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中华绒螯蟹Elovl6基因及其克隆方法: 本发明涉及中华绒螯蟹Elovl6基因和其克隆方法，该方法包括：(1)对不同物种的Elovl6氨基酸序列进行比对，根据对应的保守区域设计引物Elovl6-F1/Elovl6-R1，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成cDNA...; 施秋燕杨志刚杨青魏帮鸿刘青成永旭王健懿杨筱珍

中华绒螯蟹延长酶6(ELOVL6)基因全长cDNA的克隆及其表达分析: 高度不饱和脂肪酸是一类重要的营养成分,延长酶是其合成的关键酶.目前为止未见有中华绒螯蟹延长酶基因的相关报道.本文根据延长酶6的保守序列设计引物,采用RT-PCR和RACE技术,首次克隆得到中华绒螯蟹延长酶6ELOVL6基...; 施秋燕杨志刚杨青成永旭; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆

中华绒螯蟹Δ9-脂肪酸去饱和酶基因克隆和真核表达系统的构建被引量：1: 2017年; Δ9-脂肪酸去饱和酶是多不饱和脂肪酸合成途径的关键酶之一,可催化脂肪酸链上特定位置形成双键。本研究在已克隆到中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)的Δ9-脂肪酸去饱和酶(Δ9 fatty acyl-Co A desaturase,Δ9-FAD)基因基础上,为进一步了解其功能,根据中华绒螯蟹Δ9-FAD基因c DNA序列(accession number:JQ693685)以及真核表达载体p PIC3.5K,设计引物并在其上下游分别加入Bam HⅠ和Eco RⅠ酶切位点;利用反转录PCR(RT-PCR)技术,克隆其开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,构建重组质粒p PIC3.5k-Δ9-FAD;利用电穿孔仪将经限制性内切酶SacⅠ线性化后的重组质粒p PIC3.5k-Δ9-FAD转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115菌株中。经筛选与PCR验证,得到含有重组质粒p PIC3.5k-Δ9-FAD的毕赤酵母转化株。本实验成功构建了中华绒螯蟹Δ9-脂肪酸去饱和酶的毕赤酵母表达系统,为深入研究Δ9-脂肪酸去饱和酶的功能做了基础性的工作。; 杨青杨志刚魏帮鸿施秋燕刘启斌; 关键词：真核表达载体毕赤酵母

中华绒螯蟹FAD6-b基因的全长克隆及原核表达分析被引量：3: 2016年; 根据已登录的中华绒螯蟹一种Δ6去饱和酶基因(Accession Number:JX946434)及菁夜蛾去饱和酶基因(Accession Number:KJ622055.1)的保守区设计引物,通过逆转录PCR以及RACE技术克隆了中华绒螯蟹另一种Δ6去饱和酶基因FAD6-b的全长序列。经序列分析,中华绒螯蟹FAD6-b cDNA全长为2 310 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 326 bp,共编码442个氨基酸(Accession Number:KP876058),理论分子量为50.86 ku,理论等电点为8.47,FAD6-b基因的氨基酸序列与已公布的一条中华绒螯蟹Δ6去饱和酶基因的一致性为76%。原核表达载体构建及其表达实验表明,中华绒螯蟹FAD6-b基因成功重组到原核表达载体pCold-TF DNA中,重组质粒pCold TF-fad6b在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达,经SDS-PAGE电泳分析表明,IPTG诱导后的重组菌出现了单一的蛋白条带,且大小与预期(105.86 ku)一致,可溶性分析显示目的蛋白主要存在于蛋白上清液中。对重组蛋白进行纯化,蛋白纯化液经电泳检测后显示出特异性单一条带,进一步证明了pCold TF-fad6b的成功构建和表达。目的蛋白经Western-blotting检测,结果表明获得的重组蛋白与6×His抗体进行了特异性结合,显示出良好的免疫学活性。; 杨志刚姚琴琴成永旭施秋燕杨青何杰马明君王瑶常东; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆原核表达

有机肥发酵技术研究进展被引量：6: 2016年; 近年来,随着我国经济的不断发展,畜禽养殖业也得到了迅猛的发展,这使得畜禽粪便污染问题逐渐加剧,但畜禽粪便中含有较多的蛋白质,且必需氨基酸、粗纤维、矿物质以及维生素含量丰富~〔1〕,是一种非常好的资源。为了解决畜禽粪便带来的污染问题,我们尝试了一系列方法,其中发酵是最经济的方法,它不仅可减少畜禽粪便带来的污染,还可将畜禽粪资源化,因此该技术受到了人们的广泛关注。; 魏帮鸿杨志刚林月霞马天利王健懿杨青; 关键词：发酵技术有机肥施用维生素含量粪便污染发酵原料微生物菌

