李炜杰
- 作品数：5 被引量：7H指数：2
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项兵团青年科技创新资金专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- TALENs和CRISPR／Cas9诱导绵羊成纤维细胞基因组定点双链断裂提高Rad51基因表达量
- 2015年
- 为检测不同限制性人工核酸内切酶对绵羊成纤维细胞Rad51基因m RNA转录和蛋白表达的影响,本实验将有效切割MSTN(myostatin)基因位点的TALENs和CRISPR/Cas9人工核酸酶电转染到体外培养的绵羊成纤维细胞中诱导产生DNA双链定点断裂,与正常和电转染p Max绿色荧光蛋白报告基因质粒的绵羊成纤维细胞进行对照,采用实时荧光定量PCR和Western Blot方法对不同处理的绵羊成纤维细胞Rad51基因m RNA转录和蛋白质的表达情况进行研究。结果表明:TALENs和CRISPA/Cas9人工核酸酶诱导产生的MSTN基因组DNA双链定点断裂能提高绵羊成纤维细胞Rad51基因表达量。
- 杨娇皮文辉周平李炜杰何高明
- 关键词：同源重组
- 电穿孔转染制备绵羊诱导多潜能干细胞条件的优化被引量：3
- 2015年
- 为优化获得绵羊诱导性多潜能干细胞(iPS cell)的诱导条件,通过4-D电转染仪,将含有人Oct4、Sox2及Klf4、c-Myc及lin28基因的3个质粒共转染绵羊成纤维细胞,从EH-100、EN-150、CZ-167、CA-137电转程序筛选出适合绵羊成纤维细胞的电转染程序;探讨不同细胞密度、质粒质量浓度、质粒质量浓度比及维生素C对诱导性多潜能干细胞克隆形成的影响。结果表明,采用EH-100电转程序,在细胞密度为5×106 mL-1、质粒质量浓度比为1∶1∶1、质粒总质量浓度为0.1mg·L-1、培养液中添加维生素C的质量浓度为0.05mg·L-1时,AP染色阳性(AP+)克隆形成的效率可达到14.0%。说明,优化后的电转染方法和培养方案可有效提高绵羊诱导性多潜能干细胞的制备效率。
- 王聪慧赵帅张译元王立民李炜杰赵兴旺丁新平张银国周平
- 关键词：电穿孔转染
- 电转液L对绵羊成纤维细胞电转染条件优化被引量：3
- 2015年
- 【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染效率。【结果】通过测定细胞转染效率,得到较佳电转方案:L电转液100μL悬浮绵羊成纤维细胞,采用CZ-167电转程序,质粒浓度4 g,2×106个细胞,电击一次,电转后37℃放置10 min可获得理想的转染效率。
- 李炜杰杨娇王聪慧罗健周平黄威姚建龙何高明皮文辉
- 关键词：细胞转染转染效率
- 三种检测内源性基因修饰方法比较
- 2016年
- 为获得准确的突变信息,除直接测序外,实验初步确定了3种人工核酸酶生物学活性检测方法。利用Surveyor nuclease、T7E1(T7 Endonuclease 1)和HRM(High resolution melt),均以变性退火突变型和野生型DNA序列形成扭曲的双螺旋DNA(distorted duplex DNA)为基础的3种人工核酸酶生物学活性检测方法,确定目标位点是否发生突变。实验成功检测出作用于绵羊MNST基因第一外显子的CRISPR/Cas9和第三外显子的TALEN目标位点发生突变,并对3种检测方法的结果和特点进行了分析比较,得出3种检测方法的优缺点,为实验室分析确定细胞利用非同源末端连接修复DNA双链断裂结果提供参考。
- 李炜杰杨娇何高明王立民皮文辉周平
- 关键词：T7ENDONUCLEASE
- 利用CRISPR/Cas9敲除绵羊成纤维细胞MSTN基因的研究
- 目的：肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)，又称生长/分化因子8( GDF8)，是TGF-β超家族成员之一，该基因对骨骼肌的生长发育具有负调控作用。该基因功能的缺失，能够引起肉用动物的“双肌”表型，从而提高动物...
- 李炜杰
- 关键词：基因敲除基因突变
- 文献传递
