陈明洁 作品数:42 被引量:297 H指数:10 供职机构: 华中科技大学生命科学与技术学院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 医药卫生 文化科学 更多>>
转基因小麦Puroindoline蛋白SDS-PAGE方法的研究与应用 被引量:1 2006年 小麦嘌呤吲哚蛋白(Puroindoline)是优质遗传特性硬度的生化标记,对小麦磨粉品质起决定性作用。对目前分析此类蛋白的两类Triton-X-114和Tricine-SDS-PAGE系统进行了优化和比较,建立了详细的适合半子粒分离Pin蛋白的电泳方法。采用此法检测转pinA基因的硬粒小麦P34的后代以及转基因硬粒小麦之间杂交子代的外源基因pinA的表达情况,取得了良好的效果。该方法为Puroindoline蛋白的进一步研究奠定了基础,为小麦品质生化和分子标记辅助育种提供了方法。 张金锐 陈明洁 姜泽群 宋斐 熊晓燕 何光源关键词:小麦 SDS-PAGE 牡山羊草Aegilops juvenalis Puroindoline b基因的克隆 2005年 Puro indo line a(P ina)和puro indo line b(P inb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦P inb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对六倍体牡山羊草A eg ilop s juvena lis(UUMM DD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行P inb基因扩增、克隆和序列测定,发现了两个新型P inb等位基因P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2。该基因全长360 bp,编码119个氨基酸残基。它编码的蛋白和麦类作物Puro indo line B(P inB)的成熟蛋白有非常高的同源性,具有麦类作物P inB蛋白所特有的W PTKWW K的色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.C ap ito le的P inb-D 1a相比较,其核苷酸同源性为93.1%、93.3%,氨基酸同源性为90.8%、92.4%。P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2分别含有11和9个氨基酸变异位点。RT-PCR证实了P inb-a lle le-2基因在籽粒胚乳中的表达。Sou thern B lot分析结果表明,牡山羊草中含有两个拷贝的P inb基因,其中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。 陈明洁 方倜 罗立廷 杨广笑 何光源关键词:PUROINDOLINE 籽粒硬度 克隆 基因组学案例式教学方法的探索与实践 被引量:6 2017年 案例式教学是一种有效启发学生思维、引导学生探索、鼓励学生创新、培养学生自主学习能力的教学方法。基因组学是现代生命科学"组学"理论体系和研究方法中的核心,是生命科学的前沿学科和交叉学科,已成为高校生命科学专业主干课程。为提高基因组学课程的教学质量,在基因组学教学中,我们从学科前沿、研究热点、最新研究成果以及授课教师的研究项目中,精选研究案例,通过案例式教学,将科学研究融入到课堂教学中。采取这种案例式教学方法,极大地激发学生学习热情,充分调动学生学习的主动性,提高了教学质量;同时能引导有兴趣的学生参加到老师的科研项目中,实现了教学和科研相互促进,达到了培养创新性人才的目的。 陈明洁 王擎 常俊丽 何光源 杨广笑关键词:基因组学 案例式教学 教研结合 湖北推广小麦品种(系)高分子量麦谷蛋白亚基组成分析 被引量:3 2004年 应用SDS-PAGE技术分析了45份湖北推广小麦品种(系)籽粒的高分子量麦谷蛋白亚基组成。40份材料的高分子量麦谷蛋白亚基组成为同质,5份为异质。在Glu-1位点共检测到9种等位基因变异类型,其中Glu-A1位点有"1、2*、Null"3种变异类型,Glu-B1位点有"7、7+8、7+9、14+15"4种,Glu-D1位点有"2+12、5+10"2种。"Null、7+8、2+12"是主要亚基,它们的频率分别是62.5%、60%和72.5%。亚基组合类型有12种,其中(Null,7+8,2+12)亚基组合占30.0%,(1,7+8,2+12)、(1,14+15,2+12)、(Null,7+9,2+12)、(Null,7+8,5+10)4种组合的频率都在10%以上,这5种亚基组合占总组合的72.5%。供试小麦材料品质评分在5~10之间,平均评分为7.0。含5+10亚基的品种(系)所占比例低,是湖北小麦烘烤品质较差的部分原因。 刘勇 何光源 李同恩 陈明洁 何勇刚 SHEWRY Peter Robert关键词:小麦 高分子量麦谷蛋白亚基 褐藻多糖硫酸酯对神经细胞增殖的影响 被引量:1 2015年 目的 观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan)对人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞增殖的影响,探讨其分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法观察Fucoidan对SH-SY5Y细胞增殖、细胞糖氧剥夺损伤及糖氧剥夺/再灌注损伤的影响;采用碘化丙锭(PI)染色和流式细胞术检测Fucoidan处理后细胞周期的变化;通过Western blot检测细胞周期调控因子和凋亡调控因子的表达水平的变化.