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刘冲: 作品数：13 被引量：13H指数：2; 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技统筹创新工程计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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抗人AEG-1单克隆抗体可变区基因克隆及序列分析: 2014年; AEG-1基因位于人染色体8q22,编码582个氨基酸,参与多种信号转导途径并与多种恶性肿瘤的发生、发展及生物学表型密切相关。为更好地探讨AEG-1生物学功能,以纯化的p GSTag-AEG-1蛋白免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术并经筛选及鉴定,获得了分泌抗人AEG-1单克隆抗体的杂交瘤细胞株1 E3;Western blot及免疫组化证实该细胞株分泌的单克隆抗体能与肿瘤细胞中AEG-1蛋白特异性结合;RT-PCR方法从1E3细胞中克隆出抗AEG-1抗体的VH和VL基因片段,通过测序分析、碱基和蛋白序列的比对确认该株抗体为鼠源性Ig G的轻、重链可变区基因。进一步运用Kabat System在线分析系统对VH和VL基因进行结构分析,确证FWRs和CDRs的结构完整,VH编码117个氨基酸;VL编码119个氨基酸,属于轻链κV家族。实验结果为进一步研究AEG-1与恶性肿瘤发生、发展的关系及在其临床诊断中的应用奠定了基础。; 龙敏董柯王希陈曦刘冲刘丽张惠中; 关键词：AEG-1 可变区基因克隆

双特异单链抗体BiTE在肿瘤治疗中的研究进展: <正>BiTE(bispecific T cell engager)是一种以T细胞作为效应细胞的双特异性单链抗体,它具有两种特异性抗原结合位点,可以同时和T细胞及靶细胞结合,并激活细胞毒性T细胞杀伤肿瘤细胞。和其它BsA...; 田江红刘冲; 文献传递

抗AEG-1单链可变区抗体的原核表达及纯化: <正>目的构建抗AEG-1单链可变区抗体(V23)的原核表达载体,并对表达蛋白进行纯化及免疫活性检测。方法应用Primer5软件设计针对抗AEG-1单链可变区抗体基因序列的引物,构建PRsetC/V23原核表达质粒,经限...; 路蔓刘昕阳王琛刘冲郜赵伟欧阳永日龙敏张惠中; 文献传递

小鼠抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆抗体的制备及应用: 2016年; 目的制备并纯化具有高特异性的抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆抗体(mAb),并进行异硫氰酸荧光素(FITC)标记,鉴定标记的mAb与肿瘤细胞的结合能力。方法小鼠腹水诱生法制备并纯化抗AEG-1 mAb,Western blot法和免疫组织化学染色检测mAb的纯度及免疫活性。流式细胞术检测FITC标记mAb的标记效率,流式细胞术及免疫细胞化学染色检测FITC标记mAb与肿瘤细胞的结合能力。结果纯化得到了具有较高纯度的抗AEG-1 mAb,免疫活性良好;流式细胞术检测结果显示,FITC标记的mAb标记的肿瘤细胞表面荧光强度明显增加,标记率可达到90%以上;FITC标记的mAb可特异性识别并结合AEG-1阳性表达的肿瘤细胞,还能与小鼠体内注射的肿瘤细胞结合,在BALB/c小鼠血液中可检测出荧光染色阳性的肿瘤细胞。结论成功制备出小鼠抗AEG-1 mAb并进行了FITC标记,标记的mAb在体内外均可与肿瘤细胞特异性结合。; 路蔓龙敏郜赵伟刘冲张惠中; 关键词：单克隆抗体肿瘤特异性

Her2/ECD-sf162/TM融合杆状病毒表达及鉴定被引量：2: 2015年; 目的:获得融合表达的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒,为后续基于SIV Gag蛋白的Her2病毒样颗粒疫苗的制备奠定实验基础。方法:将Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM p Fast Bac重组表达载体,转座大肠杆菌E.coli DH10Bac菌株,获得重组杆粒,在昆虫细胞中表达获得重组杆状病毒,Western blot方法对该病毒进行鉴定。结果:构建的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒表达载体经PCR鉴定正确,转染昆虫细胞后获得了重组杆状病毒,该融合杆状病毒蛋白可与抗Her2抗体发生免疫反应。结论:成功构建的Her2/ECD-sf162/TM杆状病毒可用于Her2病毒样颗粒疫苗的制备。; 李谨革龙敏王希董柯林芳刘冲张惠中; 关键词：HER2/NEU 胞外区 SIV 杆状病毒

鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1单克隆荧光抗体在恶性浆膜腔积液检测中的应用: 2016年; 目的应用鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆荧光抗体检测恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞。方法应用PCR及Western-blot方法检测浆膜腔积液脱落细胞中的AEG-1表达;用鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体与恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞共孵育,同时采用良性病变的浆膜腔积液作为阴性对照。结果恶性浆膜腔积液脱落细胞中AEG-1表达呈阳性,而良性病变的浆膜腔积液脱落细胞中AEG-1表达为阴性或弱阳性;同时鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体直接标记脱落细胞的结果与PCR和Western-blot检测结果一致。结论鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体为浆膜腔积液中的肿瘤细胞鉴定提供了新的实验手段。; 路蔓龙敏刘冲陈曦王琛张惠中; 关键词：荧光标记浆膜腔积液

