本研究旨在制备和鉴定小鼠抗Ⅱ型登革病毒（DENV‐2）10种蛋白的抗体，为后续相关研究提供实验材料。利用真核表达载体pReceiver构建DENV‐210种蛋白的重组质粒，提取质粒 DNA ，肌内注射免疫小鼠，共免疫4次。末次免疫后2周取小鼠血清，利用DENV‐2感染的Vero细胞和DENV‐2各蛋白的稳定表达细胞，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光法（IFA）和蛋白免疫印迹法评价免疫效果，分析抗体的特点。DNA免疫小鼠后获得抗DENV‐210种蛋白的抗血清，抗体效价波动于1∶400～1∶16127之间，以抗E蛋白抗体效价最高，达1∶16127，而抗NS3、NS4b、NS5蛋白抗体效价较低，仅为1∶400。利用DENV‐2感染的Vero细胞和稳定表达病毒蛋白的EAhy926细胞进行IFA染色，抗DENV‐2各蛋白的抗血清均可特异性识别DENV‐2抗原。蛋白免疫印迹结果显示，抗E、NS1、NS4b和NS5蛋白抗体能识别热变性蛋白，其他抗血清未呈现阳性反应条带。本研究提示，DNA免疫小鼠所获得的抗DENV‐2各蛋白抗体能特异性识别自然感染或模拟自然感染状态下的DENV‐2蛋白，可为后续相关研究提供工具，也表明DNA免疫法可作为抗体制备的一种策略。
