陈巧玲 作品数:14 被引量:32 H指数:4 供职机构: 川北医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 四川省教育厅科学研究项目 四川省教育厅资助科研项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
高渗培养基对椎间盘内髓核细胞活力及代谢的影响 被引量:2 2016年 目的探讨高渗培养基对椎间盘内髓核组织及髓核细胞活力的影响。方法 6-7周龄SD大鼠10只,无菌取每只大鼠胸腰段椎间盘9个,置于高渗(410 mOsm/kg)培养基中整体培养,培养前及培养第7,14,21,28天,利用Mitotracker Green荧光探针、免疫组织化学和生物化学方法检测细胞的活力、椎间盘结构的变化以及髓核组织细胞外基质成分的变化。结果椎间盘组织形态、细胞存活率及髓核细胞外基质成分与新鲜离体椎间盘无统计学差异。髓核细胞存活率荧光强度检测提示培养后第21天与培养前比较荧光强度明显降低(7 782±367 vs 10 435±376,P<0.05)。髓核组织内蛋白多糖含量(mg/100mg)检测提示培养第21天与培养前相比明显降低(3.72±0.45 vs 6.35±0.76,P<0.05)。结论在高渗培养基中(410mOsm/kg),髓核细胞可以良好存活至少14 d,大鼠髓核组织内蛋白多糖可以有效保持14 d。 白亦光 陈巧玲 刘康 杨泽龙 罗栩伟 冯刚关键词:椎间盘 髓核组织 髓核细胞 色素上皮衍生因子在肿瘤治疗中的研究进展 被引量:2 2014年 目前,抗血管生成疗法已被广泛证明为一种有效的抗肿瘤治疗方法。PEDF是一种能有效抑制新生血管形成的蛋白,是已知最强的血管生成抑制剂,在不同类型肿瘤细胞的体内外实验中已证实其具有抗肿瘤的作用,可作为一种潜在的新型抗肿瘤药物。本文就色素上皮衍生因子在肿瘤治疗中的研究现状做一综述。 熊娟 陈巧玲 陈巧玲关键词:PEDF 抗血管生成 肿瘤 表达PEDF的人胎盘间充质干细胞抑制人脐静脉内皮细胞增殖和迁移 被引量:4 2017年 目的探讨携带色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)基因的腺病毒转染胎盘间充质干细胞(PMSCs)后对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的抑制作用。方法取足月产胎儿的胎盘组织,分离、培养PMSCs,用流式细胞术鉴定其表面标记。用携带PEDF基因的腺病毒(Ad-PEDF)转染PMSCs,并用Western blot和ELISA检测转染了Ad-PEDF的PMSCs细胞(PMSCs-PEDF)培养上清中PEDF的表达。MTT测定PMSCs-PEDF表达的PEDF对HUVECs增殖的影响。Transwell实验检测PMSCs-PEDF所表达的PEDF蛋白对HUVECs迁移的抑制作用。结果用流式细胞术对分离的PMSCs进行免疫表型分析,结果显示,CD44、CD73、CD90、CD105表达呈阳性,而CD34、CD45表达呈阴性。Western blot结果显示,重组腺病毒成功将PEDF基因传送至PMSCs细胞内并产生分泌性的PEDF蛋白。ELISA结果显示PMSCs-PEDF可并分泌高水平的PEDF至培养基中[(65.2±4.9)ng/ml]。MTT结果显示,PMSCs-PEDF培养基上清在稀释比例为1∶2时对HUVECs抑制率为56.3%±8.7%,随着稀释比例的增加抑制率逐渐降低。而PMSCs及PMSCs-null的培养基上清则对HUVECs抑制作用很弱。Transwell实验结果显示,与PMSCs组(208.8±14.7)及PMSCs-null组(199.0±20.7)相比,PMSCs-PEDF组(79.4±14.5)可显著抑制HUVECs迁移(均P<0.05)。结论 PMSCs-PEDF可在体外高效表达PEDF蛋白,并抑制HUVECs细胞的增殖和迁移。 陈巧玲 白亦光 肖东琴 刘康 冯刚关键词:色素上皮衍生因子 胎盘间充质干细胞 细胞增殖 靶向抑制Akt对成骨细胞分化PI3K/Akt信号通路调控的研究 被引量:6 2020年 目的:观察蛋白激酶B(Akt)特异性抑制剂MK2206对成骨细胞分化的影响,探讨PI3K/Akt信号通路影响成骨细胞分化的分子机制。