苏少敏
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠miR-21慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达被引量：2
- 2015年
- 目的采用分子生物学方法构建miR-21慢病毒载体,并感染骨髓间充质干细胞（MSCs）,建立稳定表达miR-21的MSCs细胞系。方法合成大鼠miR-21基因序列,进行PCR扩增后,连接到慢病毒表达质粒p LVX-shRNA2中。对其进行双酶切及基因测序鉴定,证实载体p LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p的成功构建。对载体进行包装、测定病毒滴度。分4组：MSCs组不转染病毒液,空载组转染空载病毒液,miR-21组1用miR-21慢病毒载体以MOI 20转染MSCs,miR-21组2用miR-21慢病毒载体以MOI 40转染MSCs。将慢病毒颗粒以不同感染复数（MOI）感染MSCs,检测感染效率,使用实时定量PCR法检测MSCs中miR-21的表达。结果目的基因与慢病毒载体成功连接。病毒滴度约为6×10～8CFU/m L。载体成功感染MSCs,转染效率达90%以上。实时定量PCR检测结果证实miR-21组1（MOI为20）、miR-21组2（MOI为40）miR-21表达量分别为4.05±0.07、4.06±0.04,与MSCs组（1.07±0.05）及空载组（1.12±0.05）相比差异有统计学意义（F=3 014.962,P=0.000）。结论采用分子生物学方法成功构建了大鼠miR-21慢病毒载体系统p LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,并成功转染MSCs,得到稳定表达miR-21的MSCs细胞系,从而为进一步研究miR-21的生物学特性提供实验基础。
- 付霞霏何援利纪露露苏少敏阮晓珍
- 关键词：MIR-21慢病毒骨髓间充质干细胞
