殷昊
- 作品数：8 被引量：10H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金公益性行业科研专项黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不同地区鸡源产气荚膜梭菌的毒素型鉴定和药敏试验被引量：8
- 2015年
- 为探明我国鸡群中产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)不同毒素型分布特征及携带主要致病毒素基因和对饲用抗菌素的抗药谱,于2013年7月至2014年5月间从四川等7省17个肉鸡生产较为集中的地区采样692份,分离鉴定获得Cp菌株214株,分离率31%。经多重PCR方法鉴定,其中有206株为A型Cp,8株为C型。利用特异性单一PCR方法检测发现:有87株Cp携带β2毒素基因,阳性率为41%;5株携带Net B毒素基因,阳性率为2.3%。以最小抑菌浓度法(MIC)检测的常见饲用抗菌素敏感性结果显示:那西肽、弗吉尼亚霉素和效霉素有广泛的抑菌作用,四川德阳(2013)、四川眉山(2013)和广东鹤山(2013)的分离菌株对所测试的11种药物均表现敏感,而广西桂林(2014)的菌株仅对那西肽敏感。结果表明我国鸡源Cp具有明显的毒素型、主要致病毒素基因携带状况和抗药谱的地区差异。
- 胡贺覃宗华王艳华龚振兴刘保红殷昊彭险峰马雪婷李祥瑞蔡建平
- 关键词：坏死性肠炎产气荚膜梭菌毒素基因药敏试验
- 柔嫩艾美耳球虫组蛋白去乙酰化酶2A基因的克隆表达及转录动态分析被引量：1
- 2016年
- 为研究柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)组蛋白去乙酰化酶2A(Et Sir2A)的生化功能及其对生活史发育的潜在调节作用,以柔嫩艾美耳球虫甘肃株为例,检测其在不同发育阶段表达量的差异。以基因组数据预测的编码序列为模板设计引物,采用RT-PCR的方法扩增得到Et Sir2A的全长ORF,构建p MAL-C2X-Et Sir2A重组表达质粒并进行原核表达;提取未孢子化卵囊、孢子化7h卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子5个发育阶段/时期的总RNA,采用qRT-PCR方法检测Et Sir2A的转录动态变化。测序结果显示,克隆的Et Sir2A ORF序列全长909 bp,编码302个氨基酸,并能在大肠杆菌原核系统中成功表达;qRT-PCR结果显示,Et Sir2A在不同发育阶段mRNA转录水平差异显著,在未孢子化卵囊阶段最高,第二代裂殖子阶段最低。结果为进一步研究Et Sir2A功能和开发新型抗球虫药物提供了数据基础。
- 左云云马雪婷龚振兴殷昊刘保红韩政岚蔡建平
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫QRT-PCR
- 一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法
- 本发明公开了一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过使用无微生物DNA污染的二次蒸馏水并配制所需试剂，采用1.2M蔗糖漂浮沉淀法对卵囊进行纯化，纯化后的卵囊经15％次氯酸钠溶液和细胞裂解液...
- 龚振兴蔡建平刘保红殷昊李法财马雪婷
- 文献传递
- 一种无外源菌DNA污染的鸡球虫卵囊的制备方法
- 2020年
- 为了获得无鸡肠道和粪便细菌DNA污染的鸡球虫卵囊,试验采用实验室制备的无微生物污染的水配制相关试剂,对柔嫩艾美耳球虫卵囊采用漂浮纯化、灭菌处理和外源菌DNA去除等方法,获得高纯度的柔嫩艾美耳球虫卵囊;提取卵囊的基因组DNA,用细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增并进行序列分析,以鉴定该卵囊是否被外源菌DNA污染。结果表明:提取的柔嫩艾美耳球虫卵囊基因组DNA经PCR方法检测外源DNA呈阴性。说明用此方法制备的柔嫩艾美耳球虫卵囊无外源菌DNA污染,可用于制备高纯度的无外源菌DNA污染的鸡球虫卵囊。
- 龚振兴刘保红刘保红殷昊马雪婷蔡建平
- 关键词：鸡球虫卵囊基因组DNA
- 鸡颗粒溶素的原核表达及生物活性分析
- 2018年