方法:通过CCK-8检测MK2206对骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖的最大安全浓度;将BMSC分为两组,其中对照组使用OBM诱导处理,干预组加入含有3μmol/L的MK2206的OBM进行诱导处理,检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和矿化能力,实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关基因的表达水平。将细胞分为3组,其中OBM组仅加入成骨细胞诱导培养基培养;OBM+MK2206组使用含有3μmol/L MK2206的OBM培养;MK2206组中使用含有3μmol/L MK2206的普通培养基处理,采用Western blotting检测相关蛋白的表达情况。结果:CCK-8结果提示,在3.2μmol/L及以下浓度MK2206对BMSC的增殖没有影响;随着浓度的升高,ALP阳性的细胞数量逐渐下降;干预组的ALP表达、细胞外基质矿化能力、ALP mRNA和骨钙素(OCN)mRNA表达较对照组均明显减少(均P<0.05);与OBM组比较,OBM+MK2206组和MK2206组细胞中RUNX2、Collagen I和p-Akt蛋白均出现明显的降低,且MK2206组下降更加明显(均P<0.05)。结论:靶向抑制Akt在体外细胞培养中可通过PI3K/Akt信号通路明显下调成骨细胞相关基因ALP和OCN的表达,并抑制成骨细胞的分化成熟。 陈巧玲 白亦光 别俊 杨蜜 张加勇 尚东琴关键词:蛋白激酶B 骨破坏 成骨细胞 信号通路 色素上皮衍生因子联合5-氟尿嘧啶抑制结肠癌细胞凋亡和血管生成的作用研究 被引量:2 2021年 目的:探讨色素上皮衍生因子(PEDF)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)对结肠癌CT26细胞的抑制作用以及对荷瘤小鼠模型的治疗效果。方法:将体外培养的CT26细胞分为对照组、5-FU组和PEDF+5-FU组3组,分别加入PBS、5-FU和PEDF+5-FU处理CT26细胞。通过细胞划痕实验和Transwell小室检测CT26细胞迁移能力。建立CT26荷瘤小鼠模型,将24只荷瘤模型小鼠随机分为对照组、5-FU组和PEDF+5-FU组,每组8只。用相应药物给药干预,共给药3次,20 d后处死小鼠测量肿瘤体积。通过CD31免疫荧光染色检测肿瘤组织内的微血管密度,TUNEL染色观察肿瘤细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,5-FU组和PEDF+5-FU组CT26细胞迁移率显著下降,CD31表达明显下调,肿瘤细胞的凋亡率明显提高(均P<0.05);与5-FU组相比,PEDF+5-FU组CT26细胞迁移率显著下降,CD31表达明显下调,肿瘤细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。与对照组相比,5-FU组和PEDF+5-FU组肿瘤体积显著减小(均P<0.05),PEDF+5-FU组肿瘤体积小于5-FU组(P<0.05)。结论:PEDF和5-FU联合用药可以对CT26结肠癌细胞起到协同治疗的目的,且治疗效果优于5-FU单独治疗效果。 陈巧玲 白亦光关键词:结肠癌 PEDF 5-FU 条件性敲除骨髓间充质干细胞中3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1基因后的成骨细胞分化 2022年 背景:国内外对于3-磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(3-phosphoinositide-dependent protein kinase-1,PDK-1)的研究主要集中在内分泌和肿瘤学等学科领域,在骨科学中关于其对成骨分化的影响尚未有系统研究与报道。目的:通过使用稳定表达cre酶的腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)转染PDK-1^(flox/flox)小鼠骨髓间充质干细胞,观察PDK-1在成骨细胞分化中的作用。