中的p H值、缓冲溶液的浓度、料液质量体积比进行优化。经单因素实验及响应曲面实验得到提取苜蓿冰洁构蛋白的最佳工艺参数为:料液质量体积比为1 g∶20 m L,缓冲液p H 8.0,磷酸盐缓冲液浓度为61 mmol/L,其最终提取率可达到2.87%。利用生物显微镜对苜蓿冰结构蛋白的冰晶形态进行观察,可以观测到许多体积小、且呈现六棱型及多边型的不规则形状,说明其对冰晶生长及冰晶形态的抑制与修饰效果显著,具有很好的抗冻活性。利用SDS-PAGE对苜蓿冰洁构蛋白进行检测,确定其蛋白质相对分子质量约为52 000,苜蓿冰结构蛋白应用到冷冻面团中发现可改善面团的品质。; 曲敏李凌俐刘羽佳陈凤莲孙兆国鲍欢莫春生; 关键词：苜蓿冰结构蛋白冰晶冷冻面团

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莫春生