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利用SUMO系统高效表达可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白被引量：11: 2012年; 利用pCold-SUMO可溶性原核表达载体,构建表达猪圆环病毒2型缺失核定位信号肽的Cap基因的重组表达载体pCold-SUMO-dCap,并将其转入Arctic-Express表达菌株中15℃低温诱导表达.表达产物经SDS-PAGE分析,结果表明SUMO-dCap融合蛋白获得了高效表达,可溶性SUMO-dCap融合蛋白约占总融合蛋白的50%;用NI-NTA树脂纯化可溶性的融合蛋白,然后利用SUMO蛋白酶特异性去除SUMO标签,从而得到不含任何标签的dCap蛋白,进一步的Western-blot分析表明,表达的dCap蛋白具有良好的反应原性.; 陈春丽郭宇飞陈筱薇叶昱王强廖明樊惠英; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白原核表达

应用猪圆环病毒2型缺失NLS的Cap蛋白建立一种ELISA检测方法: 引言猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)与猪的多种疾病综合征密切相关,临床上以PMWS最为常见,危害最为严重.PMWS多发生于5～12周龄仔猪和早期育肥猪,具有低发病率高死亡率和长期呈现...; 陈春丽王强叶昱陈晓薇张春雷刘晓柯廖明樊惠英

骆驼蓬等植物提取物杀虫活性研究被引量：46: 2003年; 以采自新疆的植物骆驼蓬、黄花蒿、艾蒿和采自云南恶性杂草紫茎泽兰为植物材料,研究其提取物对萝卜蚜、菜粉蝶、斜纹夜蛾的生物活性.结果表明,骆驼蓬甲醇提取物10000μg/mL处理后24和48h,萝卜蚜校正死亡率分别为93.07%和96 36%;处理后24h,对菜粉蝶5龄幼虫和斜纹夜蛾3龄幼虫的非选择性拒食率分别为90 81%和72 13%,均高于其他3种植物甲醇提取物.盆栽试验表明,骆驼蓬甲醇提取物对萝卜蚜防治效果良好,以10000μg/mL喷施处理后24和48h,防效可达71 34%和89 82%.; 马安勤钟国华胡美英王强王文祥孙之潭; 关键词：植物提取物骆驼蓬萝卜蚜菜粉蝶斜纹夜蛾杀虫植物

黑曲霉糖化酶基因在毕赤酵母X33中的高效表达被引量：2: 2012年; 为高效表达黑曲霉糖化酶基因,根据GenBank中糖化酶的氨基酸序列(登录号:AY652617),选用毕赤酵母(Pichiapastoris)密码子偏嗜性,全基因合成新的cDNA序列。改造后的基因克隆到pGAPZαA质粒中,获得重组分泌型酵母表达质粒pGAPZαA-EC,经限制性内切酶BlnⅠ酶切线性化后,电击转化入毕赤酵母细胞X33内。经高浓度博莱霉素抗性筛选,得到高拷贝转化子,PCR检测结果显示,糖化酶基因与毕赤酵母染色体稳定结合。糖化酶蛋白获得分泌表达,SDS-PAGE分析其分子质量约为80ku,其表达量约为180mg/L。表达产物经Starch-PAGE活性染色,显示其具有酶学活性。; 王强徐义兵郭春和黄毓茂; 关键词：黑曲霉糖化酶毕赤酵母分泌表达活性鉴定

猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因在酵母中的表达被引量：3: 2011年; 为探索猪圆环病毒Ⅱ型(PCVⅡ)ORF2基因的高效表达,将ORF2基因整合到酵母表达载体pPICZαC中,构建重组质粒pPICZαC-ORF2,通过SacⅠ酶切线性化,经电穿孔法转到毕赤酵母菌SMD1168。经ZeocinTM抗性筛选得到转化子,通过SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定,结果表明衣壳蛋白在酵母菌中成功分泌表达。; 刘娜吴锋徐义兵王强郭春和黄毓茂; 关键词：猪圆环病毒巴斯德毕赤酵母 ORF2 分泌表达

O型FMDV多抗原表位在毕赤酵母中的表达及免疫原性分析被引量：3: 2014年; 为了研制口蹄疫的新型多肽疫苗，试验以l株0型口蹄疫病毒（FMDV）VP1基因为模板，根据毕赤酵母密码子偏嗜性，设计合成了含有T细胞表位（21～40aa）和B细胞表位（129～169aa）的多肽基因TB60，通过基因工程技术克隆到pGAPZαA质粒中，构建成分泌型重组酵母表达载体pGAPZαA—TB60，并经线性化后用电穿孔法转入毕赤酵母X33中，经博莱霉素（Zeocin）抗性筛选及PCR检测后，获得高拷贝转化子；再对重组毕赤酵母pGAPZαA—TB60-X33的分泌表达产物进行Tricine—SDS—PAGE和Western-blot分析。结果表明：重组多肽TB60的分子质量约为8．0ku，其在上清液中的表达量为70mg／L。此多肽能诱导机体产生特异性的体液免疫应答，有良好的免疫原性。; 项林盛王强郑红玉黄毓茂; 关键词：口蹄疫病毒毕赤酵母免疫原性

应用猪圆环病毒2型缺失NLS的Cap蛋白建立一种ELISA检测方法被引量：1: 2014年; 本试验通过诱导重组质粒pCold-SUMO-dCap在大肠杆菌中高效表达,获得了可溶性表达的SUMO-dCap融合蛋白,以SUMO-dCap融合蛋白作为包被抗原,建立了一种检测猪圆环病毒2型抗体的ELISA方法.用该方法与商品化试剂盒对267份猪血清进行平行检测,两种方法的符合率为90.26％,该方法的特异性和灵敏性分别为93.33％、97.16％;与猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪口蹄疫病毒和猪瘟病毒阳性参考血清无交叉反应;批内和批间变异系数分别为1.25％～6.37％和6.68％～13.58％.研究结果表明,本试验建立的ELISA方法特异性强、敏感性好、重复性高,为临床上PCV2血清抗体检测和PCV2流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法,为商品化试剂盒开发奠定了良好的基础.; 张春雷陈春丽王强叶昱张杰谢康尚靳立明廖明樊惠英; 关键词：猪圆环病毒2型 CAP蛋白间接ELISA

一株H9亚型禽流感病毒的分离鉴定及生物特性研究被引量：2: 2015年; 2013年中国吉林某养鸡场发生疑似H9亚型禽流感疫情,采集该发病鸡场病料接种9日龄SPF鸡胚,分离得到一株病毒。经血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、测序分析,鉴定该毒株为H9亚型禽流感病毒(AIV)。对本试验分离株HA基因进行测序及序列分析,结果显示分离株HA基因的裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV的基因特征;HA肽链具有9个潜在糖基化位点,与近些年H9亚型AIV分离株的潜在糖基化位点相同;具有8个受体结合位点,其中234位受体结合位点由谷氨酰胺(Q)变异成苏氨酸(T);HA基因系统进化树结果显示本试验分离株属于欧亚进化分支,与中国最早分离株A/Chicken/Beijing/1/94(H9N2)亲缘关系较远,与2007年后中国H9亚型AIV主要流行分支的代表株A/Chicken/Guangxi/55/2005(H9N2)亲缘关系较近。将该毒株制成油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后第21天免疫鸡血清抗体高达10log2,表明本试验分离株具有很好的免疫原性。; 陈春丽王强李群芳严洁珍黄文科; 关键词：H9亚型禽流感病毒 HA基因免疫原性

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王强