- 为了克隆表达纯化鸡颗粒溶素（chicken granulysin,ChGNLY）并进行活力鉴定。本试验以基因组数据库预测的ChGNLY基因为模板设计引物,对提取的鸡脾脏总RNA进行RT-PCR,扩增得到的ChGNLY基因插入pMD-19T载体中并测序。将测序正确的GNLY基因克隆至pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GNLY,并将其转化至感受态BL21,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE、Western-blotting和蛋白质谱鉴定融合蛋白的正确性。CellTiter-Glo2.0Assay检测融合蛋白的生物学活性。另外,对GNLY的分子特性进行了生物信息分析。结果显示,测序结果显示克隆的ChGNLY片段长237bp,编码79个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约为36 000。重组ChGNLY融合蛋白能特异性与人颗粒溶素抗体发生反应。纯化后的GNLY融合蛋白经CellTiter-Glo2.0Assay检测,发现其具有剂量依赖性的细胞毒活性。系统发生分析显示GNLY可明显分为4个群。结构分析发现,ChGNLY活性区域表面带有大量正电荷,且位点保守。结果表明,本试验利用原核表达系统成功表达了具有生物学活性的ChGNLY,为ChGNLY后续功能的研究奠定理论基础。
- 袁如意马雪婷殷昊殷昊杨顺利龚振兴韩政岚杨顺利刘晓丽曲自刚
- 关键词：颗粒溶素原核表达生物信息分析生物学活性
- 一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法
- 本发明公开了一种无外源菌DNA污染的球虫卵囊的制备方法，属于生物技术领域。本发明通过使用无微生物DNA污染的二次蒸馏水并配制所需试剂，采用1.2M蔗糖漂浮沉淀法对卵囊进行纯化，纯化后的卵囊经15％次氯酸钠溶液和细胞裂解液...
- 龚振兴蔡建平刘保红殷昊李法财马雪婷
- 文献传递
- 柔嫩艾美耳球虫真核起始因子5和5A基因的克隆表达及转录动态分析
- 2014年
- 旨在研究柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)真核起始因子5(EteIF5)和5A(EteIF5A)的功能,克隆、表达并分析EteIF5和EteIF5A在E.tenella广东株不同发育阶段的表达量变化。根据E.tenella基因组数据预测的编码序列设计引物,采用RT-PCR方法克隆EteIF5和EteIF5A的ORF,插入酶切位点后连接到原核表达载体pMAL-c2x进行诱导表达。提取E.tenella5个发育阶段(/时期)的总RNA,使用qRT-PCR检测EteIF5和EteIF5A转录的动态变化。测序结果表明,克隆获得的EteIF5和EteIF5A ORF全长分别为1 248和486bp,各自编码315和161个氨基酸,均在大肠埃希菌表达系统中成功表达。qRT-PCR定量分析显示,eIF5和eIF5A的mRNA在E.tenella不同发育阶段转录量不同,子孢子阶段最高,在孢子化卵囊阶段最低。首次克隆获得了E.tenella eIF5和eIF5A ORF,揭示EteIF5和EteIF5A mRNA的转录量在不同发育阶段有显著差异。试验结果为进一步研究EteIF5和EteIF5A的功能,从EteIF5A合成途径研制新型抗球虫药提供了试验基础。
- 苟灵俏龚振兴于三科殷昊马雪婷蔡建平林青
- 关键词：柔嫩艾美耳球虫基因克隆QRT-PCR
- 鸡组蛋白去乙酰化酶3的重组表达与结构信息学分析被引量：1
- 2014年
- 为比较柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)与鸡的组蛋白去乙酰化酶3(histone deacetylase 3,HDAC3)蛋白质序列和结构差异,以发现和筛选E.tenella HDAC3(EtHDAC3)的特异性抑制物。用RTPCR方法从杂交黄羽肉鸡的肠上皮细胞克隆ChHDAC3基因,以原核表达载体pMAL-C2X构建重组质粒pMAL-C2X-ChHDAC3,经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌Transetta,进行IPTG诱导表达。使用Swiss-Model对ChHDAC3和EtHDAC3进行同源建模,比较分析ChHDAC3和EtHDAC3的活性位点。利用Autodock 4.2进行分子对接,研究抑制剂Apicidin与ChHDAC3、EtHDAC3结合模式的差异。结果显示,克隆的ChHDAC3基因的ORF由1 287个核苷酸组成,编码428个氨基酸,能在大肠杆菌中进行可溶性表达。构建的ChHDAC3和EtHDAC3的三维模型均由8个串联的β折叠和11个α螺旋组成,其活性位点高度保守,仅在表面识别区有1个氨基酸的差异。Apicidin与EtHDAC3有更低的结合能,提示Apicidin对EtHDAC3具有更强的抑制活性和选择性。
- 路义鑫刘兵马雪婷殷昊龚振兴宋铭忻袁金钱蔡建平
- 关键词：同源建模分子对接
