葛世杰 作品数:7 被引量:18 H指数:3 供职机构: 北京中医药大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
疏风宣肺方和解表清里方对流感病毒H1N1感染人肺腺癌上皮细胞A549中TLR3/7信号通路作用的研究 被引量:3 2015年 目的:研究疏风宣肺方和解表清里方体外对人肺腺癌上皮细胞A549中TLR3/7信号通路的影响。方法:利用基因芯片技术研究甲型流感病毒H1N1感染A549细胞后TLR3/7信号通路中基因转录的变化。采用荧光定量PCR和Western blotting法检测各组细胞中的Toll样受体3(Toll-like receptor3,TLR3)、Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、激活核因子Kappa B(nuclear factor-Kappa B,NF-κB)的mRNA及蛋白表达的变化。结果:在TLR3/7相关信号传导通路中,与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Tlr3、Tlr7、Myd88、Nfbk1、Mapk8、Mapk13、Ifna1、Ifnβ1明显上调,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组对差异表达基因Tlr3、Tlr7、Myd88、Nfbk1、Mapk8、Mapk13、Ifna1、Ifnβ1明显下调。qRT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组TLR3/7、My D88、NF-κB的mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与H1N1感染组比较,疏风宣肺组的TLR3/7、My D88、NF-κB的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01),解表清里方对TLR3/7、NF-κB的mRNA表达均明显降低(P<0.05或P<0.01)。同时,疏风宣肺组治疗效果优于解表清里组。Western blotting结果显示,H1N1感染组TLR3/7、NF-κB蛋白较正常组显著升高(P<0.05)。与H1N1感染组比较,两种方药的TLR3/7、NF-κB表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:疏风宣肺方和解表清里方可以抑制流感病毒H1N1所诱导的TLR3/7信号通路活化,下调活性NF-κB的转录活性,发挥抗流感病毒的作用。 葛世杰 卢娜娜 刘晓婷 张沂 顾立刚 吴珺 邱泽计 张洪春 晁恩祥关键词:人肺腺癌A549细胞 疏风宣肺方和解表清里方体外干预甲型流感病毒H1N1诱导炎性细胞因子分泌作用的研究 被引量:6 2015年 目的研究疏风宣肺方和解表清里方对甲型流感病毒H1N1感染的人肺腺癌上皮细胞(A549)中炎性细胞因子的影响。方法培养A549,甲型流感病毒H1N1感染A549后,分为细胞对照组、H1V1感染组、奥司他韦对照组、疏风宣肺组及解表清里组。采用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blotting法检测各组细胞中炎症相关的白细胞介素(IL)1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、调节活化正常T细胞表达和分泌的趋化因子(RANTES)的mRNA及蛋白表达的变化。结果基因芯片结果提示,与细胞对照组比较,H1N1感染组差异表达基因Il1β、Thf、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2明显上调。与H1N1感染组比较,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组差异基因Thf、Il1β、Ccl5、Il10、Il6、Ccl2表达显著下调。RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1、RANTES的mRNA表达均显著升高(P<0.01)。与H1N1感染组比较,疏风宣肺组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1的mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05),解表清里组IL-1、TNF-α、IL-6、MCP-1的mRNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05)。Western blotting结果显示,H1N1感染组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1、RANTES蛋白表达较细胞对照组显著升高(P<0.05);与H1N1感染组比较,疏风宣肺组及解表清里组IL-1、TNF-α、IL-6、IL-10、MCP-1、RANTES蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论疏风宣肺方和解表清里方均可抑制流感病毒感染后炎性细胞因子IL-1、TNF-α、IL-6、MCP-1的mRNA过表达及蛋白分泌,减轻炎症反应,并恢复机体免疫功能的稳定和平衡。 