方法:体外培养获得来源于纯合子PDK-1^(flox/flox)小鼠的骨髓间充质干细胞,设立对照组、空载病毒组(pHBAd-EGFP)和pHBAd-cre-EGFP组,对照组仅用成骨细胞诱导培养基诱导培养骨髓间充质干细胞,空载病毒组使用pHBAd-EGFP转染骨髓间充质干细胞,pHBAd-cre-EGFP组使用含Cre重组酶的重组腺病毒(pHBAd-cre-EGFP)干扰骨髓间充质干细胞中的PDK-1基因,然后进行成骨诱导,采用碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性、茜素红染色和qPCR检测成骨相关基因表达来评价各组成骨细胞的分化成熟情况。结果与结论:pHBAd-cre-EGFP组细胞的碱性磷酸酶分泌、碱性磷酸酶活性、矿化能力均明显低于其他2组(P<0.05,P<0.01),成骨细胞相关基因Runx2、骨钙素和Ⅰ型胶原的表达也明显低于其他2组(P<0.01)。结果表明,体外干扰PDK-1基因表达可显著抑制骨髓间充质干细胞成骨分化。 陈巧玲 白亦光 刘康 林涛 罗栩伟关键词:转移性骨肿瘤 骨破坏 成骨细胞 色素上皮衍生因子联合顺铂对卵巢癌的抑制作用 被引量:2 2021年 目的探讨色素上皮衍生因子(PEDF)联合顺铂(DDP)对卵巢癌细胞的抑制作用以及对卵巢癌小鼠的治疗效果。方法体外培养ID8细胞株,将细胞分为对照组、PEDF组和PEDF+DDP组,分别加入PBS、PEDF和PEDF+DDP处理ID8细胞。通过细胞划痕实验和CCK-8实验观察每组细胞迁移和增殖。随后,建立C57BL/6小鼠卵巢癌模型,将24只卵巢癌模型小鼠随机分为模型组、PEDF组和PEDF+DDP组,每组8只。模型组给予100μl PBS,PEDF组给予静脉注射12.5 mg/kg的PEDF蛋白,PEDF+DDP组给予静脉注射12.5 mg/kg PEDF蛋白和腹腔注射2 mg/kg顺铂注射液。隔日给药,共给药3次,20 d后处死小鼠并解剖分离肿瘤,检测肿瘤的体积,通过免疫组化和免疫荧光对肿瘤组织内的新生血管CD31的表达和凋亡细胞进行评价。结果体外细胞实验表明,与对照组相比,PEDF组和PEDF+DDP组ID8细胞的迁移和增殖均显著降低(P<0.05);与PEDF组相比,PEDF+DDP组ID8细胞的迁移和增殖显著降低(P<0.05)。动物体内实验表明,与模型组相比,PEDF组和PEDF+DDP组肿瘤体积的增长速率明显放缓(P<0.05);与PEDF组相比,PEDF+DDP组肿瘤体积的增长速率明显放缓(P<0.05)。与模型组相比,PEDF组和PEDF+DDP组小鼠肿瘤组织中CD31的表达明显下调,而肿瘤细胞的凋亡率明显升高(P<0.05);与PEDF组相比,PEDF+DDP组CD31的表达明显下调,而肿瘤细胞的凋亡率明显提高(P<0.05)。结论PEDF和DDP联合用药对卵巢癌细胞具有协同抑制作用以及对卵巢癌小鼠模型具有协同治疗作用。这种协同治疗效果优于PEDF单独治疗的效果。 陈巧玲 白亦光 别俊 杨蜜 张家勇关键词:卵巢癌 色素上皮衍生因子 顺铂 携带PEDF基因的骨髓间充质干细胞对小鼠Lewis肺癌的抑制作用 被引量:4 2017年 目的探讨编码色素上皮衍生因子的重组腺病毒(Ad-PEDF)转染的骨髓间充质干细胞(MSCs)对小鼠Lewis肺癌生长和转移的抑制作用。方法采用藻酸盐包裹肿瘤细胞实验评估MSCs-PEDF对Lewis肺癌细胞(LL/2)诱导的新生血管形成的抑制作用。C57BL/6小鼠皮下接种LL/2细胞7 d后,将荷瘤小鼠分为4组,每组18只。每组小鼠分别给予尾静脉注射100μl PBS、1×108PFU Ad-PEDF、5×10~5MSCs-Lac Z或5×10~5MSCs-PEDF;每3 d用游标卡尺测量一次肿瘤体积。接种后第30天每组处死8只小鼠观察肺转移结节,其余小鼠(n=10)继续观察生存期。结果藻酸盐包裹实验显示,与其他三个对照组相比,MSCs-PEDF治疗组的藻酸盐珠表面呈现较少的毛细血管网,FITC标记的葡聚糖摄入量也较其他组低(P<0.01)。MSCsPEDF组小鼠皮下肿瘤的体积明显小于PBS组、Ad-PEDF组及MSCs-Lac Z组[(1 038.8±139.0)mm^3vs(2 897.7±274.9)mm^3,(2 622.8±359.1)mm^3,(3 019.2±360.9)mm^3,P<0.01]。