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刚性探针标记的顺磁弛豫增强用于蛋白质精细动态学的研究: <正>顺磁弛豫增强(PRE)技术近年来的发展,推动了对蛋白质瞬态结构和动态组学的实验研究。实验过程中,被研究的蛋白质需要通过顺磁标记的方法来获得顺磁弛豫增强(PREs),常用的标记方法是通过蛋白质表面的自由巯基来连接顺磁...; 刘主张子微唐淳; 文献传递

化学交联质谱分析用于蛋白质动态结构的研究: 蛋白质通过结构的动态变化执行其多样的生物学功能,解析蛋白质的动态结构、阐明蛋白质不同结构之间的相互转换过程可以揭示其行使功能的分子机制。由于动态的蛋白质的结构的能量高、存在时间短,常规的生物物理化学手段不易捕获,其动态结...; 刘主; 关键词：蛋白质化学交联质谱蛋白质功能

化学交联质谱分析用于蛋白质动态结构的研究: 蛋白质通过结构的动态变化执行其多样的生物学功能,解析蛋白质的动态结构、阐明蛋白质不同结构之间的相互转换过程可以揭示其行使功能的分子机制。由于动态的蛋白质的结构的能量高、存在时间短,常规的生物物理化学手段不易捕获,其动态结...; 刘主; 关键词：蛋白质化学交联质谱蛋白质功能; 文献传递

重组人尼克酰胺磷酸核糖转移酶及其活性位点突变体蛋白的制备及体外酶活性检测被引量：1: 2011年; 目的:制备和纯化重组人NAMPT和NAMPT(H247A)蛋白,并对其体外酶活性进行检测。方法:以pcDNA3.1-hnampt为模板,通过PCR扩增获得两端分别为BamHⅠ和NdeⅠ酶切位点的hnampt片断,将该片断与pET-11a(+)表达型载体连接,通过点突变获得pET-11a(+)-hnampt(H247A),以测序鉴定构建质粒。将野生型和突变型分别转化至BL21star大肠杆菌,以IPTG诱导蛋白表达,以镍柱和分子筛纯化目标蛋白,以SDS凝胶电泳和质谱鉴定目标蛋白,以核磁共振的方法检测两个重组蛋白在体外酶活性。结果:测序结果表明,pET-11a(+)-hnampt(野生型)及pET-11a(+)-hnampt(H247A)(突变型)表达载体构建成功,突变位点正确。两种蛋白均在BL21star大肠杆菌获得表达,裂解后为可溶性蛋白,通过镍柱、分子筛获得纯化蛋白,SDS凝胶电泳和质谱鉴定证明重组蛋白为分子量约56 kD的NAMPT。核磁共振体外酶活性检测发现野生型NAMPT具有酶活性,而NAMPT(H247A)的酶活性降低了约5～10倍。结论:成功获得了有体外酶活性的人NAMPT蛋白和酶活性较低的人NAMPT(H247A)蛋白,为NAMPT蛋白作用研究提供了基础。; 王峰黄鹏刘主卢韵碧魏尔清张纬萍唐淳; 关键词：磁共振波谱学重组蛋白质类 NAMPT 蛋白纯化

蛋白质结构动态变化的磁共振和单分子荧光研究: ＜正＞蛋白质等生物大分子是动态的。蛋白质结构的动态变化与蛋白的功能密切相关。NMR特别适合于研究蛋白质结构的动态变化。但由于NMR信号是很多分子的系综平均,从NMR数据还原到蛋白质每个构象的贡献会相当困难。在我的报告中,...; 唐淳刘主董旭龚洲易华伟; 文献传递

顺磁弛豫增强技术与蛋白质瞬态结构被引量：3: 2011年; 顺磁弛豫增强(PRE)指未配对单电子与原子核之间的偶极相互作用导致了后者弛豫速率的加快.虽然对PRE的理论描述可追溯至上世纪50年代,但是运用于蛋白质结构的解析仅发生在最近10年.该综述中,首先阐述PRE的原理,介绍PRE实验所用的脉冲序列和1H核横向弛豫增强速率的两点时间测量法.其次,介绍目前所用的各种顺磁探针.接着,回顾近年来PRE在对蛋白质稳态和瞬态结构的研究中的应用.最后,对PRE的发展作了展望,包括差比顺磁弛豫增强(DiSPRE)技术,PRE新型探针的开发以及异核检测等,以期对蛋白质的溶液结构和动力学特性作出更完善的表征.; 刘主唐淳

泛素多聚体的四级结构分布及其与靶蛋白相互作用的机制研究: 蛋白质通过结构的动态变化行使功能。泛素是真核生物中重要的信号蛋白质，它几乎参与所有的生物过程。多个泛素分子可以通过碳端与赖氨酸或者氮端链接形成多聚体，泛素共有八种不同的链接方式，不同链接方式的泛素多聚体的结构不同，识别不...; 刘主龚洲张纬萍唐淳

泛素蛋白及其多聚体动态结构和功能的研究: 2015年; 泛素蛋白（Ub：ubiquitin）是真核细胞中高度保守又极其重要的一类信号蛋白，它通过与下游靶蛋白的相互作用调控多种细胞信号通路。与Ub相互作用的靶蛋白非常多、在细胞内分布极其广泛，几乎参与了所有的生命活动过程_3]。多个Ub之间可以以异肽键共价连接，形成二聚或多聚Ub。Ub之间可以有8种不同的连接方式，以不同方式连接的多聚Ub调控不同的信号通路，参与不同的生命过程。; 刘主龚洲唐淳; 关键词：泛素核磁共振

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刘主