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桂连
作品数:
5
被引量:6
H指数:2
供职机构:
中山大学中山医学院免疫学研究所
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发文基金:
广东省科技计划工业攻关项目
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
黄俊琪
中山大学附属第一医院
张英可
中山大学附属第一医院
张倩倩
中山大学附属第一医院
张林
中山大学中山医学院免疫学研究所
蔡燕
中山大学附属第一医院
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黄俊琪
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2015
1篇
2014
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5
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应用Luminex xMAP液相芯片技术研究miRNAs对THP-1细胞产生细胞因子的影响
被引量:1
2015年
目的研究let-7e单独作用或miR-106b和miR-20a共同作用对THP-1细胞产生细胞因子的影响。方法用Cy3标记的miRNA阴性对照瞬转THP-1细胞24h、36h和48h,免疫荧光法检测其转染效率;let-7e、miR-106b及miR-20amimic分别瞬转THP-1细胞24h、36h和48h,qRT—PCR检测各miRNA表达量并筛选各miRNA的最佳转染时间;1mg/L LPS刺激各miRNA转染的THP-1细胞1h后,Luminex xMAP液相芯片技术检测THP-1细胞产生的IL-8、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP—1)、IL-1d、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-α和IFN—β,并进行差异性分析。结果转染后90%以上的THP-1细胞带有红色荧光;let-7e mimic的最佳转染时间是48h,miR-106b及miR-20amimic的最佳转染时间是24h;相对于各自的对照组,let-7e mimic组IL-8、IP-10和MCP-1表达量增加,而在miR-106b和miR-20a mimic共转染组各趋化因子表达量减少。结论let-7e促进THP-1细胞中IL-8、IP-10和MCP-1的表达,miR-106b和miR-20a共同抑制它们的表达。
桂连
张倩倩
蔡燕
郭琪
黄俊琪
关键词:
液相芯片
细胞因子
microRNA家族成员let-7e对人单核细胞系THP-1细胞活性的影响及机制研究
被引量:2
2015年
目的:研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率,qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达;MTT法检测转染后THP-1细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测let-7e靶基因IFI6(interferon alpha-inducible protein 6)、EZH2(enhancer of zeste homolog 2)、caspase-3的表达;转染48h 后THP-1细胞用LPS刺激2h收集细胞培养上清,细胞因子芯片法检测上清中炎性因子的表达。结果 miRNA模拟物可以转染THP-1细胞,转染率约为75%,转染 let-7e mimic 12h 、24 h、48 h 后THP-1细胞的 let-7e 表达倍数分别为8.551±0.365、83.893±15.941、38.858±2.743,转染 let-7e inhibitor 12 h、24 h、48 h后THP-1细胞的let-7e表达倍数分别为0.594±0.174、2.427±1.229、3.053±0.207;let-7e mimic转染组THP-1细胞活性升高、凋亡率降低;miranda数据库分析证实let-7e与EZH2、IFI6、caspase-3结合的mirSVR score 分别为-0.1608、-0.5693、-09.423,证实IFI6、EZH2、caspase-3可能是let-7e的靶基因;let7-e mimic转染组IFI6、EZH2、caspase-3表达都有所下降;let-7e mimic 转染组 CD154、粒细胞集落刺激因子( G-CSF)、CD54、IL-13、IL-1RA和IL-23表达有所下降。结论 let-7e有抗THP-1细胞凋亡的作用,可影响LPS诱导的细胞因子的表达。 let-7e可能通过调节其靶基因caspase-3、IFI6、EZH2对THP-1细胞的生物学功能产生影响。
张林
张英可
桂连
章旭之
黄俊琪
关键词:
THP-1细胞
miR-106b的免疫调节及其与自噬和凋亡关系的研究进展
被引量:1
2014年
micro RNAs(mi RNAs)是一类长度为21~25个核苷酸的内源性非编码小RNAs,在转录后水平上负向调控基因的表达。micro RNA-106b(mi R-106b)作为mi RNAs的一员,其免疫调节功能可通过影响细胞因子和转录因子的表达和TGF-β信号通路来实现。此外,mi R-106b还影响细胞的自噬和凋亡途径。现就近年来mi R-106b的研究进展作一综述。
桂连
黄俊琪
关键词:
MI
免疫调节
自噬
凋亡
let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响
被引量:1
2015年
目的研究let-7e对PBMCs和原代单核细胞产生IL-10的影响。方法生物信息学分析let-7e的靶基因并通过荧光素酶报告实验进行验证;用1μg/ml或10μg/ml LPS刺激PBMCs和原代单核细胞24、48和72 h后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度,筛选出LPS最佳刺激时间和质量浓度;用let-7e mimic或阴性对照(NC)瞬时转染PBMCs和原代单核细胞24、36和48 h后,q RT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;转染细胞经LPS刺激后,ELISA法检测细胞培养上清中IL-10的质量浓度。结果 let-7e可能直接靶向抑制IL-10;1μg/ml LPS刺激细胞24 h即可产生较高水平的IL-10;瞬转let-7e mimic 24 h即可使细胞高表达let-7e;let-7e mimic组细胞培养上清中IL-10的质量浓度低于let-7e NC组。结论 let-7e可抑制PBMCs和原代单核细胞产生IL-10。
桂连
黄俊琪
关键词:
IL-10
LPS
MicroRNA let-7e对LPS诱导的TNF-α表达的影响及机制的初步研究
被引量:2
2015年
目的研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制。方法用全血分离人原代单核细胞,流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14;let-7e mimics或mimics NC瞬转原代单核细胞24h、36h、48h,qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;采用1mg/L LPS刺激原代单核细胞1h、3h、6h、12h后,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度,筛选出LPS最佳刺激时间;qRT—PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响;Western blot法检测瞬转1et-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfaptin 2的表达水平。结果CD14^+细胞大于70%;免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞,转染率约为70%;let-7e mimics转染原代单核细胞24h,细胞内即可表达较高水平的let-7e;LPS刺激原代单核细胞12h即可产生较高水平的TNF-α。ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生,同时在mRNA水平也得到一致的结果;Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组,沉默EZH2后胞核中NF—κ Bp65显著下调,沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降。结论在原代单核细胞中,let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达;其机制可能是1et-7e靶向作用EZH2进而调节NF—κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平。
张倩倩
张英可
桂连
黄俊琪
关键词:
TNF-Α
LPS
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