MSCs-PEDF组肺转移结节数明显少于PBS组、Ad-PEDF组及MSCs-Lac Z组(3.2±2.4 vs 16.0±4.0,14.6±5.3,16.1±4.9,P<0.05),MSCs-PEDF组小鼠的生存期较其他各对照组显著延长(P<0.01)。结论 MSCs-PEDF可抑制LL/2皮下瘤的生长和转移,并可延长荷瘤小鼠生存期,提示通过腺病毒转染使MSCs分泌PEDF可作为一种新的针对肺癌的治疗方法。 陈巧玲 白亦光 肖东琴 刘康 冯刚关键词:间充质干细胞 色素上皮衍生因子 非小细胞肺癌 基因治疗 腺病毒介导的色素上皮衍生因子对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用 被引量:1 2017年 目的探讨腺病毒介导的色素上皮衍生因子(Ad-PEDF)对小鼠B16F10黑色素瘤肺转移模型的治疗作用。方法在体外用MTT实验测定Ad-PEDF感染复数(multiplicity of infection,MOI)为50,100,150,200,250时对B16F10细胞增殖的抑制作用,Transwell实验检测Ad-PEDF对B16F10细胞侵袭的抑制作用,以PBS和空载腺病毒(Ad-null)作为对照。在体内通过尾静脉接种小鼠B16F10细胞建立肺转移模型,将小鼠随机分为3组,分别经尾静脉注射100μl PBS、100μl Ad-null(1×108PFU)和100μl Ad-PEDF(1×108PFU)。隔日注射1次,共5次。观察静脉注射Ad-PEDF对黑色素瘤肺转移结节数量以及肺湿重的影响。对肺转移灶进行TUNEL染色检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果 MTT实验显示,Ad-PEDF在不同的MOI值下均能对B16F10细胞产生作用,并随着MOI值的增加抑制率逐渐升高,与Ad-null组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。Transwell实验显示,AdPEDF组与PBS组和Ad-null组相比,穿膜的肿瘤细胞数明显下降,侵袭能力受到显著抑制(123.3±21.9 vs 220.3±26.8,213.5±35.5,P<0.01)。体内实验结果提示,Ad-PEDF组小鼠的肺部转移灶较PBS组和Ad-null组明显减少(47.7±14.1 vs 75.1±20.9,73.3±17.3,P<0.05)。而Ad-PEDF组的小鼠肺湿重[(0.26±0.06)g]也明显低于PBS组[(0.39±0.05)g]和Ad-null组[(0.37±0.07)g],差异有统计学意义(均P<0.05)。TUNEL实验显示,Ad-PEDF组肺转移灶肿瘤细胞凋亡率较PBS组和Ad-null组增多(25.3%±3.3%vs 3.9%±1.2%,4.1%±1.4%,P<0.01)。结论腺病毒介导的PEDF能够显著抑制小鼠黑色素瘤肺转移灶的形成,其作用机制可能为抑制肿瘤细胞增殖和侵袭,以及诱导肿瘤细胞凋亡。 陈巧玲 白亦光 付曦 何朗 冯刚关键词:色素上皮衍生因子 腺病毒载体 黑色素瘤 肺转移 骨髓间充质干细胞作为携带PEDF基因载体的可行性研究 被引量:4 2015年 目的探讨采用重组色素上皮源性因子腺病毒(Ad-PEDF)转染小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后,评估MSCs作为携带PEDF基因载体的可行性。方法 Ad-PEDF在HEK293细胞中扩增、并纯化后。将其转染入MSCs(MSCs-PEDF),用Western Blot和ELISA检测培养上清液中PEDF的表达。通过人脐静脉内皮细胞(HUVECs)成管抑制实验和迁移抑制实验来评估MSCs-PEDF表达的PEDF是否具有生理活性。结果用Ad-PEDF或Ad-LacZ转染MSCs 48小时后,用Western Blot检测细胞培养上清中的PEDF为阳性表达。ELISA检测培养上清中PEDF浓度为(78.8±4.8)ng/ml。HUVECs成管抑制实验和迁移抑制实验显示,MSCs-PEDF的培养液上清可显著抑制HUVECs形成小管及向生长因子迁移。结论 MSCs可以作为使用PEDF基因治疗肿瘤的载体。 陈巧玲 别俊 白亦光 胡欣 文世民 李光明关键词:骨髓间充质干细胞 色素上皮衍生因子 基因治疗 抗血管生成