邓海清
- 作品数：10 被引量：38H指数：5
- 供职机构：中国食品药品检定研究院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌感染豚鼠接种重组结核疫苗 AEC／BC02后的超敏反应分析被引量：7
- 2016年
- 目的：观察MTB感染豚鼠接种重组结核疫苗AEC／BC02（由抗原Ag85b、ESAT6－CFP10和复合佐剂BC02构成，简称AEC／BC02）后是否诱发超敏反应（ Koch现象）。方法18只豚鼠（雌雄各半）皮下注射MTB，5.0×10^3 CFU／只。40 d后平均分成3组，每组6只：（1）生理盐水组：注射生理盐水0.5 ml／只；（2）AEC／BC02组：注射1人份剂量／只，即（10μg Ag85b ＋10μg ESAT6－CFP10）／0.5 ml BC02／只；（3） H37Ra组：注射H37Ra灭活全菌体1 mg／只。3组均每2天注射1针，共3针。首次免疫3周后解剖豚鼠观察肝、脾、肺脏器病变，进行脾和肺组织活菌计数；肺组织切片染色后用Image－Pro Plus软件分析其炎症反应程度。结果 H37Ra组肝、脾、肺综合病变评分为（48±26）分，低于生理盐水的（62±15）分，差异无统计学意义（t＝1.093，P＝0.300）。 AEC／BC02组综合病变评分为（36±15）分，低于生理盐水组，差异有统计学意义（t＝2.980，P＝0.014），但与H37Ra组比较差异无统计学意义（t＝1.009，P＝0.337）。 H37Ra组脾活菌数为（5.31±0.80） log10 CFU，低于生理盐水组的（5.57±0.75） log10 CFU，差异无统计学意义（t ＝1.581，P ＝0.574）。 AEC／BC02组脾活菌数为（4.64±0.64） log10 CFU，低于生理盐水组，差异有统计学意义（t＝2.306，P＝0.044），但与H37Ra组比较，差异无统计学意义（t＝1.602，P＝0.140）。 AEC／BC02组和H37Ra组肺活菌数分别为（3.71±1.01）和（3.82±1.25） log10 CFU，与生理盐水组的（4.15±0.69）log10 CFU比较，差异均无统计学意义（t＝0.881，P＝0.399；t＝0.566，P＝0.584）。 H37Ra组的肺部炎症区域面积较大，占（33.0±4.4）％，高于生理盐水组的（14.8±8.4）％（t＝4.719，P＝0.001）和AEC／BC02的（19.7±7.9）％（t＝3.616， P＝0.005），而AEC／BC02组与生理盐水组比较差异无统计学意义（t＝1.041，P＝0.322）。结论肺部炎症反�
- 卢锦标陈保文邓海清苏城沈小兵都伟欣杨蕾王国治徐苗
- 关键词：疫苗超敏反应
- 初免加强型结核疫苗保护力评价用动物模型的建立被引量：6
- 2013年
- 目的建立适合评价BCG初免加强型结核新疫苗的豚鼠动物模型，并用新型结核疫苗进行验证性评价。方法按初免-加免间隔时间，分为短期（间隔14周）评价和长期（间隔54周）评价两次实验。短期评价中BCG免疫14周后豚鼠给予重组结核疫苗（ AEC/BC02）加强免疫2次；长期评价中BCG免疫54周后豚鼠给予重组结核疫苗（ AEC/BC02）加强免疫3次。两次实验中均设置阴性对照组（NS→NS）和卡介苗对照组（BCG→NS）。末次加强免疫1周后，所有豚鼠攻毒结核分枝杆菌（ M．tuberculosis，Mtb），感染6～7周后，处死豚鼠，评价豚鼠肝、脾、肺综合病变指数，并检测脾脏活菌负荷量。