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西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因启动子区的克隆、生物信息学分析及活性研究被引量：1: 2005年; 根据已发表的β-酪蛋白基因全序列设计合成引物,以西农萨能奶山羊乳腺组织基因组DNA为模板,通过长链PCR扩增β-酪蛋白基因组基因5'侧序列。将该序列克隆入pMD18-T载体,并对其进行序列测定。结果克隆得到西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因-4359至+2106共6465bp序列。该序列保留β-酪蛋白第一内含子、第一外显子和第二外显子及其信号肽部分。将该序列与已公布的其他山羊β-酪蛋白基因序列进行比较,其同源性为96%～98%。生物信息学分析显示,β-酪蛋白基因启动子区包含有TATA启动子序列和HOXF、Oct-1、AP1、CEBP、STAT、NFKB、GR、ER、PR和ETS等转录因子识别位点。将此6465bp片段插入荧光素酶报道基因载体pGL3-Basic中,构建重组质粒pGL3/B65,瞬时转染萨能奶山羊原代培养的乳腺上皮细胞48h后检测显示,该假设的启动子区确有启动子功能,对泌乳激素发生反应。本研究为进一步构建有效的乳腺生物反应器载体奠定了基础。; 梁克明朱婧童德文陈南春陈苏民; 关键词：Β-酪蛋白基因西农萨能奶山羊启动子区域转录调控

重组人骨形成蛋白-7成熟肽的表达、纯化及活性的研究被引量：3: 2005年; 目的: 研究重组人骨形成蛋白-7 (rhBMP- 7m)羧基端140个氨基酸成熟肽的大肠杆菌表达、纯化及活性,为其实际应用打下基础. 方法: 将编码此成熟肽的cDNA亚克隆入含PL启动子的表达质粒pDH2中,构建表达质粒pDH2 B7m,转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达;通过包涵体洗涤、离子交换层析纯化目的蛋白;用Westernblot验证透析复性后表达蛋白的抗原性,用含荧光素酶报告基因专门用于检测BMP活性的细胞株C2C12- K4检测其活性. 结果:成功构建了PL启动子控制的原核表达载体pDH2 -B7m; 42℃诱导5h后表达量达到最高水平,约占菌体总蛋白40. 3%,表达产物以包涵体形式存在. 包涵体经洗涤、离子交换层析纯化,目的蛋白纯度至少在96. 0%以上. Westernblot实验证实其抗原性,细胞株C2C12- K4反应的检测表明透析复性后的rhBMP- 7m有较强的活性. 结论:成功地在E.coli中表达了hBMP- 7m重组蛋白并证明其有较强的生物活性.; 梁克明朱婧李云峰陈南春陈苏民; 关键词：人骨形成蛋白表达载体构建蛋白质纯化生物活性分析

西农萨能奶山羊β酪蛋白基因5′侧序列通用表达载体的构建被引量：2: 2005年; 目的:检测β酪蛋白基因5′侧序列的启动BglⅡ效果及构建真核表达载体pcDNA3.165.方法:采用SalⅠ和BamHⅠ对pMDT/65双酶切,得到6465bp的β酪蛋白基因5′侧序列;将启动子片段插入到XhoⅠ和BglⅡ双酶切后的pGL3Basic载体里;获得重组报告基因载体pGL3B65.瞬时转染西农萨能奶山羊原代培养的乳腺上皮细胞,检测β酪蛋白基因5′侧序列的启动效果.将β酪蛋白基因5′侧序列插入真核表达载体pcDNA3.1(-)的XhoⅠ和BamHⅠ位点之间,从而获得载体pcDNA3.165.结果:长度为6465bp的β酪蛋白基因5′侧序列能有效地启动荧光素酶报告基因,并正确构建了真核表达载体pcDNA3.165.结论:克隆的β酪蛋白基因5′侧序列在转录水平上具有生物学功能,为进一步建立转基因动物乳腺生物反应器奠定了坚实的基础.; 朱婧梁克明童德文陈苏民窦忠英; 关键词：西农萨能奶山羊

西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因5′侧序列克隆和分析及乳腺特异性表达载体的构建: 乳腺生物反应器(MGB)是一种高效率蛋白质合成器官，它可以利用转基因动物的乳腺组织生产基因工程药用蛋白。采用基因工程技术在动物乳腺生产有药用价值的蛋白质和多肽，具有产量高、成本低和产品质量好等优点。目前常用的转基因动物有...; 朱婧; 关键词：序列克隆动物乳腺生物反应器药用蛋白活性蛋白; 文献传递

人胰腺干细胞建系的研究: 窦忠英效梅安立龙华进联雷安民杨学义马宵飞葛昕朱婧乔海赵亭樊敬庄; 经细胞形态、克隆行为、免疫组化染色、RT-PCR、体外定向诱导分化、体内自然分化、染色体核型分析、线粒体DNA分析及诱导胰岛移植抗大鼠糖尿病等方法检测，证实本实验室建立的人胎儿胰腺干细胞系具有人胰腺干细胞的特征。人胎儿胰...; 关键词：; 关键词：人胎儿

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朱婧