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胚盘下腔显微注射慢病毒载体制备转基因鹌鹑: 2016年; 利用显微注射法给每枚新鲜鹌鹑种蛋胚盘下腔注射滴度为1×109 TU/mL人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)慢病毒载体1μL,直接封口后孵化出雏,应用倒置荧光显微镜及分子生物学方法检测。结果显示:在注射慢病毒后第4天,倒置荧光显微镜下观察到发育胚胎卵黄膜上绿色荧光蛋白较强表达;试验操作240枚鹌鹑种蛋,孵化出雏34只,孵化率为14.1%;对新出雏鹌鹑解剖后,可检测到喙部、眼部、羽毛、肝脏、肾脏、盲肠、肺脏、小肠、大肠、输卵管、心脏、胸肌及大脑等内脏器官中绿色荧光蛋白广泛性表达,但在性腺中绿色荧光蛋白表达信号较弱;对发育到性成熟期的G0代19只雄性鹌鹑精液基因组聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测,其中3只为阳性,阳性率为15.7%(3/19);在3只阳性雄性鹌鹑的236只后代中,有4只经PCR及印迹杂交(Southern-blot)检测为阳性,阳性率为1.69%(4/236)。结果表明:利用慢病毒载体胚盘下腔注射成功生产出转基因鹌鹑,为转基因禽类制备提供了一种简便易行的好方法。; 张自富赵瑜胡静贺东阳刘锦妮李洵章平刘纪成张广强陈培荣; 关键词：显微注射慢病毒载体增强型绿色荧光蛋白

蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官氧化应激的影响被引量：2: 2022年; 为研究蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官抗氧化能力的影响,试验将320只20日龄雄性淮南麻鸭随机分为4组,每组4个重复,每个重复20只鸭。热应激组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加0.08 g/kg、0.12 g/kg和0.16 g/kg蜂毒素的基础日粮。每天进行4 h热应激处理(温度36~38℃,相对湿度60%~70%),持续15 d,采集胸腺、脾脏和法氏囊,计算器官指数,检测胸腺、脾脏和法氏囊中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)mRNA相对表达水平,以及谷胱甘肽(GSH)和SOD活性以及丙二醛(MDA)浓度。结果显示:添加蜂毒素对热应激鸭平均采食量、平均日增重、料肉比,以及胸腺、脾脏和法氏囊指数无显著性影响(P>0.05);与热应激组相比,Ⅰ组脾脏GSH-Px、SOD和CAT mRNA相对表达量显著增加,脾脏MDA含量显著降低(P<0.05),Ⅱ组胸腺和脾脏GSH-Px、SOD和CAT与法氏囊SOD mRNA相对表达量、SOD活性均显著增加及脾脏MDA含量显著降低(P<0.05),Ⅲ组热应激鸭胸腺和法氏囊SOD mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。综上,饲粮添加蜂毒素能提高热应激淮南麻鸭的抗氧化能力,缓解热应激导致的氧化应激损伤,以添加0.12 g/kg蜂毒素为宜。; 李治利秦清明李新玉冯智园易先国张自富祝发明唐雪峰; 关键词：蜂毒素热应激淮南麻鸭免疫器官抗氧化指标

一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法: 本发明属于转基因鸡的制备技术领域，公开一种输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡的制备方法。（1）、构建表达载体质粒pCSII‑ERE‑OV‑EXE；（2）、将包装质粒pCAG‑HIVgp、包膜蛋白质粒pCMV‑VSV‑G‑...; 张自富胡静麻冰洁赵瑜秦清明赵聘赵云焕

一种鸡Fowlicidins‑1抗菌肽在毕赤酵母中的分泌表达方法: 本发明属于生物工程领域，具体涉及一种鸡Fowlicidins‑1抗菌肽在毕赤酵母中的分泌表达方法。本发明利用pPIC9K载体与Fowlicidin‑1优化序列构建出甲醇诱导性毕赤酵母表达菌株SMDFW，通过优化甲醇诱导、...; 祝发明张自富李登云孙江宏柴保国; 文献传递

