金金
- 作品数：9 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院药物研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体的构建
- 2009年
- 【目的】构建pEGFP-N1-α-synuclein真核表达载体,为研究帕金森病奠定基础。【方法】设计特异引物,PCR扩增α-synuclein cDNA并引入FLAG标签,克隆入pEGFP-N1质粒,对重组质粒进行酶切及测序,鉴定正确后转化Ecoli.DH5(大肠杆菌),大量扩增重组质粒。试剂盒纯化重组质粒。用Lipofectamine TM2000将重组质粒转染2937细胞,Western blotting检测融合蛋白在细胞内的表达。【结果】pEGFP-N1-α-synuclein重组质粒构建成功,Western blotting检测融合蛋白分子量为47kd,符合预期值。【结论】成功构建了人野生型α-synuclein与绿色荧光蛋白基因融合并加入FLAG标签的真核表达载体pEGFP-N1-α-synuclein。
- 杨波苑玉和金金陈虹陈乃宏
- 关键词：帕金森病Α-SYNUCLEINPEGFP-N1真核表达融合蛋白
- 蛋白激酶为靶点的荧光可视化药物筛选模型的研究
- 金金陈乃宏
- 蛋白激酶为靶点的荧光可视化药物筛选模型的研究
- 蛋白激酶是调节人体生理功能的重要分子,其功能的异常可诱导许多疾病的发生。因此以调节、改善蛋白激酶活性及功能异常为靶点建立药物筛选模型,在创新药开发和研究方面有重要的意义。另一方面,许多神经退行性疾患都有蛋白激酶活性异常。...
- 金金陈乃宏
- 文献传递
- α-synuclein促进凋亡的机制研究
- 2007年
- 目的：α-synuclein是一种功能未知的突触前膜蛋白，是多种神经退行性疾病胞浆中的纤维聚积体中的主要成份。虽然经过大量的研究，α-synuclein在这些疾病中发挥的作用仍未充分阐明，但是许多研究均报道过α-synuclein的过量表达对细胞具有一定的毒性，因此本研究的主要目的是研究α-synuclein对NF-xB信号途径所介导的细胞凋亡的调节作用。NF-xB是在细胞中广泛表达的转录因子，能够调节多种抗凋亡基因如BCl-2的表达，而GSK3β是与神经细胞凋亡紧密相关的多功能激酶，通过磷酸化包括NF-xB等各种转录因子的多种靶蛋白而调节细胞的凋亡。方法与结果：本研究通过分子克隆技术构建人源α-synuclein的载体并建立稳定过表达株，我们的研究发现：过表达α-synuclein的细胞稳定株细胞存活率与对照组相比显著性降低，而通过报告基因检测发现过表达的α-synuclein能够显著抑制NF-xB介导的基因的表达，并且这种抑制作用呈现剂量依赖性，随着α-synuclein转染量的增加而呈现更加明显的抑制作用；而通过Western Blot检测发现，过表达的α-synuclein能够促进GSK3β的表达，而抑制抗凋亡基因BCl-2的表达。结论：α-synuclein对细胞的毒性可能通过促进GSK3β的表达抑制NF-xB途径，由此通过抑制由NF-xB介导的抗凋亡基因BCl-2表达而发挥作用。
- 苑玉和金金杨波张威胡金凤陈乃宏
- 关键词：细胞凋亡NF-KB分子克隆技术神经退行性疾病
- α-synuclein促进凋亡的机制研究
- 目的：α-synuclein 是一种功能未知的突触前膜蛋白,是多种神经退行性疾病胞浆中的纤维聚积体中的主要成份。虽然经过大量的研究,α-synuclein 在这些疾病中发挥的作用仍未充分阐明,但是许多研究均报道过α-sy...
- 苑玉和金金杨波张威胡金凤陈乃宏
- 文献传递
- 蛋白激酶为靶点的荧光可视化药物筛选模型的研究被引量：1
- 2006年
- 蛋白激酶是调节人体生理功能的重要分子，其功能的异常可诱导许多疾病的发生。因此以调节、改善蛋白激酶活性及功能异常为靶点建立药物筛选模型，在创新药开发和研究方面有重要的意义。
- 金金陈乃宏
- 关键词：蛋白激酶靶点荧光可视化药物筛选模型
- 过表达α-synuclein的细胞毒性及对损伤性刺激的影响
- 2010年
- 目的构建过表达α-synuclein的细胞模型,研究过表达α-synuclein的细胞毒性作用及其分子机制,为揭示帕金森病(PD)可能的发病机制和寻找治疗药物潜在靶点提供依据。方法脂质体法转染及过表达α-synuclein稳定株的构建,MTT法、PI染色、荧光显微镜观察用于检测过表达α-synuclein对细胞活性和分化、撤血清及MPP+损伤的影响,荧光素酶报告基因检测和Western印迹检测用于研究过表达α-synuclein对NF-κB信号通路及相关蛋白的影响。结果过表达α-synuclein对细胞的分化表型无明显影响,但能明显降低DA能细胞存活率,并显著增加撤血清损伤及MPP+毒性对细胞的损伤程度。过表达α-synuclein能够明显加重MPP+对NF-κB转录激活活性的抑制作用,其机制可能与抑制IκB-α的磷酸化有关。结论基于遗传背景与环境因素相结合的PD研究模型能够更好地拟合其病理过程,更加科学合理。NF-κB信号通路活性的抑制可能是PD发病的又一新机制,针对该通路上相关蛋白的深入研究可能成为PD治疗药物开发的新型研究方向。
- 金金苑玉和杨波孙建栋陈乃宏
- 关键词：Α-SYNUCLEIN细胞毒性MPP+NF-ΚB
- α-synuclein过表达下调Nurr1转录活性的机制研究
- 2011年
- 目的研究α-synuclein过表达对多巴胺能神经元核受体相关因子-1(Nurr1)转录活性的影响及作用机制。方法 PC12细胞转染α-synuclein质粒后,采用双荧光素酶检测方法和Western blot方法分别检测Nurr1转录活性及蛋白水平变化情况。同时检测调控Nurr1转录活性的GSK3β/β-catenin通路中相关信号蛋白水平变化。结果与对照组相比,α-synuclein过表达可明显降低Nurr1转录活性,但对Nurr1蛋白水平无明显影响。通过检测GSK3β/β-catenin中相关信号蛋白发现,α-synuclein过表达可明显降低GSK3β(Ser9)磷酸化水平和β-catenin蛋白水平。结论α-synucle-in可能通过调控GSK3β/β-catenin通路下调Nurr1转录活性。
- 赵明苑玉和金金孙建栋陈乃宏
- 关键词：Α-SYNUCLEIN转录活性PC12细胞
- 星形胶质细胞释放谷氨酸的机制被引量：2
- 2008年
- 谷氨酸是介导中枢神经系统快速兴奋性传导的一种重要递质。以往人们仅注意到神经元通过释放谷氨酸来调节其可塑性,而近年来发现脑中远超出神经元10倍的星形胶质细胞同样能释放谷氨酸并参与神经系统的调节及多种脑损伤性疾病的发生发展过程。目前主要包括Ca2+依赖性释放及非Ca2+依赖性释放两大方面,涉及5种机制:(1)Ca2+依赖性胞吐释放;(2)谷氨酸转运体逆向转运假说;(3)膨胀诱导的阴离子通道假说;(4)连接蛋白半通道假说;(5)嘌呤受体假说。
- 金金陈乃宏
- 关键词：谷氨酸星形胶质细胞谷氨酸释放
