金海东
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：温州医科大学更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金温州市科技局科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 自噬抑制增强白藜芦醇对人软骨肉瘤细胞凋亡的诱导被引量：3
- 2015年
- 目的:研究白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导软骨肉瘤细胞凋亡的同时是否激活自噬及自噬抑制剂联合白藜芦醇对软骨肉瘤细胞的作用。方法:SW1353软骨肉瘤细胞设对照组、Res组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3MA)组及Res+3MA组,用透射电镜观察对照组及Res组细胞自噬体,CCK-8法反映4组细胞活力,Western blotting测cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2表达量及TUNEL法来反映4组细胞凋亡情况,Western blotting检测Beclin1、LC3-Ⅱ及p62表达量反映4组细胞自噬情况。结果:在Res作用下,正常细胞活力下降和凋亡水平上升的同时,自噬水平明显上升(P<0.05);应用3MA下调正常细胞自噬水平后,3MA组凋亡水平较正常组上升(P<0.05);在Res联合3MA作用下,Res+3MA组较Res组细胞活力和细胞自噬水平显著下降(P<0.05),而凋亡水平显著上升(P<0.05)。结论:Res诱导软骨肉瘤细胞凋亡的同时,上调细胞自噬水平;自噬抑制增强Res对人软骨肉瘤细胞凋亡的诱导。
- 周凯亮吴凯张小磊王雍立金海东田乃锋陈招杰徐华梓
- 关键词：软骨肉瘤白藜芦醇自噬细胞凋亡
- β2微球蛋白在骨髓基质干细胞的表达
- 2013年
- 通过流式细胞技术和激光共聚焦显微镜探索骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)β2微球蛋白(beta 2 microglobulin,β2M)的表达情况。取第3代相同状态的SD大鼠骨髓基质干细胞,分为A、B两组,A组为未分化的BMSCs,B组为软骨诱导分化1周的BMSCs,两组均采用流式细胞技术和激光共聚焦显微镜分别从数量和细胞轮廓上检测β2M的表达。流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果均表明,未分化BMSCs的β2M表达明显低于软骨诱导分化的BMSCs。结果表明,未分化的BMSCs免疫原性较低,处于软骨分化的BMSCs免疫原性明显增强。
- 范时洋金海东戴兵潘骏
- 关键词：骨髓基质干细胞Β2微球蛋白免疫原性
- 低氧对脂肪干细胞和关节软骨细胞三维共培养成软骨能力的影响被引量：4
- 2014年
- 背景:多项体内外研究表明低氧和共培养均促进干细胞向软骨细胞方向分化。目的:观察低氧对脂肪干细胞和关节软骨细胞三维共培养成软骨能力的影响。方法:脂肪干细胞和关节软骨细胞二者按3∶1比例混合,以5×1010 L-1接种于聚乳酸-羟基乙酸共聚物/明胶支架上,分别在常氧(体积分数为20%O2)、低氧(体积分数为5%O2)环境下培养6周。苏木精-伊红染色进行组织学分析,阿尔新蓝染色鉴定糖胺多糖的合成,免疫组化鉴定Ⅱ型胶原的表达,并测定各组支架-细胞复合物的DNA、糖胺聚糖、羟脯氨酸含量。结果与结论:低氧组苏木精-伊红染色显示大量细胞及细胞外基质生成,阿尔新蓝染色显示有大量糖胺多糖生成,免疫组化显示Ⅱ型胶原表达强阳性,且DNA、糖胺聚糖、羟脯氨酸等各项指标均高于常氧组。表明低氧促进脂肪干细胞和关节软骨细胞共培养成软骨分化。
- 戴兵徐海艇金海东陈辉蔡建武范时洋潘骏
- 关键词：干细胞共同培养技术细胞低氧低氧脂肪干细胞聚乳酸-羟基乙酸共聚物
- 白藜芦醇通过sirt1抑制软骨肉瘤细胞增殖机制及相关信号通路的研究
- 目的:不同浓度白藜芦醇作用于软骨肉瘤细胞持续不同时间后，探讨能否抑制其增殖能力并且诱导凋亡，同时探讨白藜芦醇能否影响PI3K/AKT、ERK1/2信号通路起到抗软骨肉瘤细胞生长。并进一步探讨白藜芦醇抗软骨肉瘤的机制是否依...