一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法: 本发明属于禽类早期性别鉴定技术领域，具体涉及一种无损鉴定单性态禽类早期性别的PCR方法。该方法通过采集早期禽类的含有羽髓的羽毛，通过简洁高效的方法对DNA进行提取，以提取的DNA为模板采用PCR扩增引物进行PCR扩增，然...; 秦清明李治利易先国张自富赵云焕赵瑜朱忠珂; 文献传递

FSH激活的ERKl/2信号通路在GC细胞增殖分化过程中的作用被引量：1: 2014年; 为探明由促卵泡刺激素(FSH)激活的胞外信号调节蛋白激酶l/2(ERKl/2)通路在颗粒细胞(GC)增殖分化过程中的作用,以分离培养的SD大鼠GC为材料,研究了FSH激活的ERK1/2通路对GC增殖和分化的影响。结果显示:FSH快速诱导了ERK1/2的磷酸化,这种诱导作用具有时间依赖性,FSH作用0.33h时其磷酸化水平达到最高,用磷酸蛋白激酶A(PKA)的特异性抑制剂H89抑制PKA活性,显著降低了FSH和腺苷酸环化酶激活剂(forskolin)对ERK1/2的激活作用。以增殖细胞核抗原(PCNA)为GC增殖指标,以甾体生成快速调节蛋白(StAR)和甾体生成为GC分化指标,检测发现50ng/mL的FSH以时间依赖方式诱导了PCNA蛋白的表达,FSH处理2h,PCNA蛋白水平达到最高;用UO126(ERK1/2的特异性抑制剂)阻断ERK1/2通路发现,FSH对PCNA和甾体生成的促进作用明显减弱;激光共聚焦检测结果进一步显示,与对照组相比,FSH组StAR信号明显增强,抑制ERK1/2活性显著降低了StAR的荧光强度。可见,FSH激活的ERK1/2通路促进了PCNA和甾体的生成,诱导了GC的增殖和分化。; 章平张自富; 关键词：促卵泡刺激素颗粒细胞细胞增殖 ERK1

蜂毒素对青年鹌鹑生长性能、抗氧化功能、肠道机械屏障功能及肠道菌群结构与功能的影响: 2024年; 为研究日粮中添加蜂毒素对青年鹌鹑生长性能、抗氧化功能、肠道机械屏障功能及肠道菌群结构与功能的影响,试验将120只30日龄雄性白沙维鹌鹑适应性饲养7 d后,采用单因素完全随机设计均分为2组(对照组和蜂毒素组),对照组仅饲喂基础日粮,蜂毒素组饲喂添加蜂毒素(0.12 g/kg)的试验日粮,每组4个重复,每个重复15只,试验期为15 d。试验第1天和试验结束后进行称重,每天记录采食量,计算平均日采食量、平均日增重和料重比;试验结束后每组各重复中随机选取1只鹌鹑进行心脏采血,收集血清,检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)质量浓度,以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度;采血后处死鹌鹑,采集十二指肠、空肠和回肠组织进行小肠组织形态结构参数(绒毛高度、隐窝深度、绒毛高度与隐窝深度比值)的测定;采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测空肠机械屏障基因[黏蛋白-2(Mucin-2)、闭合小环蛋白-1(ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、闭合蛋白-1(Claudin-1)基因]的相对表达量;取盲肠内容物进行菌群16S rDNA基因测序,分析盲肠菌群α多样性(ACE、Chao、Shannon和Simpson指数)和菌群结构与分布情况,并对元基因组进行功能基于直系同源簇(Cluster of Orthologous Groups,COG)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)数据库对菌群功能进行预测。结果表明:与对照组比较,蜂毒素组平均日采食量显著增加(P<0.05),平均日增重和料重比差异不显著(P>0.05);血清SOD活性显著提高(P<0.05),MDA浓度显著降低(P<0.05),GSH-Px活性差异不显著(P>0.05);空肠绒毛高度、十二指肠和空肠绒毛高度与隐窝深度比值显著升高(P<0.05),十二指肠隐窝深度显著降低(P<0.05),其他形态结构参数差异不显著(P>0.05);Mucin-2、ZO-1、Occludin和Claudin-1基因相对表达量显著提高(P<0.05)。两; 李治利尹磊易先国杨帅亮王慧敏赵严娜张自富秦清明; 关键词：蜂毒素鹌鹑抗氧化功能