腺苷抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的机制被引量：1: 2016年; 目的:检测腺苷对乳腺肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响,并探究其潜在的分子机制。方法:以MCF-7细胞为模型,采用梯度浓度的腺苷处理细胞,MTT及细胞计数法检测腺苷对细胞增殖的影响,流式细胞术检测腺苷对细胞凋亡及周期的影响,划痕修复实验检测腺苷对细胞迁移能力的影响。结果:腺苷可显著抑制MCF-7细胞增殖,且抑制效果与腺苷浓度及作用时间呈相关性。流式细胞术检测结果表明腺苷可诱导MCF-7细胞凋亡,并引起细胞的G_2/M期阻滞。划痕实验结果表明腺苷抑制MCF-7细胞的迁移能力。实时定量PCR检测结果发现,促细胞凋亡分子Bax及Bak表达量显著升高,而凋亡抑制分子Bcl-2表达量显著下降,同时Caspase-3的表达量也显著升高。结论:腺苷可诱导MCF-7细胞凋亡,抑制细胞的增殖,同时腺苷可以抑制MCF-7细胞的迁移能力。腺苷诱导MCF-7细胞凋亡与其激活线粒体凋亡通路密切相关。; 王会平郜赵伟刘冲龙敏李岩沈建军董轲张惠中; 关键词：腺苷增殖凋亡迁移

Her2/ECD-sf162/TM嵌合VLPs的制备及抗肿瘤免疫效果研究被引量：1: 2016年; 目的:成功制备Her2胞外段基因与猴免疫缺陷病毒(simian immunodeficiency virus,SIV)包膜蛋白sf162跨膜区基因融合的Her2/ECD-sf162/TM病毒样颗粒(VLPs),并在小鼠体内进行初步的抗肿瘤免疫效果研究。方法:利用前期构建好的Her2/neu与SIV-gag嵌合的表达载体Her2/ECD-sf162/TM,制备Her2/neu与SIV-gag嵌合型VLPs疫苗,并用该疫苗免疫小鼠。结果:VLPs可成功激发小鼠体内免疫应答反应,产生血清抗VLPs的抗体;VLP免疫后接种Her2/neu+小鼠乳腺癌细胞EMT6,结果显示该疫苗可有效抑制肿瘤生长;同时,VLP对荷瘤鼠治疗结果也显示,该疫苗可在一定程度上抑制肿瘤生长。结论:VLPs疫苗具有良好的免疫原性,且免疫后对肿瘤攻击具有保护作用。; 龙敏董柯王希林芳刘冲张惠中; 关键词：HER2/NEU 肿瘤疫苗 VLPS 免疫

AnnexinV纳米级超声造影剂的制备及体外靶向显像的实验研究被引量：3: 2015年; 目的探讨连接AnnexinV纳米级超声造影剂的制备、超声显影及体外与肿瘤凋亡细胞的结合能力。方法采用薄膜水化法制备包裹医用全氟丙烷气体的纳米级脂质微泡，通过生物素一亲和素系统连接AnnexinV分子，制成AnnexinV纳米超声造影剂（AnnexinV—Nanobubbles，AVNBs）；纳米粒径／电位分析仪检测AVNBs的粒径和Zeta电位；将AVNBs分别于4℃存放0h、12h、24h、72h后测粒径，并分析其稳定性；扫描电子显微镜观察其形态及均一度；超声成像系统检测其体外显影效果，并与声诺维进行对比；荧光显微镜观察AVNBs与体外肿瘤凋亡细胞的结合情况。结果测得AVNBs粒径大小为（640．2±32．1）nm，Zeta电位为（-23．30±5．71）mV，且24h内粒径基本稳定在纳米级；肉眼观察制备好的AVNBs为乳白色混悬液。扫描电镜视野下呈空心球形、大小均一、分散良好。体外超声成像显示，AVNBs与对照组声诺维有相同的显影效果。体外实验证实AVNBs与凋亡细胞结合良好，结合率为（97．55±1．30）％。结论本法制备的AVNBs粒径小，稳定性和均一性好，体外超声显影效果明显，可与体外凋亡细胞靶向性结合。; 周田赵萍段云友蔡文斌杨恒丽张惠中刘冲; 关键词：微气泡

siRNA沉默HepG-2细胞B7-H3对细胞行为学影响的研究被引量：2: 2017年; 目的:探讨siRNA方法沉默HepG-2细胞中B7-H3基因表达对细胞周期、增殖及迁移能力的影响。方法:设计合成针对B7-H3基因的siRNA及无关干涉siRNA序列,并分别构建干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3及无关干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/NC;采用脂质体Lipofectamine^(TM)2000转染对数生长期肝癌细胞HepG-2,经G418筛选后获得相应细胞模型;利用RT-PCR和Western blot方法分别检测空白对照组(WT)、无关干涉组(si-NC)和B7-H3干涉组(si-B7-H3)细胞中B7-H3 mRNA及蛋白表达水平;利用CCK-8细胞增殖实验及克隆形成实验评价各组细胞增殖情况;利用碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测各组细胞周期分布情况;利用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果:成功构建了pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3干涉载体。RT-PCR及Western blot结果显示,B7-H3干涉组较空白对照组、无关干涉组mRNA及蛋白水平明显下降;CCK-8增殖、克隆形成实验、细胞划痕实验及流式结果表明B7-H3干涉组增殖受到明显抑制,克隆较小且克隆数减少,细胞周期阻滞于G_0/G_1期,细胞迁移能力受抑制。结论:利用siRNA靶向干涉B7-H3表达可抑制HepG-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞,降低细胞迁移能力,实验结果为开发针对B7-H3靶点的肝癌免疫治疗提供了初步实验及理论基础。; 左佳蕙张喆龙敏郜赵伟刘冲董轲张惠中; 关键词：肝癌 B7-H3 细胞周期细胞迁移

刘冲

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