结果 低浓度Fucoidan促进细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性,药物作用48 h后,0,6~1.0 g/L Fucoidan显著促进细胞增殖,其中0.8 g/L Fucoidan处理组比对照组细胞增殖率提高63.6%,0.8 g/L Fucoidan对SH-SY5Y细胞的糖氧剥夺损伤及糖氧剥夺/再灌注损伤均有显著保护作用,细胞增殖率比正常无损伤细胞提高13.4%;0.8 g/L Fucoidan使S期细胞比例明显增加,处理24h由10.89%增加至18.18%;提高细胞周期蛋白A(Cyclin A)、周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)和B细胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2)的表达,同时降低促凋亡蛋白bcl-2相关X蛋白(bax)的表达.结论 低浓度Fucoidan在体外能明显促进SH-SY5Y细胞的增殖,显著降低缺氧缺糖导致的细胞损伤;它可能通过促进Cyclin A、Cyclin B1、CDK1和bcl-2的表达,抑制线粒体凋亡途径中的bax基因表达,实现其对神经细胞的保护作用. 张淑琴 宣博 王海成 杨广笑 何光源 陈明洁关键词:褐藻多糖硫酸酯 细胞增殖 细胞周期 转基因tritordeum的遗传分析 被引量:8 2005年 从一批使用无启动子uidA转化策略转化的tritordeum中,分离出标定有花药组织特异性启动子的单株并考察其外源基因的遗传稳定性,为即将开展的启动子分离工作奠定基础;对转基因材料不同生长时期的不同组织进行Gus组织化学检测,分析Gus表达的特异性,应用RT-PCR从转录水平进一步确证启动子的特异性;所筛选出的植株中,Gus的表达特异性和T0代的表现完全一样,只有花药原基和花粉粒,整合位点在各代之间传递的频率较低,明显不符合显性:隐性(3∶1)规律,但Gus的表达特异性在各代之间传递时有着极强的稳定性;成功地分离出了被标定有花药组织特异性启动子的tritordeum,对其遗传特性作了进一步的分析. 何光源 吴旭乾 涂知明 陈明洁关键词:基因工程 TRITORDEUM GUS RT-PCR 三种大肠杆菌高效感受态的制备及转化 被引量:18 2006年 描述了一种改良的高效细菌感受态的制备和感受态细胞的保藏及细菌的转化方法.三种不同的大肠杆菌分别是DH5α,TG1和XL1blue,其中最有效的是XL1blue.每种菌株的感受态细胞制备的最佳光密度(OD600值)不同.对感受态细胞的存储时间及其与转化效率之间的关系也进行了研究,结果显示感受态细胞可以在-20℃存储7d,在-70℃存储15d.将常见的方法做了三种改进:首先是将CaCl2溶液改为TB溶液;其次是将培养基由LB换成S.O.C;再就是在质粒对感受态细胞的转化过程中加入DMSO或PEG8000.改良的细菌转化系统比常见的方法能提高转化效率约1000倍,是一种高效的细菌转化系统. 涂知明 陈明洁 何光源 常俊丽关键词:感受态细胞 大肠杆菌 质粒 保藏 tritordeum花粉特异性表达的遗传分析 被引量:4 2006年 为明确转基因tritordeum中被外源uidA基因标记的启动子的调控特异性,对筛选到的一株标记材料进行了两代uidA基因的遗传表达分析,结果表明,后代材料基因组中都含有uidA基因,没有发生分离,且都只在花粉中检测到GUS活性,在其他组织没有检测到GUS活性.进一步RT-PCR分析显示uidA基因在根和叶中没有发生转录,说明该株材料为花粉特异性启动子被uidA基因标记的阳性纯合体,实验证明该特异性能稳定遗传. 陈泠 何光源 涂知明 陈明洁关键词:基因工程 TRITORDEUM 反转录聚合酶链式反应 吉马酮在制备用于治疗肝癌药物中的应用 本发明提供了吉马酮作为治疗肝癌药物的应用,吉马酮对HepG2细胞的细胞毒性实验结果显示,IC<Sub>50</Sub>约160μm,流式细胞仪检测吉马酮对肝癌HepG2细胞周期和凋亡的影响实验结果显示,吉马酮能诱导Hep... 何光源 杨广笑 柳昀熠 方斌 王维 陈明洁麻黄碱抑制支气管平滑肌细胞增殖的机制 被引量:11 2008年 BK通道(large-conductance Ca2+-activated K+ channel)是一种大电导、电压和钙离子依赖的钾通道,存在于哺乳动物几乎所有的组织中。β1亚基是首次从平滑肌细胞中分离到的一种BK通道辅助亚基。麻黄作为一种β肾上腺素受体激动剂,是一味治疗哮喘的常用中药。利用RT-PCR和膜片钳等技术,研究麻黄治疗哮喘的作用机制。结果表明:麻黄碱(ephedrine,Eph)作为麻黄的一种主要成分,显著抑制支气管平滑肌细胞(bronchial smooth muscle cells,BSMCs)的增殖和BK通道β1亚基的表达,但是对BK通道的电流没有显著影响。 景红娟 汪长东 甘露 阎旭 陈鹏 陈明洁 何光源关键词:麻黄碱 BK通道 细胞增殖