倪金虎
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省公益性技术应用研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 骨膜去细胞生物支架制备方案优化
- 目的 探究制备兔胫骨骨膜去细胞生物支架的最佳方案,为后续骨膜去细胞生物支架作为支架材料应用于骨组织工程领域提供一种新的选择。方法 取健康新西兰大白兔,游离双侧胫骨近端内侧骨膜,不同方案1,2和3通过物理冻融(-80℃,2...
- 张琪林贤丰倪金虎陈蕴缤陈家鑫张增毛翌婷叶海东陈凯陈雷范顺武
- 关键词：去细胞骨膜胶原生物相容性皮下包埋
- 骨膜去细胞生物支架的制备和鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的制备兔骨膜去细胞生物支架,为骨缺损、骨不愈的组织工程研究提供天然的生物支架材料。方法取健康新西兰大白兔,游离双侧胫骨近端内侧骨膜,通过物理冻融(-80℃,24h)、去污剂洗脱(triton-X 100、SDS)和酶消化(DNA酶、RNA酶)获取骨膜去细胞生物支架。通过HE染色、DAPI染色、琼脂糖电泳和基因组DNA定量分析(n=5)测定细胞结构及DNA成分残留;Masson染色和羟脯氨酸测定法(n=6)定性定量检测骨膜细胞外基质的主要成分(胶原)的保留情况;扫描电子显微镜下观察骨膜去细胞生物支架的表面微结构;CCK8法检测支架浸提液毒性;皮下包埋实验(n=4)观察该支架的免疫排斥反应。结果 HE染色和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色表明去细胞支架无残留细胞;琼脂糖电泳未见明显DNA条带;DNA定量检测显示组织去细胞率达95%以上;Masson染色及羟脯氨酸测定表明去细胞支架胶原成分被保留;扫描电子显微镜下细胞外基质呈现三维网状疏松结构;不同体积分数的浸提液对骨膜细胞的增殖与对照组(普通培养基)比较无明显抑制作用(P>0.05);异体皮下包埋实验显示,该去细胞支架免疫排斥反应不明显。结论运用物理冻融、去污剂洗脱和酶消化等方法所获取的骨膜去细胞生物支架细胞去除彻底,细胞外基质的结构及主要成分保留完好,生物相容性良好。
- 陈凯倪金虎李剑敏金可可马羽捷张琪叶奕亨汪洋陈雷
- 关键词：去细胞骨膜皮下包埋MASSON染色扫描电子显微术
- 兔胫骨与颅骨骨膜的去细胞支架的制备及其成血管能力的探究
- 目的探究制备兔胫骨骨膜和颅骨骨膜去细胞生物支架的方案,研究两种材料成血管能力。方法:取健康新西兰大白兔56只,游离双侧胫骨近端内侧骨膜以及颅额骨骨膜,分别取标本共112片。两种骨膜均采用以下方案处理(颅骨骨膜处理前预先体...
- 倪金虎张琪林贤丰范顺武
- 关键词：去细胞颅骨骨膜胫骨骨膜
- 文献传递
- 兔胫骨骨膜去细胞生物支架制备方案的优化被引量：3
- 2016年
- 目的探讨制备兔胫骨骨膜去细胞生物支架的最佳方案。方法取健康新西兰大白兔70只，游离双侧胫骨近端内侧骨膜，共获取骨膜标本140个。用以下三种方案处理骨膜：方案1，物理冻融（-80℃，24h），置入含体积分数2％Triton-X100和3．5×10^-3mol／LPMSF的脱细胞混合液中振荡18h，10g／LSDS溶液中振荡12h，酶消化（DNA酶、RNA酶）；方案2，SDS仅振荡6h，其他同方案1；方案3，改10g／LSDS溶液中振荡12h为0．5mol／LNaCl溶液中振荡12h，其他同方案1。三种方案制备的支架及未处理的新鲜骨膜通过HE、DAPI和基因组DNA定量分析测定细胞结构及DNA含量是否小于评价去细胞的标准浓度50ng／mg；以番红“O”染色、Masson染色和羟脯氨酸测定法定性、定量检测骨膜细胞外基质主要成分（胶原、糖胺聚糖）的保留情况；以扫描电镜观察骨膜去细胞生物支架的表面微结构；以异体皮下包埋实验观察支架的炎细胞浸润等免疫排斥反应及组织重构现象。结果经方案1、2和3处理后，HE染色切片光镜下去细胞支架均无残留细胞，DAPI荧光染色未发现细胞核及核碎片存在，DNA定量检测组织去细胞率均达95％以上且含量均小于50ng／mg。方案3与方案1和2相比，骨膜去细胞支架中主要成分[胶原定量（36．94±0．70）μg／mg]保留更加完整，电镜下观察支架的胶原连续无断裂，胶原纤维排列规整，完整性好；异体皮下包埋后炎细胞浸润较少，免疫排斥反应不明显，并出现支架降解及重构现象。结论应用物理冻融（-80℃，24h）、含体积分数2％Triton-X100和3．5×10^-5mol／LPMSF的脱细胞混合液中振荡18h、0．5mol／LNaCl溶液中振荡12h及酶消化（DNA酶、RNA酶）处理后的骨膜生物支架去细胞更彻底，细胞外基质结构和成分保留更完整，且植入体内后免疫排斥反应小，生物相容性好。
- 张琪倪金虎林贤丰陈蕴缤陈家鑫张增毛翌婷叶海东陈凯陈雷范顺武
- 关键词：骨膜胶原生物相容性
