杨晓霞
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：昆明理工大学生命科学与技术学院更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 红冬孢酵母Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达被引量：1
- 2016年
- Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶是多不饱和脂肪酸合成的关键酶.参考已知的Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因序列设计特异性引物,通过PCR扩增从红冬孢酵母YM25235中获得了全长为1 341 bp的一个cDNA序列.序列分析表明,该序列具有一个编码446个氨基酸、相对分子质量为50.6 ku的完整开放阅读框,所编码的氨基酸序列与Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶相似性最高但并不相同,而且也具有Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证功能,将该基因序列克隆到表达载体pYES3/CT中,构建重组质粒pY3RKD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVSCI中进行异源表达.通过脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,在pY3RKD12转化的酵母细胞总脂肪酸中出现一个保留时间和亚油酸甲酯标准品相同的新峰,其含量占酵母总脂肪酸的3.76%,但在pYES3/CT转化的酵母细胞总脂肪酸中没有检测到.这些结果证明所克隆的序列是一个新的Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因,其表达的蛋白质可催化油酸合成亚油酸.
- 罗敏周杨晓霞季秀玲林连兵魏云林张琦
- 关键词：亚油酸
- mRNA差异显示技术研究低温条件下深黄被孢霉基因的表达差异被引量：2
- 2015年
- mRNA差异显示技术已经广泛应用于研究植物、动物和微生物在各种环境条件下基因的差异表达研究.研究以15℃和30℃培养的深黄被孢霉M6-22菌体为材料,利用mRNA差异显示技术研究两种培养条件下基因的表达差异.经实时荧光定量PCR验证,共获得7条差异片段,相似性搜索结果表明它们是6-磷酸葡萄糖异构酶、单糖核苷酸转运蛋白、Ras1鸟苷酸转移因子、依赖于NAD的苹果酸脱氢酶、Δ12-脂肪酸脱氢酶、CLK4关联的丝氨酸/精氨酸丰富蛋白和假定蛋白,涉及糖酵解、蛋白质修饰、信号传导、脂肪酸合成和mRNA加工等生命过程,表明深黄被孢霉M6-22低温适应性是多种途径协同调控的结果.
- 杨晓霞何仕武赵汝丽魏云林林连兵季秀玲张琦
- 关键词：深黄被孢霉MRNA差异显示技术荧光定量PCR基因表达差异
- 多不饱和脂肪酸合成抑制对红冬孢酵母低温生长的影响
- 很多研究表明,细胞膜脂中多不饱和脂肪酸含量与真菌菌株的低温生长适应性相关.本研究通过RT-PCR从一株具有低温生长适应性的红冬孢酵母YM25235中获得一个全长为1341bp、编码446个氨基酸的开放阅读框,所编码蛋白的...
- 杨晓霞李玲彦崔锦锦季秀玲林连兵魏云林张琦
- 两个苹果酸酶的表达和酶学性质分析
- 2019年
- 为了探讨深黄被孢霉M6-22中不同苹果酸酶的性质,研究从深黄被孢霉M6-22中克隆得到苹果酸酶MIME1基因并在大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化和酶活分析表明所纯化蛋白能催化苹果酸脱羧生成丙酮酸和NADPH,具有苹果酸酶的特性.同时与前期获得的MIME2进行酶学性质分析.结果显示,重组表达的MIME1和MIME2都具有苹果酸酶的性质,但MIME1的最适温度和最适pH分别为28℃和7.5,MIME2的最适温度和最适pH分别为30℃和5.8,而且在最适温度和最适pH条件下所纯化的MIME1和MIME2酶活分别为292.84U/mg和235.14U/mg.进一步酶学性质分析表明,Mg^2+、Co^2+、Cu^2+、Zn^2+可以提高MIME1的活性,其中Cu2+激活作用最为明显,而EDTA、Ca^2+、Mn^2+对MIME1的活性则有抑制作用;Mn^2+、Mg^2+、Co^2+和Ca^2+对MIME2表现出不同程度的激活作用,其中Mn2+激活作用最为明显,而EDTA、Cu2+和Zn2+则对MIME2的酶活表现出明显的抑制作用.这些分析结果表明,同一种细胞中不同的苹果酸酶具有不同的酶学性质,这可能与它们执行不同的生物学功能有关.通过异源表达和分离纯化,研究初步揭示了2个深黄被孢霉M6-22苹果酸酶的一些酶学性质特点,这为以后深入研究该苹果酸酶结构和功能以及与M6-22菌株油脂积累的关系提供了理论依据和参考.
- 李珊杨晓霞季秀玲林连兵魏云林张琦
- 关键词：深黄被孢霉苹果酸酶基因克隆酶学性质分析
- 粘红酵母△^(12)-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达被引量：1
- 2015年
- Δ12-脂肪酸脱氢酶一般特异性催化在油酸的Δ12位引入双键转变成亚油酸.为了从粘红酵母YM25079中克隆全长Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列,参考已知的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因序列设计基因特异性引物,通过PCR扩增获得到全长为1 353 bp的cDNA序列,序列分析结果表明该序列具有一个编码450个氨基酸的完整开放阅读框,所编码蛋白质的大小为50.9×103.与报道的Δ12-脂肪酸脱氢酶一样,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的3个组氨酸保守区,表明该序列为一个新的编码Δ12-脂肪酸脱氢酶的基因.为了验证其功能,把开放阅读框序列亚克隆到表达载体pYES3/CT,构建重组表达载体pYRGD12,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达.脂肪酸气相色谱(GC)分析表明,该序列所编码的蛋白质具有Δ12-脂肪酸脱氢酶活性,能将油酸转化为亚油酸,亚油酸的含量占酵母总脂肪酸的4.31%.以上结果表明,PCR所获得序列是新的Δ12-脂肪酸脱氢酶基因.
- 杨晓霞何仕武魏云林林连兵季秀玲张琦
- 关键词：粘红酵母亚油酸
- 深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆和表达被引量：3
- 2017年
- 目的通过对深黄被孢霉(Mortierella isabellina)M6-22中MDH基因的分离鉴定,为深入了解苹果酸脱氢酶(MDH)的生理特性、结构和功能奠定基础,并进一步探讨生物体中MDH的代谢作用。方法通过基因克隆的方法以深黄被孢霉的cDNA为模板,PCR扩增获得苹果酸脱氢酶基因MIMDH1。结果测序结果显示该序列长990bp,分别编码329个氨基酸。序列分析表明该序列与瓜笄霉菌(Choanephora cucurbitarum)MDH的相同性高达77%。将MIMDH1片段连接到表达载体pET32a(+)中构建重组表达质粒pET32aMIMDH1并转化至大肠埃希菌BL21中诱导表达,SDS-PAGE电泳检测在50kD左右有一条蛋白表达条带,经镍柱亲和层析纯化和酶活分析结果显示所纯化的重组蛋白酶活高达379.28U/mg。结论克隆的cDNA序列MIMDH1是一个新的苹果酸脱氢酶基因,所编码的蛋白具有MDH的活性。
- 王俊杨晓霞魏云林林连兵季秀玲张琦
- 关键词：苹果酸脱氢酶深黄被孢霉克隆基因表达
