王丽敏
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目江苏省科技支撑计划项目国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学经济管理更多>>
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位序列对其在毕赤酵母中表达的影响
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白具有重要免疫保护作用,但其核定位序列(NLS)对Cap蛋白免疫特性尚不十分清楚.本研究以酵母偏嗜密码子优化的Cap基因为摸板,采用PCR方法分别构建包含完整的和删除NLS的Cap基因的重组酵母载体...
- 侯成才何庆东王丽敏王先炜姜平
- 关键词：猪圆环病毒2型毕赤酵母亚单位疫苗
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒的标准化研究
- 猪圆环病毒（Porcine Circovirus，PCV）是最小的一种动物病毒，含有ORF1和ORF2两个主要的开放阅读框(Open Reading Frame)，分别编码复制相关蛋白Rep和结构蛋白Cap。PCV有PC...
- 王丽敏
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白
- 猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用被引量：2
- 2014年
- 为了进一步提高对猪圆环病毒2型(PCV2)检测的特异性,利用PCV2Cap蛋白及酶标记Cap单克隆抗体,建立了一种检测猪血清中PCV2Cap蛋白抗体的阻断ELISA方法,并将其组装成试剂盒。对阻断ELISA试剂盒进行了敏感性、特异性、重复性、符合率和保存期测定。结果显示,其敏感性高,特异性强,批内批间重复性好,与商品化试剂盒符合率高,保存期长且性质相对稳定。先后制备了5个批次的阻断ELISA试剂盒,用于检测PCV2不同疫苗免疫猪血清、规模猪场PMWS发病猪及同群健康猪血清、不同日龄猪群血清.结果显示,PCV2油佐剂免疫组血清抗体水平相对较高,PWMS发病猪血清抗体水平高于同群健康猪,猪群中育肥猪血清抗体水平最高。
- 王丽敏杨香林侯成才王先炜姜平
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白阻断ELISA
- 乡村振兴背景下乡村公共文化空间重构研究--以贵州省M县若干村为例
- 新时代全面推进乡村振兴既要“塑形”，也要“铸魂”。乡村公共文化空间作为乡村生产生活发展的重要组成部分，同时也是实现乡村振兴“铸魂”的关键场域和重大工程。自十九大以来，围绕产业兴旺、生态宜居、乡风文明、治理有效、生活富裕的...
- 王丽敏
- 关键词：公共文化空间
- 副猪嗜血杆菌不同血清型稳定表达蛋白的筛选及间接ELISA检测方法的建立被引量：9
- 2015年
- 为了建立一种能够检测不同血清型副猪嗜血杆菌抗体的间接ELISA,选用了在4、5、12型副猪嗜血杆菌中稳定表达的3种蛋白经原核表达后作为候选抗原和全菌裂解物同时包被酶标板,对临床猪血清进行副猪嗜血杆菌抗体检测,发现以锰依赖的超氧化物歧化酶(MSD)作为包被抗原得到的结果最接近用副猪嗜血杆菌全菌裂解物进行ELISA检测的结果,故确定以MSD蛋白为抗原建立间接ELISA。通过方阵滴定对ELISA反应条件进行筛选优化,确定了最佳反应条件:包被抗原的质量浓度为1.5μg/mL,4℃过夜;50g/L脱脂奶粉溶液37℃封闭2h;血清稀释度1∶160,37℃作用90min;酶标二抗的稀释度为1∶15 000,37℃作用45min;底物显色时间为37℃6min。抗体临界值D450nm≥0.245 1判为阳性,D450nm<0.208 3判为阴性,介于两者之间为可疑。特异性和重复性试验证明,该方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型、口蹄疫病毒、红斑丹毒丝菌、马链球菌、猪链球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌血清抗体无交叉反应,批内、批间重复性较好。用建立的间接ELISA对114份临床血清进行检测,与4、5、12型全菌裂解物的ELISA检测结果比较,阳性符合率分别为80.77%、80.00%和90.00%。结果表明,建立的间接ELISA可被用于4、5、12型副猪嗜血杆菌的抗体检测和流行病学调查。
- 朱晓明邹垚陈攀王丽敏李玉峰
- 关键词：副猪嗜血杆菌间接ELISA
- 猪圆环病毒2型Cap蛋白核定位序列对其在毕赤酵母中表达的影响被引量：5
- 2014年
- 为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)Cap基因中核定位序列(NLS)对Cap蛋白免疫特性的影响,以酵母偏嗜密码子优化的Cap基因为模板,采用PCR方法分别构建包含完整的和删除NLS的Cap基因的重组酵母载体,并转化至GS115宿主菌,经筛选获得GS115-pPIC9K-Capo和GS115-pPIC9K-CapoΔNLS重组菌株。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达产物Capo和CapoΔNLS均具有Cap蛋白的抗原性,大小分别约为43ku和27ku。电镜观察结果显示,仅Capo可以形成病毒样颗粒。小鼠免疫试验结果显示,CapoΔNLS和Capo诱导的ELISA抗体水平相似,但CapoΔNLS免疫组中和抗体水平明显低于Capo组(P<0.05)。结果表明,Cap NLS对其在酵母中表达产物病毒样颗粒的形成及中和抗原特性有重要影响,从而为PCV2酵母表达亚单位疫苗的研发奠定了基础。
- 侯成才何庆东王丽敏王先炜姜平
- 关键词：猪圆环病毒2型毕赤酵母亚单位疫苗
