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电穿孔转染制备绵羊诱导多潜能干细胞条件的优化被引量：3: 2015年; 为优化获得绵羊诱导性多潜能干细胞(iPS cell)的诱导条件,通过4-D电转染仪,将含有人Oct4、Sox2及Klf4、c-Myc及lin28基因的3个质粒共转染绵羊成纤维细胞,从EH-100、EN-150、CZ-167、CA-137电转程序筛选出适合绵羊成纤维细胞的电转染程序;探讨不同细胞密度、质粒质量浓度、质粒质量浓度比及维生素C对诱导性多潜能干细胞克隆形成的影响。结果表明,采用EH-100电转程序,在细胞密度为5×106 mL-1、质粒质量浓度比为1∶1∶1、质粒总质量浓度为0.1mg·L-1、培养液中添加维生素C的质量浓度为0.05mg·L-1时,AP染色阳性(AP+)克隆形成的效率可达到14.0%。说明,优化后的电转染方法和培养方案可有效提高绵羊诱导性多潜能干细胞的制备效率。; 王聪慧赵帅张译元王立民李炜杰赵兴旺丁新平张银国周平; 关键词：电穿孔转染

IGF-I转基因羊基因稳定性分析: 转基因技术从产生到现在，经历了几十年的发展过程，特别是近十年来，更是有了突飞猛进的发展。研究人员对转基因动物的要求已经从最初的获得转基因动物转化成为利用转基因技术为人类优质生活服务的目标上来。　　目的：本实验研究对象为类...; 赵帅; 关键词：细毛羊拷贝数整合位点稳定性分析; 文献传递

实时定量PCR检测转基因绵羊拷贝数被引量：2: 2015年; 【目的】利用高通量、快速、灵敏的实时荧光定量PCR法,检测转类胰岛素样生长因子1-红色荧光蛋白基因(insulin-like growth factor 1-red fluorescent protein,IGF1-RFP)绵羊中外源基因的拷贝数。【方法】以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为绵羊的内源参照基因,梯度稀释法。【结果】分别获得RFP和GAPDH基因的Ct值与起始模板数的相关性标准曲线,R2分别为0.999和0.999,相关性高。通过比较目的基因RFP和GAPDH起始模板数,得到外源基因在转基因绵羊中的拷贝数。编号0152、0216、0217、0218的转基因绵羊拷贝数分别为3、1、1、1。【结论】以IGF-I转基因细毛羊为研究对象,针对外源基因序列和内源参照基因序列设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR法对IGF-I转基因细毛羊外源基因的拷贝数进行检测,并且准确检测外源基因的拷贝数。; 赵帅王立民王聪慧唐红张宾郭延华张译元赵兴旺丁新平张银国周平; 关键词：转基因绵羊实时荧光定量PCR 拷贝数

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赵帅