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spata3基因参与小鼠生殖细胞发育及其初步功能研究: 目的：　　明确spata3基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的特异表达特性;运用分子克隆技术构建spata3的真核表达质粒并建立spata3过表达HEK293T细胞模型;分析spata3过表达HEK293T细胞...; 温丽敏; 关键词：精子发生细胞自噬动物模型分子克隆

小鼠精子发生相关蛋白3基因在小鼠生精细胞的特异表达及对HEK 293T细胞凋亡和自噬的影响被引量：3: 2018年; 目的检测小鼠精子发生相关蛋白3(spata3)基因在小鼠生精细胞的表达情况,并借助过表达细胞模型进一步分析该基因对人胚肾HEK 293T细胞凋亡及自噬的影响,旨在探讨spata3在精子发生过程中的意义。方法分别采用RT-PCR和免疫印迹法检测spata3基因mRNA及蛋白产物在小鼠各组织中的表达;应用免疫组织化学和免疫荧光染色观察SPATA3蛋白在生精细胞中的定位;借助脂质体将真核表达载体Plv-EGFP-2(a)purospata3瞬时转染HEK 293T细胞,进一步在蛋白水平分析细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)、BAX和Bcl-2及自噬相关蛋白LC3A/B的变化。结果 Spata3基因及其编码产物在小鼠睾丸组织特异表达;粗线期精母细胞和圆形精子细胞的胞质与胞核均有显著SPATA3蛋白的阳性着色,长形精子细胞的胞质也有大量分布;过表达spata3的HEK 293T细胞内活化型Caspase-3和PARP降解产物的含量较对照组差异无显著性,BAX表达量0.815±0.020较裸细胞组0.469±0.012和空载体转染组0.588±0.018均有所增高,Bcl-2含量0.214±0.020低于裸细胞0.507±0.021和空载体转染组0.545±0.024,LC3A/B-Ⅱ的表达量0.741±0.037则显著高于裸细胞组0.136±0.011和空载体转染组0.169±0.012。结论 Spata3基因在小鼠生精细胞特异表达,过表达spata3对HEK 293T细胞凋亡无明显影响,但可以促进细胞自噬。; 王玉晶温丽敏白欣艳曹睿王海龙郭睿; 关键词：293T细胞细胞转染自噬小鼠

Survivin启动子控制的自杀基因HSVtk真核表达载体: 本发明公开了一种Survivin启动子控制的自杀基因<I>HSVtk</I>真核表达载体，本发明所述真核表达载体结合外源药物更昔洛韦(GCV)，对KYSE150食管癌细胞具有特异性杀伤作用，且其作用显著强于HepG<Su...; 于保锋李勇芳孟凡秀张琪齐永利李卓奇赵娜张英敏袁洋洋曾思衡姚志坚杨巧艳温晓薇温丽敏白欣艳张紫燕解军徐钧郭睿张悦红王惠珍弓韬王海龙杨丽红刁海鹏陈显久秦琴董秀山胡晓年; 文献传递

ANKRD49通过上调Bcl-xL的表达抑制UV诱导GC-1细胞的凋亡: 2017年; 目的:利用稳定过表达Ankyrin repeat domain 49(ANKRD49)的GC-1(小鼠精原细胞)细胞模型,探讨ANKRD49过表达对GC-1细胞凋亡的影响。方法:40J/m^2紫外线(UV)刺激GC-1细胞2 min诱导凋亡,分别利用流式细胞术、Hoechst33258染色和免疫印迹技术检测过表达ANKRD49对GC-1细胞线粒体膜电位、核浓缩情况和凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Cleaved-Caspase-3、Bcl-xL和Bax的表达变化,以反映ANKRD49对GC-1细胞凋亡的影响。结果:流式细胞术检测结果表明稳定过表达ANKRD49的GC-1细胞线粒体膜电位下降率和细胞凋亡率均明显低于空载体组和裸细胞组(P<0.05)。Hoechst33258染色结果显示ANKRD49稳定过表达组细胞的凋亡百分比明显低于其它组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示ANKRD49稳定过表达组Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase-3蛋白的表达水平明显低于对照组,而Bcl-xL蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:ANKRD49过表达可抑制UV诱导的GC-1细胞凋亡,其作用可能是直接或间接通过促进Bcl-xL的表达而实现的。; 白欣艳温丽敏王玉晶王海龙解军郭睿; 关键词：细胞凋亡 BCL-XL