- 金海东
- 关键词：软骨肉瘤白藜芦醇细胞增殖
- 白藜芦醇通过PI3K/Akt通路及线粒体途径抑制软骨肉瘤被引量：5
- 2014年
- 目的:探讨白藜芦醇抑制软骨肉瘤的机制及对线粒体途径和PI3K/Akt通路的影响。方法:SW1353软骨肉瘤细胞培养至对数生长期后设对照组和白藜芦醇处理组,药物处理组用25、50和100μmol/L白藜芦醇处理24 h、48 h或72 h。采用CCK8法检测SW1353软骨肉瘤细胞的活力,Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡,Western blotting检测activated caspase-3、Bcl-2、Bax、Akt和p-Akt蛋白在细胞中表达情况,细胞划痕实验观察细胞迁移情况。结果:白藜芦醇处理后细胞活力下降,呈时间-剂量依赖性(P<0.01)。Hoechst 33258染色检测可见药物处理组有明显的细胞凋亡核象。Western blotting检测显示药物处理组activated caspase-3和Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白和p-Akt蛋白表达下调,总Akt改变不显著。细胞划痕试验显示,白藜芦醇能显著抑制SW1353细胞的迁移。结论:白藜芦醇能够诱导软骨肉瘤凋亡,部分是通过线粒体途径及PI3K/Akt信号通路发挥作用。
- 金海东戴兵蔡建武陈辉范时洋潘骏
- 关键词：软骨肉瘤白藜芦醇PI3K/AKT通路细胞凋亡
- siRNA对预分化骨髓间充质干细胞β_2M表达的影响
- 2014年
- 目的:研究小干扰RNA(siRNA)对预分化骨髓间充质干细胞(BMSCs)β2-微球蛋白(β2M)基因表达的影响。方法:BMSCs成软骨诱导液预分化21 d后,将β2M siRNA用Lipofectamine 2000转染BMSCs、分为转染组、空白对照组和阴性对照组,应用实时定量PCR、Western blotting、激光共聚焦显微观察等方法检测siRNA对预分化BMSCs的β2M mRNA和蛋白的表达情况,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光检测预分化BMSC的蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原分泌情况。结果:实时定量PCR、Western blotting和激光共聚焦显微观察结果显示siRNA成功抑制β2M mRNA和蛋白的表达,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光结果显示siRNA不影响预分化BMSCs蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原蛋白的分泌。结论:RNAi干扰β2M可降低BMSCs中β2M mRNA和蛋白的表达,但不影响预分化BMSCs的软骨细胞特性。
- 戴兵范时洋陈龙金海东蔡建武潘骏
- 关键词：Β2-微球蛋白骨髓间充质干细胞
- 橄榄苦苷对IL-1β诱导的大鼠软骨细胞损伤的作用及机制研究被引量：7
- 2015年
- 目的:研究橄榄苦苷对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的SD大鼠关节软骨细胞的影响。方法:采用酶两步顺序消化法消化SD大鼠关节软骨分离细胞,体外培养软骨细胞,光学显微镜观察细胞形态,阿尔新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化法对软骨细胞进行鉴定。橄榄苦苷对软骨细胞的细胞毒性采用CCK-8实验进行评估。取第3代软骨细胞,分别用浓度为10、50或100μmol/L的橄榄苦苷预先处理,随后用IL-1β刺激细胞24 h,所生成的NO和前列腺素E2(PGE2)的量分别用格里斯重氮化反应和酶联反应吸附实验进行评估。基质金属蛋白酶(MMP)-1和MMP-13 mRNA的表达利用实时荧光定量PCR进行定量检测。采用免疫印迹实验分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶2(COX-2)和活化NF-κB的蛋白表达。结果:软骨细胞在不同浓度橄榄苦苷培养24 h后,其生存能力与对照组相比无明显差异。橄榄苦苷可以显著降低IL-1β刺激下软骨细胞MMP-1和MMP-13 mRNA的表达及NO、PGE2的生成。橄榄苦苷通过减少IκB蛋白的降解从而抑制IL-1β介导的NF-κB通路的活化。结论:橄榄苦苷可通过NF-κB信号转导通路调控炎症的发生发展,进一步明确了橄榄苦苷对关节炎防治作用的分子机制,为骨关节炎的免疫治疗提供了重要的基础理论依据。
- 戴兵徐俐金海东蔡宁宇陈辉李斌蔡建武潘骏
- 关键词：橄榄苦苷白细胞介素1Β一氧化氮骨关节炎
