操敏
- 作品数：4 被引量：8H指数：1
- 供职机构：南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人红细胞血型B抗原单链抗体基因的构建表达被引量：1
- 2000年
- 王长军唐家琪李先富潘秀珍操敏
- 关键词：抗原单链抗体基因构建
- 汉滩病毒截短核蛋白在大肠杆菌中表达及其抗原分析被引量：6
- 1999年
- 目的 体外克隆表达肾综合征出血热病毒部分核蛋白编码基因，筛选病毒核蛋白在人体体液应答中的主要抗原决定簇区，以期获得高质量核蛋白抗原，为研制新型ＨＦＲＳ基因工程诊断试剂奠定基础。方法 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶酶切的方法分离汉滩病毒７６－ １１８ Ｓ片段部分编码基因（ＳＡ、ＳＢ和ＳＣ），并分别克隆入Ｔ７ 原核表达载体，在大肠杆菌中表达；免疫印迹试验和酶联免疫吸附反应分析重组抗原活性。结果 截短核蛋白得到有效表达，分子量分别约为４．５ＫＤ（ｒＳＡ）、２５ｋＤ（ｒＳＢ）和１５．５ｋＤ（ｒＳＣ），Ｗｅｓｔｅｒｎ－ ｂｌｏｔ分析表明２５ｋＤ截短核蛋白具有较好的抗原活性；粗提抗原Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ 方法检测ＨＦＲＳ患者血清结果与ＩＦＡ 法一致；２５ｋＤ重组小片段抗原与抗ＨＦＲＳＶ单克隆抗体５Ｈ５、Ｂ１１ 及Ｈ７可发生特异性反应。结论 汉滩病毒核蛋白的主要抗原决定簇主要集中在氨基端；
- 王长军唐家琪潘秀珍操敏李先富郭恒彬
- 关键词：肾综合征出血热汉坦病毒大肠杆菌
- 贝氏柯克斯体可视化等温扩增法建立被引量：1
- 2017年
- 目的建立针对贝氏柯克斯体的快速可视化环介导等温扩增(LAMP)方法。方法体外合成贝氏柯克斯体的IS1111a基因,构建重组质粒。利用在线引物设计软件设计3组LAMP引物,用实时浊度仪筛选出最佳引物,同时对羟基萘酚蓝浓度进行优化,建立可视化LAMP反应体系,并评价其敏感性和特异性。结果建立的可视化LAMP反应可准确检测出贝氏柯克斯体的重组质粒和新桥株,不与其他立克次体产生交叉反应,最低可检测到3.6×10~2拷贝/反应,较普通聚合酶链反应(PCR)法的灵敏度提高了一个数量级,等同于实时浊度法和实时荧光定量PCR方法的检测灵敏度。结论建立的可视化LAMP方法可敏感、特异地检测出贝氏柯克斯体感染,操作简单快捷,适用于基层卫生防疫和疫情现场的病原筛查。
- 张琪徐睿瑶胡梦佳李俊韩一芳吕恒秦瑶操敏张锦海王长军
- 关键词：贝氏柯克斯体环介导等温扩增可视化
- 抗人RBC血型B抗原双价小分子抗体基因的构建与表达
- 1999年
- 目的： 分离抗人红细胞血型Ｂ抗原单克隆抗体（ｍＡｂ） ５Ｄ１２ 可变区基因， 构建并表达其双价小分子抗体（ｄｉａｂｏｄｙ） 融合蛋白， 为用原核细胞生产抗血型Ｂ抗原工程抗体进行基础研究。方法： 设计合成抗体重、轻链可变区引物， 通过加端ＰＣＲ技术， 在ｍＡｂ ５Ｄ１２ ＶＨ 和ＶＬ基因两端引入连结短肽和适当的限制性酶切位点，体外连接构建５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 基因， 并将其克隆入融合表达载体ｐＧＥＸ４Ｔ２ 中， 在Ｅ－ｃｏｌｉ ＴＧ１ 中表达。运用ＰＣＲ和双脱氧核苷酸链末端终止法分析其核苷酸序列。结果： ＤＮＡ 序列分析表明， ５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 基因全长为６９９ｂｐ；其中ＶＨ 长３５１ｂｐ ， 编码１１７ 个氨基酸； ＶＬ 长３２４ｂｐ ， 编码１０８ 个氨基酸， 两者以五肽连接头相连； 重组体表达产物经ＳＤＳＰＡＧＥ显示， ＧＳＴ５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 表达产物的相对分子质量（ Ｍｒ） 为５１ ０００ 左右， 与预期结果相符。光密度扫描结果表明， ＧＳＴ５Ｄ１２ ｄｉａｂｏｄｙ 融合蛋白占菌体总蛋白的２４－６％ ， 表达产物主要以不溶性的包涵体形式存在。结论： 成功地构建并表达了５Ｄ１２ 双价小分子抗体基因，
- 王长军唐家琪李先富潘秀珍操敏
- 关键词：ABO血型抗原基因工程抗体