一种复合组织工程皮肤的构建方法: 本发明公开了一种复合组织工程皮肤的构建方法，是采用人表皮干细胞作为种子细胞，羊脱细胞真皮基质作为支架载体，利用气液界面分离法体外培养构建复合组织工程皮肤。以本发明方法构建的复合组织工程皮肤具有理想的三维立体网状结构，能促...; 解军张琪孟凡秀于保锋曹睿温晓薇杨巧艳加三三温丽敏白欣艳姚志坚曾思衡袁洋洋张紫燕张丽娜王萱田九博马培元刘志贞傅松涛杨丽红郭睿王惠珍徐钧刁海鹏陈显久胡晓年弓韬王海龙赵虹

Survivin启动子控制的自杀基因HSVtk真核表达载体: 本发明公开了一种Survivin启动子控制的自杀基因<I>HSVtk</I>真核表达载体，本发明所述真核表达载体结合外源药物更昔洛韦(GCV)，对KYSE150食管癌细胞具有特异性杀伤作用，且其作用显著强于HepG<Su...; 于保锋李勇芳孟凡秀张琪齐永利李卓奇赵娜张英敏袁洋洋曾思衡姚志坚杨巧艳温晓薇温丽敏白欣艳张紫燕解军徐钧郭睿张悦红王惠珍弓韬王海龙杨丽红刁海鹏陈显久秦琴董秀山胡晓年

小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核重组表达质粒的构建及其对微管蛋白聚合的影响被引量：2: 2017年; 目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响。方法利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染)。采用RT-PCR及Western blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达情况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量。结果双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达。真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P<0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合。; 温丽敏白欣艳王玉晶赵文静张蘋王海龙郭睿; 关键词：微管蛋白

一种复合组织工程皮肤的构建方法: 本发明公开了一种复合组织工程皮肤的构建方法，是采用人表皮干细胞作为种子细胞，羊脱细胞真皮基质作为支架载体，利用气液界面分离法体外培养构建复合组织工程皮肤。以本发明方法构建的复合组织工程皮肤具有理想的三维立体网状结构，能促...; 解军张琪孟凡秀于保锋曹睿温晓薇杨巧艳加三三温丽敏白欣艳姚志坚曾思衡袁洋洋张紫燕张丽娜王萱田九博马培元刘志贞傅松涛杨丽红郭睿王惠珍徐钧刁海鹏陈显久胡晓年弓韬王海龙赵虹; 文献传递

小鼠Fancd2os基因真核表达质粒的构建及其对人胚肾上皮细胞增殖和凋亡的影响: 2016年; 目的构建小鼠Fancd2os基因的真核表达质粒,并分析Fancd2os基因对人胚肾上皮细胞(HEK293T)增殖和凋亡的影响。方法以小鼠睾丸组织DNA为模板扩增Fancd2os基因c DNA全长片段,并克隆至真核表达载体p3×FLAG-CMV-14,构建重组真核表达质粒p3×FLAG-CMV-14-Fancd2os。经Lipofectamine TM 2000将重组真核表达质粒瞬时转染HEK293T细胞,分别采用RT-PCR及Western blot法检测转染细胞中Fancd2os基因m RNA转录及蛋白表达情况;经CCK8法和流式细胞术分别检测过表达Fancd2os对HEK293T细胞增殖能力及紫外线诱导HEK293T细胞凋亡的影响。结果经双酶切及测序鉴定,重组真核表达质粒p3×FLAG-CMV-14-Fancd2os构建正确;转染p3×Flag-CMV-14-Fancd2os的HEK293T细胞可见Fancd2os基因m RNA转录及其蛋白表达;过表达Fancd2os的HEK293T细胞的增殖活性显著下降(P<0.05);过表达Fancd2os可显著促进紫外线诱导的HEK293T细胞凋亡(P<0.01)。结论成功构建了重组真核表达质粒p3×Flag-CMV-14-Fancd2os,过表达Fancd2os可抑制HEK293T细胞的增殖,促进其凋亡。; 李婷贾三三温丽敏白欣艳王玉晶王海龙解军郭睿; 关键词：真核细胞细胞增殖

一种皮肤干细胞活性成分的提取方法: 本发明公开了一种皮肤干细胞活性成分的提取方法，是将人源性皮肤组织加入添加有PMSF蛋白酶抑制剂的Ⅰ型胶原酶与Ⅱ型胶原酶的生理盐水混合消化液中恒温摇床培养，以含体积分数10%胎牛血清的M199培养基终止消化，离心收集沉淀，...; 于保锋孟凡秀张琪解军曹睿温晓薇杨巧艳加三三温丽敏白欣艳姚志坚曾思衡袁洋洋张紫燕张丽娜王萱田九博马培元刘志贞傅松涛杨丽红郭睿王惠珍徐钧刁海鹏陈显久胡晓年弓韬王海龙赵虹; 文献传递

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温丽敏

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