结果短期评价：疫苗加强组豚鼠肝、脾、肺综合病变指数评分（3．33±5．00）低于卡介苗对照组（5．56±7．27）和阴性对照组（47．00±28．11），疫苗加强组和卡介苗对照组与阴性对照组相比均有统计学差异（分别P＝0．0001和P＝0．0002），但疫苗加强组与卡介苗对照组无统计学差异（ P＝0．4294）。疫苗加强组豚鼠的脾菌分离数对数（log10CFU）平均值为0．78±1．55，低于卡介苗对照组1．06±1．87，但差异无统计学意义；低于阴性对照组5．47±0．61，差异有统计学意义（P＝0．0003）。长期评价：疫苗加强组豚鼠肝、脾、肺综合病变指数评分（5．0±7．6）低于卡介苗对照组（14．4±13．5）和阴性对照组（56．9±14．1），差异有统计学意义（分别P＝0．0394和P＜0．0001）；疫苗加强组豚鼠的脾菌分离数对数平均值为1．00±1．86，低于卡介苗对照组的1．46±1．94，但差异无统计学意义；低于阴性对照组的5．43±0．56，差异有统计学意义（P＝0．01）。卡介苗对照组豚鼠的脾菌分离数对数平均值为1．46±1．94，低于阴性对照组的5．43±0．56，差异有统计学意义（P＝0．0089）。结论综合对比短期评价与�
- 徐苗邓海清陈保文卢锦标苏城沈小兵都伟欣杨蕾王国治
- 关键词：结核动物模型
- 结核分枝杆菌潜伏感染豚鼠模型的建立和验证被引量：8
- 2013年
- 目的：建立结核分枝杆菌（M ycobacterium tuberclu osis，Mtb）潜伏感染治疗用疫苗的豚鼠评价模型。方法豚鼠皮下攻毒5．0×103 CFU Mtb，于不同时间点用0．5μg重组结核杆菌ESAT6-CFP10蛋白对豚鼠皮试，观察皮试阳转情况。攻毒2周后，模型组豚鼠采用5 mg异烟肼灌胃治疗，每周3次，持续4周；对照组豚鼠不做化疗。在Mtb感染后的第6周，分别取未经异烟肼治疗的豚鼠和经异烟肼治疗的豚鼠解剖，比较豚鼠的肝、脾和肺的脏器综合病变指数以及脾活菌数（ log10 CFU）。根据上述结果建立豚鼠的潜伏感染模型，并用两个参考疫苗对该模型进行验证。结果豚鼠攻毒Mtb 2周后，EC皮试反应全部转阳，皮试反应大小为（19．9±3．0） mm。模型组豚鼠经4周异烟肼治疗后，脏器综合病变指数为0，脾未分离出活菌数。对照组豚鼠不经化疗，脏器综合病变指数为38．8±16．5，脾活菌数为（5．1±0．3）log10 CFU。停药后，模型组豚鼠结核病自然复发，在两次参考疫苗的验证中，脏器综合病变指数分别为48．5±23．9和51．30±23．41，脾活菌数分别为（4．5±1．3）和（4．2±1．1） log10 CFU，肺部活菌数分别为（4．1±1．2）和（3．4±1．3） log10 CFU。结论 Mtb攻毒豚鼠后，异烟肼化疗可抑制Mtb增殖，成功建立豚鼠的Mtb潜伏感染模型。该模型重复性好，可用于潜伏感染治疗用疫苗的评价。
- 卢锦标邓海清陈保文都伟欣杨蕾沈小兵苏城徐苗王国治
- 关键词：结核分枝杆菌动物模型结核疫苗
- 重组结核分枝杆菌 ESAT6-CFP10蛋白与 PPD 皮肤试验的动物实验比较被引量：5
- 2013年
