谢柳
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- GAD65真核表达载体的构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达被引量：3
- 2013年
- 目的构建GAD65真核表达载体,并分析其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达。方法从SD大鼠脑中提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增GAD65基因,测序鉴定后将GAD65基因克隆入pCDNA3.1中,构建真核表达载体pCDNA3.1-GAD65;原代培养大鼠间充质干细胞,以脂质体介导法将构建好的重组真核表达载体pCDNA3.1-GAD65转染至间充质干细胞;RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot检测GAD65在间充质干细胞中的表达。结果扩增的大鼠GAD65基因序列与GenBbank的参考序列完全一致,无碱基突变,双酶切证明GAD65基因已经正确克隆到真核表达载体pCDNA3.1中;转染骨髓间充质干细胞48h后,RT-PCR、细胞免疫荧光、Western blot证实GAD65的mRNA和蛋白能在细胞中正确表达。结论 pCDNA3.1-GAD65真核表达载体构建成功,并能在大鼠间充质干细胞中正确表达,这为下一步研究携带GAD65的骨髓间充质干细胞治疗癫痫奠定了实验基础。
- 赵元淑罗淼珊邓镇谢柳余涵胡景鑫朱晓琴雷水生
- 关键词：GAD65骨髓间充质干细胞癫痫
- GluN2A抑制剂对癫痫持续状态大鼠脑内P-糖蛋白表达的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨谷氨酸N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)的NR2A亚单位(GluN2A)选择性抑制剂PEAQX对癫痫持续状态大鼠脑内P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法将实验动物随机分为3组:对照组(先侧脑室注射生理盐水,再腹腔注射生理盐水)、致痫组(先侧脑室注射生理盐水,再腹腔注射戊四氮致痫)和抑制剂干预组(先侧脑室注射PEAQX,再腹腔注射戊四氮致痫),观察各组大鼠行为学表现;使用BL-420E生物机能实验系统记录各组大鼠脑电的改变;采用RT-qPCR和Western blot技术,检测各组大鼠海马组织中P-gp mRNA及蛋白表达的变化。结果行为学观察显示:对照组无明显癫痫发作,致痫组癫痫发作快且明显,诱导癫痫持续状态成功,而抑制剂干预组癫痫发作潜伏期长且不明显;脑电结果显示:对照组无明显痫样波,致痫组记录到棘波、尖波、棘-慢复合波等痫样波,抑制剂干预组痫样波减弱或消失;RT-qPCR结果显示:致痫组海马中P-gp mRNA表达增加,抑制剂干预组P-gp mRNA表达明显减少;Western blot结果显示:致痫组海马中P-gp蛋白表达增强,抑制剂干预组P-gp表达明显减弱。结论 GluN2A选择性抑制剂抑制了癫痫的发作,并抑制了P-gp的表达,其机制可能与GluN2A选择性抑制剂抑制了GluN2A的活性有关,并提示GluN2A选择性抑制剂可能与减少癫痫耐药的产生有关。
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- 关键词：侧脑室注射P-糖蛋白癫痫持续状态
- GAD65基因修饰的间充质干细胞在癫痫大鼠脑内的表达及作用被引量：5
- 2013年
- 目的观察GAD65基因修饰的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在癫痫大鼠脑内的表达及对癫痫发作的影响。方法原代培养大鼠MSCs,流式细胞仪鉴定第3代细胞纯度;用LV5-GFP-GAD65病毒液转染MSCs,并鉴定蛋白表达;将GAD65基因修饰的MSCs移植至戊四氮癫痫大鼠模型侧脑室后,观察其对癫痫大鼠行为学、脑电图的影响;Western blot检测细胞移植后大鼠海马组织内GAD65的表达。结果流式细胞仪检测第3代MSCs可以达到较高纯度;LV5-GFP-GAD65转染细胞后,MSCs中能够正确过表达GAD65;细胞移植后GAD65-MSCs组大鼠癫痫的发作次数减少,发作级别减低;脑电图结果表明癫痫发作痫波减少;Western blot检测结果显示GAD65-MSCs组大鼠海马组织中GAD65含量增高。结论脑内移植GAD65基因修饰的MSCs能明显抑制大鼠的癫痫发作。
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- 关键词：GAD65癫痫慢病毒
- P-糖蛋白在大鼠癫痫持续状态表达的动态变化及其意义被引量：1
- 2014年
- 目的:研究戊四氮诱导的大鼠癫痫持续状态模型(status epilepticus,SE)中,P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在72 h内表达的动态变化,为下一步抑制P-gp的表达选定最佳检测时间点。方法:用免疫组化、RT-q PCR和Western blot检测建模后不同时点(0、3、6、12、24、48、72 h)海马组织中P-gp表达的变化情况。结果:免疫组化结果:海马组织中P-gp蛋白在SE 24 h组的平均光密度值为0.325 1±0.008 2,比对照组增加(P<0.05),SE 48 h组的平均光密度值为0.396 3±0.016 8,显著高于对照组(P<0.01);RT-q PCR结果:MDR1a基因在SE 24 h组比对照组增加(P<0.05),SE 48 h组显著高于对照组(P<0.01);Western blot结果:P-gp蛋白在SE 48 h组比对照组增加(P<0.05)。这些结果显示,SE模型中海马组织内P-gp表达在24 h后开始升高,并在48 h达高峰。结论:SE后48 h P-gp的表达达最高峰,此时可能为减少SE后产生耐药的最佳检测时间。
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- 关键词：癫痫持续状态P-糖蛋白戊四氮耐药蛋白
- NT-3基因修饰的MSCs脑内移植对颞叶癫痫大鼠作用的研究
- 目的： 通过原代培养并鉴定大鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）;构建携带神经营养因子-3（Neurotrophin-3,NT-3）基因的慢病毒（Lentivirus,LV）载体;将...
- 谢柳
- 关键词：颞叶癫痫神经营养因子-3间充质干细胞脑内移植
- NT-3基因过表达慢病毒载体的构建和包装及鉴定被引量：3
- 2014年
- 目的构建神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)基因慢病毒载体,检测其在大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达。方法体外扩增NT-3,将NT-3全长载体GV287-GFP与扩增出的NT-3用AgeI进行酶切,将NT-3全长序列克隆入GV-287-GFP,转化大肠杆菌DHS a感受态细胞,筛选出阳性克隆进行基因测序。重组GV287-EGFP质粒、pHelper 1.0质粒和pHelper 2.0质粒三质粒共转染至包装细胞293T,培养48 h后收集细胞上清液,将病毒浓缩后在293T细胞中测定病毒滴度,并检测慢病毒载体在MSCs的转染效率。荧光显微镜观察转染是否成功,RT-PCR和Western blot检测MSCs细胞中NT-3蛋白的表达。结果测序结果和Western blot检测均证明NT-3慢病毒载体构建正确,且在细胞中正确表达。与辅助质粒共包装细胞获得慢病毒颗粒,并成功感染MSCs细胞。包装慢病毒、浓缩病毒悬液的滴度为2×109/ml慢病毒浓缩液。结论成功构建了稳定高效表达NT-3基因的慢病毒载体。
- 谢柳雷水生赵元淑邓镇余涵陈丽胡景鑫朱晓琴
- 关键词：神经营养素-3293T细胞慢病毒载体