早期胚胎血管显微注射慢病毒载体制备转基因禽类的研究被引量：2: 2015年; 根据禽类独特的生殖生理特点及特殊的胚胎发育模式,把原始生殖细胞法、显微注射法和慢病毒载体法3种转基因技术结合起来,以期探索出简便、高效的生产转基因禽类新方法。在鹌鹑胚胎发育至第13~15期,血液循环中的原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)数目达到最高值,血管显微注射携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein,eGFP)的人类免疫缺陷病毒I型(Human immunodeficiency virus-1,HIV-1)慢病毒载体,每枚胚胎注入1μL,滴度为1×109 TU·mL-1。80枚鹌鹑种蛋,孵化出雏48只,孵化率为60%;对新生鹌鹑解剖后,在荧光显微镜下检测,其喙部、羽毛、眼部、大脑、血管、心、肝、脾、肺、肾、腺胃、肠系膜、小肠、大肠、输卵管、肌肉及爪上检测到绿色荧光蛋白表达,特别是在性腺中观察到绿色荧光蛋白广泛性表达。G0代28只雄性鹌鹑中,成功采集到21只精液,其中5只个体精子基因组经聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)检测阳性,阳性率为23.8%(5/21);在5只阳性个体的G1代46只后代中,有6只经PCR及印迹杂交(Southern blot)检测均为阳性,阳性率为13.0%(6/46)。利用胚胎发育至第13~15期血管显微注射慢病毒载体能够有效感染此时期迁移的PGCs,获得性系嵌合体个体,最终成功获得转基因后代。该方法简便、高效的生产出转基因禽类,必将为禽类转基因研究提供一种新的思路和方法。; 张自富赵瑜刘锦妮李洵彭新亮章平胡静贺东阳常姣姣谷梦迪金楠楠王亚芳; 关键词：显微注射慢病毒载体增强型绿色荧光蛋白

输卵管特异性表达艾塞那肽的转基因鸡制备: 2023年; 艾塞那肽(exenatide)是从墨西哥巨蜥蜴毒液中分离出来的一种含有39个氨基酸的多肽序列,与胰高血糖素样肽(glucagon-like peptide 1,GLP-1)具有53%的同源性,与GLP-1同作用于G-蛋白偶联受体,是首个获准上市的肠促胰岛素类似物抗糖尿病药物。本试验构建了一个基于复制缺陷型慢病毒载体,该载体由一个克隆约2.8kb的鸡卵清蛋白基因特异性启动子调控表达的艾塞那肽基因cDNA(117bp)序列,并在鸡卵清蛋白基因特异启动子上游添加一段雌激素响应受体(estrogen response elements,ERE)(675bp)序列。利用实验室建立的生产转基因家禽技术平台,通过显微注射法把包装好的高滴度慢病毒载体注入发育至第1415期鸡胚卵黄外周静脉血管,获得生殖系嵌合的G0代鸡,扩繁后对G1代和G2代转基因鸡进行分子生物学检测,并对G2代母鸡蛋清中的艾塞那肽含量进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测。试验结果显示G1代有5只转基因鸡,均为单拷贝插入;G2代母鸡蛋清中的艾塞那肽平均表达量为45.19g/L。免疫组织化学检测结果显示艾塞那肽仅在输卵管上皮组织特异性表达。本试验建立了一种慢病毒载体介导的血管显微注射法制备转基因鸡的方便快捷、高效稳定的新型技术体系,为利用鸡输卵管生物反应器生产具有重要价值的药用蛋白提供了一种新方法,具有重要的商业价值和应用前景。; 张自富胡静赵瑜秦清明麻冰洁赵聘陈思睿赵云焕; 关键词：转基因鸡慢病毒载体

一种慢病毒载体介导血管显微注射制备转基因鸡的方法: 本发明属于转基因鸡的制备技术领域，公开一种慢病毒载体介导血管显微注射制备转基因鸡的方法。（1）、将慢病毒质粒pGC‑FU转染293T细胞，培养、过滤，获得慢病毒溶液；（2）、新鲜鸡种蛋取回消毒后，孵化；（3）、将发育至第...; 张自富胡静麻冰洁赵瑜秦清明赵聘赵云焕

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张自富

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