廖文林
- 作品数：4 被引量：14H指数：2
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目转基因生物新品种培育专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系的优化被引量：8
- 2015年
- 利用农杆菌菌株EHAl05，对17个栽培大豆品种的大豆子叶节进行了侵染，从大豆基因型、氯气灭菌时间、外植体状态、菌株活力、侵染浓度、侵染时间、共培养时间等方面进行了优化。结果表明：氯气灭菌14～18h，可在不影响大豆种子活力的同时最大限度的减少污染；暗处理1d的外植体活力高于光照处理5～7d的外植体；菌液浓度（OD600nm）在0．8～1．0且侵染浓度OD600nm）为0．6～0．8时GUS瞬时表达率最高；适宜的侵染时间和共培养天数分圳为30min和4d。在上述优化研究基础上，形成一套综合的转基因体系，该体系的最高转化率可达3．33％。不同处理下的GUS瞬时表达率以及17个大豆品种的丛生芽诱导率综合评价显示，适宜转化的基因型为TL-1、HC-3、HC-6、Wil-liams82。
- 翟锐高乐丁雪妮廖文林郑明洁陆智文智海剑
- 关键词：大豆子叶节
- 与SMV--P3互作的GmEF1A和GmVATP的大豆遗传转化及转基因后代抗SMV鉴定
- 大豆花叶病毒（soybeanmosaicvirus，SMV）是马铃薯Y病毒属（Potyvirus）的一种病毒，能侵染大豆并引起花叶、皱缩和坏死等症状，在全球大豆产区造成了严重的减产和品质下降。以传统育种方式培育抗SMV新...
- 廖文林
- 关键词：大豆花叶病毒
- 文献传递
- 大豆花叶病毒CP基因RNAi载体的构建及大豆遗传转化被引量：5
- 2014年
- 为获得含有大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)CP基因干扰片段的转基因大豆新材料,对11个SMV流行株系的CP基因进行了核苷酸序列比对,采用GATEWAY技术构建了RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体pB7GWIWG2(Ⅱ)-CPi,对重组载体测序比对,通过酶切以及PCR方法鉴定载体,并利用农杆菌介导的转基因体系进行大豆遗传转化。克隆出264 bp高度保守的CPi干扰片段,通过测序证实其与目标序列的匹配度达到100%;重组质粒经过XbaⅠ单酶切后出现783 bp和10818bp两条带,经过EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后出现2256bp和9346bp两条带,说明2个ccdB结合位点均被CPi取代;PCR反应得到474 bp和460 bp两条带,说明CPi以反向重复形式与pB7GWIWG2(Ⅱ)组合。共获得10棵T0代转基因幼苗,经除草剂涂抹、PCR、PAT/bar转基因检测试纸检测后,6株为阳性,表明该方法可筛选出对大豆花叶病毒具有抗性的转基因大豆新种质,为SMV抗病育种工程提供良好的亲本材料。
- 高乐翟锐丁雪妮李凯廖文林智海剑
- 关键词：大豆花叶病毒CP基因RNAIGATEWAY技术
- 大豆翻译延伸因子GmEF1A干扰载体的构建及大豆遗传转化被引量：2
- 2016年
- 研究发现GmeEF1A与大豆花叶病毒的P3蛋白存在互作关系,并且参与SMV在大豆体内的繁殖。通过大豆GmeEF1A基因5个拷贝的核苷酸和氨基酸序列比对,确定其保守区间,克隆得到180 bp的干扰片段GmeEF1Ai。利用GATEWAY技术构建RNA干扰(RNA interference,RNAi)表达载体pB7GWIWG2(II)-e EF1Ai,并通过农杆菌介导的子叶节转化法导入到受体大豆品种天隆1号中。测序结果显示重组质粒中插入的干扰片段GmeEF1Ai与目标序列完全符合,通过PCR和酶切验证表明GmeEF1Ai是以反向重复形式插入到表达载体中。经转化获得组培苗8株,PCR、除草剂涂抹和PAT/bar试纸条多重检测确认7株为阳性。绝对荧光定量结果显示,阳性苗中4株为单拷贝。GmeEF1A基因表达量分析结果显示GmeEF1Ai载体对GmeEF1A的5个拷贝基因有不同程度的阻抑。这不仅为验证GmeEF1A基因在大豆受SMV侵染时的功能提供试验材料,也为大豆抗病育种提供新的种质。
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- 关键词：大豆花叶病毒RNAIGATEWAY技术
