胡勤
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- ATF4重组慢病毒抑制C2C12细胞增殖并促凋亡被引量：1
- 2015年
- 目的构建人活性转录因子4(ATF4)慢病毒,探讨C2C12细胞成骨分化过程中ATF4基因慢病毒修饰对其增殖和凋亡的影响。方法构建ATF4重组慢病毒载体质粒,然后与2个包装质粒共转入293T细胞中包装成ATF4慢病毒(LV-ATF4);用病毒感染C2C12细胞,并用流式细胞仪(FCM)检测BMP2诱导C2C12细胞分化时对其增殖凋亡的影响,免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达,电子显微镜观察凋亡细胞的形态学结构变化。结果成功构建和包装了ATF4重组慢病毒。FCM检测结果表明,BMP2+LV-ATF4处理组S期细胞(14.89%)低于BMP2+LV-GFP组(30.64%)(P<0.05);BMP2+LV-ATF4处理组细胞凋亡率(31.06%)高于BMP2+LV-GFP组(11.39%)(P<0.05);凋亡相关蛋白的表达与FCM结果一致。结论在BMP2诱导C2C12细胞成骨分化时,LV-ATF4慢病毒可促进C2C12细胞的凋亡,抑制其增殖。
- 夏飞伍志盟李美玲邓莉胡勤郭风劲
- 关键词：慢病毒成骨分化细胞增殖
- SREBP1c/cm对PERK启动子转录活性及表达的差异性调控
- 2017年
- 目的探讨转录因子固醇调节元件结合蛋白(SREBP1c)及其活性形式(SREBP1cm)对人蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)的调控作用。方法构建人PERK启动子截短体报告基因载体,与内参质粒pRL-SV40共转入人胚肾细胞HEK293检测荧光素酶活性;用pc DNA3.1(-)-SREBP1c、pc DNA3.1(-)-SREBP1cm与PERK启动子转录活性核心区域共转293T细胞,双荧光素酶报告基因分析SREBP1c及活性形式SREBP1cm对PERK启动子转录活性的调控;RT-PCR和免疫印迹法检测SREBP1c、SREBP1cm对PERK mRNA和蛋白表达的影响。结果成功构建PERK启动子截短体报告基因载体,确定了PERK启动子转录活性核心区域;双荧光素酶报告基因分析结果显示SREBP1c抑制PERK启动子的转录活性,而SREBP1cm促进PERK启动子的转录活性。SREBP1c抑制PERK mRNA和蛋白的表达(P<0.05),SREBP1cm促进PERK mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论 SREBP1c和SREBP1cm对PERK启动子转录活性及其表达具有相反的调控作用。
- 胡勤毛雨陆嘉陵谢巍伟郑维郭风劲
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白1C转录活性
- SCAP重组腺病毒对ATDC5细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2016年
- 目的构建固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SRREBP cleavage activating protein,SCAP)基因干扰(small interfering RNA,siRNA)和过表达重组腺病毒,观察其对ATDC5软骨干细胞增殖及凋亡的影响。方法应用pAd EasyTM腺病毒载体系统构建重组腺病毒质粒p Ad-SCAPsiRNA和p AdSCAP,在HEK293细胞中分别包装和扩增。RT-PCR和Western blot检测ATDC5细胞中SCAP的表达,流式细胞仪检测SCAP腺病毒对ATDC5细胞周期和凋亡的影响,Western blot检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、p-JNK的表达。结果成功获腺病毒si SCAP(滴度为2.5×10^(10)PFU/m L)和Ad-SCAP(滴度为3.0×10^(11)PFU/m L)。RT-PCR和Western blot结果表明:siSCAP和Ad-SCAP能分别有效抑制和增强ATDC5细胞中SCAP的表达。流式细胞仪检测结果表明:与正常组和空病毒组比较,si SCAP腺病毒处理组S期细胞比例升高15.45%和16.07%(P<0.05),Ad-SCAP组比例降低14.27%和13.45%(P<0.05);siSCAP组细胞凋亡率降低13.10%和11.50%(P<0.05),Ad-SCAP组升高10.51%和10.17%(P<0.05)。Western blot检测结果与流式细胞仪检测结果一致。结论成功构建SCAP腺病毒;敲低SCAP能促进ATDC5细胞增殖并抑制凋亡;过表达SCAP则抑制增殖、促进凋亡。
- 邓莉伍志盟胡勤郭风劲
- 关键词：重组腺病毒细胞凋亡
- Nrf2重组慢病毒对C2C12细胞增殖、凋亡和分化的影响
- 2017年
- 目的:研究Nrf2对C2C12细胞向成骨细胞分化过程增殖、凋亡和分化的影响。方法:分别构建和包装Nrf2(nuclear factor erythroid 2 p45 related factor 2)过表达及靶向Nrf2和活性转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)的siRNA重组慢病毒颗粒;在骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)诱导下,设立不同病毒感染组处理C2C12细胞,检测各处理组C2C12细胞的增殖、凋亡及成骨相关标志基因的表达。结果:FCM结果显示,BMP2+Lv-Nrf2组细胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP组(P<0.05),BMP2+Lv-si Nrf2组细胞凋亡率高于BMP2+Lv-GFP组(P<0.05),BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4组细胞凋亡率低于BMP2+Lv-GFP组(P<0.05)并同时低于BMP2+Lv-siATF4组(P<0.05);蛋白免疫印迹检测结果与FCM凋亡结果一致;免疫细胞化学检测结果显示,实验组BMP2+Lv-Nrf2组中骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达增高,而BMP2+Lv-si Nrf2组中两种蛋白表达均降低(P<0.05),联合处理组BMP2+Lv-Nrf2+Lv-siATF4中两种蛋白表达低于对照组和BMP2+Lv-Nrf2组(P<0.05)。结论:上述结果表明,在BMP2诱导C2C12细胞成骨分化过程中,Nrf2可抑制C2C12细胞的凋亡,促进其向成骨分化,同时,可挽回因ATF4蛋白减少而产生的细胞凋亡,但对C2C12细胞的骨向分化没有影响。
- 伍志盟邓莉胡勤郭风劲
- 关键词：NRF2慢病毒成骨分化