- 目的：动物实验中评价重组结核分枝杆菌ESAT6-CFP10蛋白（以下简称：重组ESAT6-CFP10蛋白）皮肤试验情况，同时与PPD（结核菌素纯蛋白衍生物）皮肤试验进行比较。方法以不同分枝杆菌分别致敏豚鼠，致敏成功后每只豚鼠皮内分别注射重组ESAT6-CFP10蛋白和PPD。用双盲法记录注射后48 h局部皮肤反应的纵径和横径，计算其均值。以结核分枝杆菌活菌感染豚鼠，在感染后不同时间内选取一定只数的豚鼠，皮内分别注射重组ESAT6-CFP10蛋白和PPD，记录注射后24 h局部皮肤反应的纵径和横径，计算其均值，并统计两种皮试反应的阳转率情况。结果在结核分枝杆菌活菌、结核分枝杆菌死菌和卡介苗致敏豚鼠中，PPD皮肤试验均为阳性，局部硬结直径分别为（11．4±0．9） mm、（11．8±1．1） mm和（13．2±0．8） mm。在结核分枝杆菌活菌致敏豚鼠中，重组ESAT6-CFP10蛋白皮肤试验为阳性，局部硬结直径为（13．7±5．7） mm；在结核分枝杆菌死菌和卡介苗致敏豚鼠中，重组ESAT6-CFP10蛋白皮肤试验均为阴性，局部硬结直径为0。结核分枝杆菌H37 Rv感染豚鼠后，第9天开始随机选取相应只数的豚鼠进行重组 ESAT6-CFP10蛋白和PPD的皮肤试验。第2周时24只豚鼠全部进行皮试试验，ESAT6-CFP10蛋白全部阳转，阳转率为24/24，硬结反应平均值为（19．9±3．0） mm；而PPD的阳转率仅为15/24，硬结反应平均值为（6．1±5．5） mm。第4周时PPD开始全部阳转，阳转率为33/，硬结反应平均值为（12．7±2．5） mm。结论重组ESAT6-CFP10蛋白皮肤试验能够鉴别卡介苗接种和结核分枝杆菌死菌、活菌感染，并且较PPD能够早期进行诊断。
- 都伟欣陈保文卢锦标邓海清沈小兵苏城杨蕾王国治
- 关键词：重组蛋白质类结核分枝杆菌皮肤试验
- 重组结核疫苗AEC/BC02诱导豚鼠的Ⅰ型超敏反应被引量：3
- 2014年
- 目的评价重组结核疫苗AEC/BC02诱导豚鼠Ⅰ型超敏反应炎性介质的释放。方法将18只雄性豚鼠分成3组:AEC/BC02疫苗组、阴性对照组和阳性对照组,每组6只,分别经后腿肌肉注射AEC/BC02疫苗、生理盐水和卵清蛋白(ovalbumin,OVA),共7针,间隔10 d。于末次免疫后14 d,各组豚鼠经心脏采血,收集抗凝血,加入不同刺激物;豚鼠采血后,吸入二氧化碳致死,分离豚鼠气管,置于含不同刺激物的KBS缓冲液中;剪开分离气管后的豚鼠腹腔,分别灌入含不同刺激物的KBS缓冲液;AEC/BC02疫苗组用重组蛋白Ag85b、EC及BCG-CpG-DNA(简称CpG)刺激,阴性对照组未刺激,阳性对照组用OVA蛋白刺激。按组胺检测试剂盒和半胱氨酰白三烯检测试剂盒说明书,采用ELISA法检测外周血、气管和腹腔特异性刺激后释放的组胺和半胱氨酰白三烯含量。结果 AEC/BC02疫苗组外周血释放的组胺含量(41.0±23.4)ng/ml与阳性对照组(46.4±28.2)ng/ml比较,差异无统计学意义(P>0.05);但气管和腹腔肥大细胞释放的组胺含量[气管:(27.4±10.8)ng/ml和腹腔:(9.7±8.1)ng/ml]均明显低于阳性对照组[气管:(71.4±21.1)ng/ml,腹腔:(23.5±12.4)ng/ml)],释放的半胱氨酰白三烯含量[气管:(236.4±63.5)pg/ml,腹腔:(173.4±31.3)pg/ml]也均明显低于阳性对照组[气管:(458.0±208.2)pg/ml,腹腔:(259.2±30.4)pg/ml],差异均有统计学意义(P<0.05)。结论肌肉注射途径下,AEC/BC02疫苗给药7针不会诱导豚鼠严重的Ⅰ型超敏反应。
- 卢锦标付丽丽邓海清王国治徐苗
- 关键词：结核疫苗组胺白三烯超敏反应
- 氢氧化铝和PolyIC佐剂在结核亚单位疫苗中的佐剂效应被引量：6
- 2014年