葛世杰 刘晓婷 张沂 卢娜娜 顾立刚 吴珺 邱泽计 张洪春 晁恩祥关键词:H1N1亚型 抗病毒药(中药) 炎症趋化因子类 病毒 疏风宣肺和解表清里方药体内外对流感病毒的影响 被引量:3 2015年 目的:通过疏风宣肺和解表清里两方药对流感病毒影响的体内外实验研究,探讨两方药对甲型流感病毒的抑制作用。方法:小鼠滴鼻感染流感病毒亚甲型鼠肺适应株FM1,灌胃给予疏风宣肺和解表清里两方药,观察两方药对小鼠死亡率和生存时间的影响;将两种方药作用于感染甲型流感病毒(H1N1)的肺肿瘤细胞(A549),观察两种方药对甲型流感病毒体外的抑制作用。结果:体内实验中,疏中组、疏小组和解小组明显降低病毒感染小鼠死亡率,并延长小鼠平均生存时间,并且与病毒对照组有明显差异(P<0.01,P<0.05),体外实验中两方药对流感病毒感染也有明显的保护作用(P<0.05,P<0.01)。结论:疏风宣肺方和解表清里两方药在体内外均具有良好的病毒抑制作用。 张沂 刘晓婷 顾立刚 葛世杰 吴珺 邱泽计 张洪春 晁恩祥关键词:疏风宣肺 流感病毒 体外 流感病毒H1N1感染A549细胞诱导炎性因子表达及黄芩苷调控作用的研究 被引量:2 2016年 目的:探讨流感病毒H1N1体外感染细胞诱导炎性因子表达及黄芩苷调控作用的研究。方法:正常生长细胞接种100 TCID50的病毒液;吸附2h后加入黄芩苷高剂量组(3.96μg/m L)和黄芩苷低剂量组(0.99μg/m L),以奥司他韦(0.75μg/m L)做阳性对照。采用基因芯片技术分析各组细胞差异表达炎性因子。以RT-PCR和Western blotting法检测细胞内靶因子m RNA和蛋白的表达变化。结果:与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和RANTES明显上调(P<0.01);给药后上述因子表达下调,部分IL-10明显上调(P<0.05,P<0.01)。Western blotting和RT-PCR检验结果与基因芯片结果相符合。结论:流感病毒H1N1感染后诱导炎性因子过度表达损伤细胞,黄芩苷可以调控炎性因子表达,减轻宿主细胞的损伤作用,具有明显的抗感染在用。 刘晓婷 张沂 顾立刚 葛世杰 吴珺 邱泽计 于卓男 王玥琦关键词:黄芩苷 人肺腺癌A549细胞 炎性反应 疏风宣肺、解表清里方对流感病毒H1N1感染A549细胞的干预作用及免疫调控机制的研究 目的流感病毒引发的急性呼吸道传染病简称为流感,每年的冬春季节是高发。流感病毒极易发生抗原变异,目前疫苗的效果一般;此外,目前西药有一定的抗流感病毒作用,但是毒副作用较强,并且长期使用易产生耐药性。因此,探索我国的中医药宝... 葛世杰关键词:基因芯片 人肺腺癌A549细胞 炎症细胞因子 疏风宣肺方与解表清里方对流感病毒H_1N_1感染的A549细胞凋亡的影响 被引量:2 2015年 目的:探讨疏风宣肺方与解表清里方对流感病毒H1N1感染的A549细胞凋亡的影响。方法:培养人肺腺癌上皮细胞A549,甲型流感病毒H1N1感染A549细胞后,以达菲为药物对照组,利用基因芯片技术通过KEGG pat hway分析涉及细胞凋亡信号传导途径。研究疏风宣肺方与解表清里方凋亡信号通路中基因转录的变化;同时采用荧光定量PCR检测各组细胞中的肿瘤坏死因子受体超家族成员6(Fas)、Fas配体(Fas L)及天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白-3、-8、-9(Caspase-3、-8、-9)m RNA表达的变化;West er n bl ot t i ng法检测各组细胞中蛋白的变化。结果:与细胞对照组相比,H1N1感染组差异表达基因Casp3、Casp8、Casp9、Fas、Fasl明显上调,奥司他韦组、疏风宣肺组和解表清里组对差异表达基因Casp8、Casp7、Fas、Fasl明显下调;q RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,H1N1感染组Caspase-3、-8、-9、Fas、Fas L的m RNA表达均显著升高(P<0.01);与H1N1感染组比较,疏风宣肺组Caspase-3、-8、-9、Fas、Fas L的m RNA表达均明显降低(P<0.05),解表清里组Caspas e-3、-9、Fas、Fas L的m RNA表达均明显降低(P<0.05)。同时疏风宣肺组治疗效果优于解表清里组。Wes t er n bl ot t i ng结果显示,H1N1感染组Fas、Fas L蛋白细胞较对照组显著升高(P<0.05)。与H1N1感染组比较,2种方药的Fas、Fas L表达均显著降低(P<0.05);q RT-PCR结果与基因芯片结果基本一致。结论:疏风宣肺方与解表清里方均可调控甲型流感病毒感染后的Caspase-3、-8、-9、Fas、Fas L表达,可对抗流感病毒感染后的细胞凋亡。 葛世杰 刘晓婷 张沂 卢娜娜 顾立刚 吴珺 邱泽计 张洪春 晁恩祥关键词:流感病毒 人肺腺癌A549细胞 细胞凋亡