钱辉
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南京农业大学食品科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 鱼腥藻脂肪氧合酶热稳定性提高的分子动力学模拟被引量：3
- 2017年
- 为提高鱼腥藻脂肪氧合酶(Anabaena sp.PCC 7160 lipoxygenase,Ana-LOX)的热稳定性,探索其热稳定性机制。通过同源建模预测了Ana-LOX的三维结构,并通过分子动力学模拟技术手段分别模拟了Ana-LOX于298 K和320 K条件下在水溶液中的运动轨迹,计算均方根偏移与均方根涨落后,以均方根涨落为热稳定性评价指标,结合作用力分析,预测不稳定区域。结果表明:Ana-LOX的T94、I96、A325~Q327区域柔性较大,是导致Ana-LOX热不稳定的关键区域。通过I96V定点突变后,半衰期提高到野生型的2.5倍,验证了原预测结果的有效性,从而为脂肪氧合酶分子的热稳定性改造提供了理论依据。
- 钱辉陆兆新张充别小妹赵海珍吕凤霞
- 关键词：脂肪氧合酶同源建模分子动力学模拟热稳定性
- 内生多粘芽孢杆菌EJS-3纤溶酶基因在毕赤氏酵母中的表达被引量：2
- 2014年
- 以自构建的重组质粒p ET-Dsb A/PPFE-I为模板,扩增内生多粘芽孢杆菌纤溶酶基因PPFE-I,构建Pichia pastoris表达载体p PICZαA/PPFE-I,通过电击转化,p PICZαA/PPFE-I被整合到Pichia pastoris SMD1168基因组中,抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导72 h,酶活达到286 IU/ml,是野生菌的2.6倍,表达产物用SDS-PAGE进行分析,在相对分子质量63k Da处出现明显的蛋白条带,降解人血纤维蛋白试验中r PPFE-I最先降解人血纤维蛋白原的α链,其次是β链,而对γ链降解最缓慢。实现了多粘类芽孢杆菌纤溶酶基因在毕赤酵母中的表达,为植物内生菌来源溶栓药物的开发提供了新的途径。
- 钱辉张充陆兆新别小妹赵海珍吕凤霞
- 关键词：纤溶酶毕赤氏酵母异源表达
- 重组大肠杆菌产脂肪氧合酶发酵条件优化被引量：4
- 2016年
- 为进一步提高重组大肠杆菌(pET-23a-pse-LOX)产脂肪氧合酶(lipoxygenase,LOX)的酶活力,利用响应面法对其发酵条件进行优化。通过单因素试验确定诱导时机、诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度、接种量、培养基初始pH值和装液量对其发酵产酶的影响。在此基础上,采用Plackett-Burman试验设计从7个因素中筛选出对LOX产量具有显著效应的因素为诱导时机、诱导时间和培养基初始pH值,并利用Box-Behnken试验设计和响应曲面法分析以确定其产酶的最优发酵条件,即诱导时机为菌液OD600nm达到1.6、诱导时间34h、培养基初始pH7.0。在此条件下,LOX酶活力为(21261.60±264.03)U/mL,比优化前的(13553.96±46.64)U/mL提高了56.87%。
- 和玉军张充钱辉陆兆新别小妹赵海珍吕凤霞
- 关键词：脂肪氧合酶发酵条件响应面法