- 目的观察重组抗原Ag85b和ESAT6-CFP10(EC)联合氢氧化铝佐剂(Al)和PolyIC(IC)佐剂诱导小鼠的免疫效果及对豚鼠结核的预防作用。方法将BALB/c小鼠随机分为6组:PBS组、Pro组(Ag85b+EC)、Al+IC组、Pro+Al组(Ag85b+EC+Al)、Pro+IC组(Ag85b+EC+IC)、Pro+Al+IC组(Ag85b+EC+Al+IC),经小鼠后肢内侧肌肉注射,共注射3次,间隔10 d。末次注射后2周,摘眼球采血,分离血清,采用间接ELISA法检测IgG抗体效价;同时处死小鼠,无菌取脾,分离淋巴细胞,采用ELISPOT法检测抗原特异性的IFNγ水平。将豚鼠随机分为3组:NS组、BCG组和Pro+Al+IC组,NS组和Pro+Al+IC组免疫3次,间隔10 d;BCG组仅免疫1次,于前两组第3次免疫时进行免疫。末次免疫30 d后经皮下注射结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)菌液,攻毒41 d后,处死豚鼠,解剖,检测肝、脾、肺的病变程度,并进行评分,同时分离脾脏Mtb,计算每只豚鼠的脾菌分离对数值。结果经Ag85b多肽和EC多肽刺激后,Pro+Al+IC组IFNγ斑点形成细胞(spot forming cell,SFC)数均显著高于其他各组(P<0.000 1或<0.05),同组间经Ag85b多肽刺激后的SFC均高于经EC多肽刺激后的SFC。Pro+Al+IC组血清Ag85b特异性IgG抗体效价最高,与Pro+Al组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与Pro+IC组比较,差异无统计学意义(P>0.05);Pro+Al+IC组血清EC特异性IgG抗体效价最高,与Pro+Al和Pro+IC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);同组间Ag85b特异性IgG抗体效价高于EC特异性IgG抗体效价。Pro+Al+IC组豚鼠脏器综合病变指数和脾菌分离对数值均显著高于BCG组(P<0.000 1),略低于NS组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论氢氧化铝佐剂和PolyIC佐剂联合使用可协同增强结核分枝杆菌抗原Ag85b和EC的细胞免疫应答及体液免疫应答;但Ag85b和EC配伍构成的重组亚单位疫苗对豚鼠预防性保护力较弱,不适合用作暴露前预防。
- 付丽丽卢锦标杨蕾陈保文都伟欣邓海清王国治黄长江
- 关键词：结核疫苗氢氧化铝保护效力
- 结核病药效评价用结核分枝杆菌参考菌株的筛选被引量：4
- 2015年
- 目的筛选结核病(tuberculosis,TB)药效评价用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)国家参考菌株。方法取169株MTB临床分离株,采用结核杆菌生长指示管(mycobacterial growth indicator tube,MGIT)960液体培养基,对4种一线抗TB药物[链霉素(streptomycin,STR)、异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)和乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]进行药敏试验,并对耐INH和/或耐RFP的菌株的相关耐药基因位点进行测序,确认突变位点;用间隔区寡核苷酸分型法(Spoligotyping)对所有菌株进行基因分型,多位点可变数量串联重复序列分型方法(mutiple loci VNTR analysis,MLVA)对北京家族MTB临床分离株进行基因分型。