- 弓形虫棒状体蛋白2家族成员研究进展被引量：5
- 2015年
- 弓形虫是引起人兽共患弓形虫病的顶复门专性细胞内寄生原虫,感染的宿主范围广泛,严重危害人类的健康及畜牧业的发展。近年来随着对弓形虫研究的不断深入,弓形虫棒状体蛋白2家族在虫体入侵、纳虫泡修饰及毒力作用方面发挥的重要作用得到进一步的证实。棒状体蛋白ROP18作为该家族的重要成员,是弓形虫重要的毒力分子,在IRGs通路中发挥着重要作用。它可以定位在PVM上,清除IRGs,从而在弓形虫入侵细胞的过程中发挥着逃避免疫细胞清除的作用。另一家族成员蛋白假性激酶ROP5与ROP18之间发挥着协同作用,可以提高激酶活性来控制弓形虫的急性毒力,保护弓形虫免于清除。本文就ROP18与ROP5等毒力因子的分子作用机制进行了综述。
- 张贤甘小凤程正阳余莉
- 关键词：弓形虫毒力
- 弓形虫抑制Wnt/β-catenin通路干扰C17.2神经干细胞的分化
- 目的:弓形虫是一种重要的嗜中枢先天性致畸因子。然而,其对神经干细胞分化的影响及其分子机制所知甚少。本研究旨在探讨弓形虫排泄分泌抗原(excretory-secretory antigens,ESAs)对神经干细胞分化的影...
- 甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉
- 关键词：弓形虫神经干细胞分化
- 文献传递
- TgROP18对神经干细胞分化的影响及机制研究
- 弓形虫是一种重要的生物致畸因子，其导致的先天性脑病严重损害婴幼儿健康。神经干细胞(NSC)在神经系统发育和病理机制中起关键作用。弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)作为具有激酶活性的毒力因子，是否对神经干细胞的生物学行为产...
- 张贤程正阳苏蕊李婧旸余莉沈继龙
- 弓形虫ROP18重组腺病毒载体的构建及其对神经干细胞C17.2凋亡的影响被引量：3
- 2016年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18重组腺病毒载体,研究其对神经干细胞C17.2凋亡的影响。方法将弓形虫ROP18从PEGFP-G2-ROP18重组质粒上亚克隆至腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP,重组腺病毒载体pHBAd-MCMVGFP-ROP18经PCR、测序鉴定正确后,与骨架质粒pHBAd-BHG共转染HEK293细胞进行包装,收获、扩增重组腺病毒并对其滴度进行测定。以MOI=70的重组腺病毒感染神经干细胞C17.2,转染不同时间荧光显微镜观察基因的表达情况。转染48h用CCK-8法检测C17.2的增殖情况;转染24h采用Annexin V-APC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot法检测半胱天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白水平。结果重组ROP18过表达腺病毒在C17.2神经干细胞内能有效表达。转染48h,与空载体对照组相比,C17.2细胞增殖活性明显降低(P<0.05);转染24h,流式细胞术检测结果显示,ROP18基因转染组C17.2细胞凋亡率明显增加(P<0.001);Western blot检测显示caspase-3活性片段的表达明显增加(P<0.05)。结论成功构建了弓形虫ROP18重组腺病毒并在神经干细胞C17.2中表达,ROP18重组腺病毒能诱导C17.2神经干细胞凋亡。
- 张贤甘小凤程正阳都建罗庆礼沈继龙余莉
- 关键词：刚地弓形虫重组腺病毒细胞凋亡
- 弓形虫棒状体蛋白ROP18的优化表达被引量：1
- 2017年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白ROP18原核表达载体,并通过密码子优化等方法优化其表达。方法运用RT-PCR扩增ROP18基因,将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18重组质粒;运用OptigeneTM密码子优化分析平台对弓形虫ROP18编码基因进行优化,合成优化后的全长基因(ROP18u)并将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18u重组质粒;以优化后的ROP18u基因为模板,PCR扩增去除N端信号肽和前功能区序列的截短ROP18片段(ROP18uc),将其克隆入pGEX-6P-1原核表达载体,构建pGEX-ROP18uc重组质粒。所有重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白,并进行Western blot鉴定。结果 pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc于30℃诱导培养4h-6h,分别检测到分子质量约为88ku和77ku的重组蛋白,该蛋白能被GST单克隆抗体和ROP18多克隆抗体识别。结论成功构建了pGEX-ROP18、pGEX-ROP18u和pGEX-ROP18uc原核表达载体,密码子优化未能显著提高ROP18重组蛋白的表达量,但提高了可溶性蛋白的含量。
- 程正阳苏蕊张贤李叶林朱万博余莉
- 关键词：弓形虫原核表达
- TgROP18对神经干细胞分化的影响及机制研究
- 张贤程正阳苏蕊余莉沈继龙
- 弓形虫抑制神经干细胞向神经元分化的研究
- 2014年
- 目的探讨弓形虫排泄分泌抗原(ESA)对神经干细胞分化的影响。方法分别用含5%马血清、10%胎牛血清DMEM完全培养液,无血清DMEM培养液及含2%N2的DMEM/F12培养液培养诱导神经干细胞系C17.2分化,分别于诱导分化后1、3、5d收集细胞,提取RNA,采用RT-PCR检测神经元标志蛋白βⅢ-tubulin基因的转录;用含ESA的2%N2DMEM/F12培养液培养C17.2细胞5d,收集细胞,提取总蛋白,采用Western blot检测βⅢ-tubulin蛋白水平。结果用含2%N2的DMEM/F12培养液培养5d,C17.2细胞βⅢ-tubulin基因转录水平为3.93±0.13,另两组分别为(0.08±0.34)%和0,差异有统计学意义(P<0.05);2%N2诱导分化后5d,弓形虫ESA能显著降低βⅢ-tubulin蛋白水平(P<0.05)。结论弓形虫ESA能抑制C17.2神经干细胞向神经元分化。
- 甘小凤张贤程正阳沈继龙罗庆礼余莉
- 关键词：弓形虫神经干细胞分化
- 弓形虫棒状体蛋白ROP18对神经干细胞凋亡与分化的影响及机制研究
- 目的探讨弓形虫棒状体蛋白ROP18对神经干细胞凋亡、分化的影响及其机制。方法(1)将弓形虫棒状体蛋白ROP18从PEGFP-G2-ROP18重组质粒上亚克隆至腺病毒载体pHBAd-MCMV-GFP,PCR、测序鉴定正确的...
- 张贤
- 关键词：弓形虫重组腺病毒神经干细胞凋亡分化WNT/Β-CATENIN
- 文献传递
- 弓形虫感染对中枢神经系统的损伤机制及其对宿主行为的影响被引量：5
- 2016年
- 弓形虫是引起人畜共患弓形虫病的病原体,它的感染范围广泛,感染途径多样,对人类健康和畜牧业发展危害极大。弓形虫感染与人类神经系统疾病关系密切,感染者常常会表现出反应迟钝,性格缺失等行为异常,严重时还会出现精神分裂,情绪失控,自主暴力等精神性问题。本文主要从弓形虫入侵中枢神经系统的机制,对中枢神经系统的影响和宿主行为学的变化3个方面进行综述。
- 程正阳张贤苏蕊余莉
- 关键词：弓形虫中枢神经系统