中华绒螯蟹ELOVL6 cDNA全长克隆及其表达分析被引量：7: 2016年; 为了探究中华绒螯蟹自身脂肪酸合成能力,采用RACE技术,克隆获得中华绒螯蟹ELOVL6 c DNA序列全长(Gen Bank accession:KT779219)。该序列全长2247 bp,包括235、873和1139 bp的5'非编码区(5'-UTR)、开放阅读框(ORF)和3'非编码区(3'-UTR),编码290个氨基酸(AA),具有ELOVL家族的全部特征:6个跨膜区、高度保守的组氨酸簇HXXHH、多个保守区以及内质网滞留信号KXKXX。分析发育树表明,ELOVL2与ELOVL5聚为一支,ELOVL6聚为另一支,其中中华绒螯蟹ELOVL6与其他节肢动物ELOVL6聚为一支,与凡纳滨对虾聚为一小支。采用异源表达方法研究ELOVL6编码的蛋白质对脂肪酸的作用,GC-MS结果显示,转基因的酵母培养物C16:0和C16:1n-7含量下降,而C18:0和C18:1n-9的含量升高,同时有新产物C18:1n-7产生。通过荧光定量PCR(q PCR)技术研究ELOVL6基因在中华绒螯蟹不同组织及不同脂肪源喂养下的表达情况,显示该基因在肠道、胃、心脏、肝胰腺、胸神经节、肌肉、眼柄、鳃和脑神经节9个组织均有表达,其中在肝胰腺中表达量最高,显著高于其他组织;在不同脂肪源饲喂的结果中,肝胰腺、肌肉、卵巢和精巢4个组织中均有表达,并且各组织在全鱼油组饲喂下表达量最低,其中用全豆油组饲喂后,肝胰腺中的表达情况显著升高,明显高于全鱼油组和鱼油豆油混合组。以上结果综合表明,中华绒螯蟹中ELOVL6能够催化C16的饱和及C16的单不饱和脂肪酸延长,同时受到饲料中不同脂肪源的一定影响,这为探究中华绒螯蟹PUFA合成途径及脂肪酸调控机制提供了依据。; 施秋燕杨志刚姚琴琴成永旭杨青魏帮鸿; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆异源表达

中华绒螯蟹高不饱和脂肪酸合成相关基因的初步研究: 高度不饱和脂肪酸(High unsaturated fatty acid,HUFA)是中华绒螯蟹的重要脂肪酸,在中华绒螯蟹繁殖、成活、生长和蜕壳等众多方面都起着无法代替的作用,其在肝胰腺、肌肉等可食部分的含量是决定中华绒...; 杨志刚魏帮鸿成永旭杨青施秋燕姚琴琴郭子好; 关键词：中华绒螯蟹高度不饱和脂肪酸脂肪酸去饱和酶

中华绒螯蟹Elovl6基因及其克隆方法: 本发明涉及中华绒螯蟹Elovl6基因和其克隆方法，该方法包括：(1)对不同物种的Elovl6氨基酸序列进行比对，根据对应的保守区域设计引物Elovl6‑F1/Elovl6‑R1，将提取的中华绒螯蟹总RNA反转录成cDNA...; 施秋燕杨志刚杨青魏帮鸿刘青成永旭王健懿杨筱珍

中华绒螯蟹延长酶基因的克隆及其在不同脂肪水平饲料下的表达分析: 本试验根据延长酶保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术及cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次克隆得到中华绒螯蟹脂肪酸延长酶(elongase of very long chain fa...; 施秋燕杨志刚成永旭姚琴琴杨青徐泽文徐蕾; 关键词：中华绒螯蟹基因克隆

一种中华绒螯蟹的delta6去饱和酶基因及其克隆方法: 中华绒螯蟹的delta6去饱和酶基因及其克隆方法，该方法包括步骤：(1)根据Genebank中华绒螯蟹和菁夜蛾的delta6去饱和酶基因进行对比，获得保守序列，设计保守区序列引物FAD6-F1(+)/FAD6-R1(-)...; 杨志刚魏帮鸿施秋燕姚琴琴杨青刘青成永旭王健懿杨筱珍

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杨青

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