结果 169株MTB临床分离株中耐STR 118株,INH 143株,RFP 129株,EMB 95株,耐多药(至少对NIH和RFP耐药)120株,单耐INH 5株,单耐RFP7株,四种抗TB药均敏感共11株。143株INH耐药菌株中,kat G基因突变菌株占76.9%,inh A基因突变菌株占27.3%,aph C基因突变菌株占25.2%,至少2个基因发生突变的菌株有31株;129株RFP耐药菌株中,rpo B基因531位点发生突变,占67.4%,526位发生突变,占17.8%,516位点发生突变,占16.3%,至少2个位点发生突变的菌株有10株。169株MTB临床分离株分为北京家族和非北京家族,北京家族111株;非北京家族58株,主要有CAS家族2株,EAI家族7株,H家族11株,LAM家族6株,MANU家族6株,T家族7株,U家族1株,X3家族3株,还有15株在数据库中未表现的新基因型。111株北京家族MTB临床分离株分为4大群,其中Ⅱ群分布最广,占68.5%,代表性最好。筛选出耐多药菌株27株,敏感菌株5株,单耐异烟肼2株,单耐利福平3株。结论成功筛选出敏感菌株、单耐药菌株、MDR菌株作为候选菌株。
- 邓海清陈保文杨蕾张婷卢锦标吴小翠万康林黄长江王国治
- 关键词：结核分枝杆菌药敏实验基因测序基因分型菌株筛选
- 结核新疫苗保护力评价豚鼠模型的建立与重组结核疫苗(AEC/BC02)保护力评价
- 结核病(Tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，Mtb)引起的一种古老而漫长的感染性疾病。世界卫生组织(WHO)2014年全球结核报告2013年新发病例大约...
- 邓海清
- 关键词：免疫疗法疾病预防
- 耐药结核分枝杆菌感染动物模型所用菌株的筛选被引量：1
- 2014年
- 本研究通过小鼠体内实验检测我国部分地区结核分枝杆菌耐药菌株的毒力,以筛选耐药结核分枝杆菌感染动物模型所用菌株。收集从我国部分省份98例结核病患者痰培养液中分离出的结核分枝杆菌,用比例法药敏试验进行结核分枝杆菌一线和二线药物的药敏试验,筛选出对二线药物敏感而对一线药物利福平或异烟肼耐药或敏感的菌株,然后进行小鼠体内毒力实验,对异烟肼耐药相关基因katG和利福平耐药相关基因rpoB测序并进行基因突变分析。从98株菌中筛选出药物敏感谱清晰的40株,进行小鼠体内毒力实验。结果显示,共35株半数死亡时间≤H37Rv的半数死亡时间,其中18株耐利福平合并耐异烟肼、5株单耐利福平,7株单耐异烟肼、5株对利福平和异烟肼均敏感。通过小鼠毒力研究,分别筛选出基因背景清晰,半数死亡时间≤7d的耐利福平合并耐异烟肼的菌株1株、半数死亡时间≤7d单耐利福平和异烟肼的菌株各1株,作为耐药结核分枝杆菌感染小鼠模型所用菌株及进一步进行豚鼠等其他动物模型感染用候选菌株。
- 丁海榕林树柱卢锦标邓海清王国治秦川占玲俊
- 关键词：结核分枝杆菌利福平耐药小鼠
- 结核病细菌学实验室设置要求探讨被引量：6
- 2015年
- 依据《实验室生物安全通用要求》对于生物安全实验室的规定和《结核病诊断实验室检验规程》对于结核病细菌学实验室的相关规定，探讨了生物安全二级实验（BSL-2）的基本要求，分析了目前关于BSI，2实验室存在的问题和不足，对从事结核分枝杆菌分离培养、涉及微生物学技术进行的结核分枝杆菌耐药检测与分型鉴定实验室提出改进的建议，解决该类实验室存在的生物安全隐患，提高生物安全防护措施，以期得到国家相关部门和同仁的支持。
- 邓海清杨蕾陈成王国治陈国庆
- 关键词：结核分枝杆菌细菌学技术实验室安全措施
