金永柱
- 作品数：19 被引量：47H指数：5
- 供职机构：北京大学基础医学院免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部“985工程”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 成年大鼠胰岛的体外基因转染
- 2003年
- 目的 探讨携带外源基因的慢病毒在体外有效感染胰岛及外源基因在胰岛中的表达,为通过移植前向胰岛细胞转入特定的免疫调节分子基因诱导胰岛移植物耐受奠定基础。方法 将目的基因CTLA4Ig导入慢病毒载体pWPTS,构建成pWPTS-CTLA4Ig载体。用磷酸钙沉淀法将pWPTS-EGFP、pWPTS-CTLA4Ig分别和其辅助载体pMD2.G、pCMV△8.92共转染293T细胞,收获病毒上清液,测定病毒滴度后感染新分离的胰岛。通过Western Blot测定胰岛培养上清液中CTLA4Ig蛋白的表达。结果 ①成功构建了携带CTLA4Ig基因的慢病毒载体pWPTS-CTLA4Ig;②包装产生的慢病毒Lenti-EGFP、Lenti-CTLA4Ig在体外可以感染胰岛,其中在Lenti-EGFP慢病毒感染的胰岛观察到了绿色荧光,及在Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛培养上清液中检测到了CTLA4Ig蛋白的表达。结论 慢病毒在体外可以有效感染大鼠胰岛,且携带的外源基因可以在胰岛细胞中稳定表达,其中Lenti-CTLA4Ig慢病毒感染的胰岛为进行胰岛移植并诱导体内特异的胰岛移植物耐受奠定了基础。
- 金永柱曲爱娟谢蜀生
- 关键词：I型糖尿病胰岛慢病毒载体基因治疗
- 人CTLA4Ig腺病毒载体的构建及其生物学功能研究被引量：4
- 2003年
- 目的:通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体,研究其生物学活性,并用于基因治疗诱导心脏移植耐受。方法:通过基因重组技术,将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中。然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组,经过293细胞包装,构建CTLA4Ig腺病毒载体。用RT-PcR、SDS-PAGE及Western blot等技术,检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌,通过体外实验,观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应(MLR)的抑制作用。通过大鼠体内实验,检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后,CTLA4Ig在体内的表达。结果:CTLA4Ig腺病毒载体构建成功。体外实验证实,CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液,能够抑制异基因脾细胞的单向MLR。体内实验表明,经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体,能够诱导移植耐受,延长心脏移植物的存活。结论:构建的CTLA4Ig腺病毒载体,体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白。该蛋白可抑制T细胞的活化,CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受。
- 张庆殷金永柱谢蜀生张海滨
- 关键词：腺病毒载体生物学功能移植耐受
- 腺病毒介导CTLA4-FasL基因转移诱导大鼠心脏移植物长期存活的作用被引量：14
- 2003年
- 目的 探讨腺病毒介导细胞毒T淋巴细胞相关抗原 (CTLA4 ) FasL基因转移延长异基因大鼠心脏移植物存活的作用及其相关机制。方法 供体DA大鼠心脏移植给受体LEW大鼠后 ,经门静脉注入 5× 10 9空斑形成单位 /毫升 (pfu/ml)CTLA4 FasL腺病毒 (AdCTLA4 FasL) ;随后 ,通过每天触摸受体大鼠腹壁 ,记录心脏移植物存活时间。受体大鼠尾静脉取血 ,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定CTLA4 FasL融合蛋白的体内表达 ;通过过继性转移试验、混合淋巴细胞反应 (MLR)及白细胞介素 (IL) 2逆转实验、细胞毒T细胞 (CTL)活性测定、辅助性T淋巴细胞前体 (HTLp)和细胞毒T淋巴细胞前体 (CTLp)频数测定及辅助性T细胞 (TH) 1/ 2型细胞因子检测 ,探讨耐受机制。结果 经AdCTLA4 FasL处理的受体大鼠 ,异基因心脏移植物平均存活时间达 (71 0± 2 3 7)d(n =6 ) ,而对照的未处理组、绿色荧光蛋白 (EGFP)腺病毒处理组和细胞毒T淋巴细胞相关抗原 4免疫球蛋白 (CTLA4Ig)腺病毒处理组平均存活时间分别为 (5 7± 0 5 )d(n =6 )、(5 2± 0 4 )d(n =6 )和 (4 5 7± 12 4 )d(n =6 ) ,差异具有显著意义 (均P <0 0 5 )。心脏移植物长期存活的受体大鼠对供体抗原的低应答可以被过继转移 ;MLR活性特异性降低 ,且不被外源性IL 2逆转 ;CTL活?
- 金永柱王光明李爱玲谢蜀生
- 关键词：CTLA4-FASL基因转移心脏移植
- 日本血吸虫病的免疫诊断现状与研究进展
- 1999年
- 简要概述了用于检测抗日本血吸虫抗体的理化纯化抗原、免疫纯化抗原、基因重组抗原和抗独特型抗体－内影像抗原等诊断用抗原和用针对日本血吸虫某一抗原组分的单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的敏感性、特异性和实用性，及改变标记物、载体系统和标本类型等新的血清学诊断方法的研究进展。
- 金永柱蒋作君
- 关键词：日本血吸虫病免疫诊断抗原抗体
- 腺病毒介导的CTLA4-FasL基因转移预防小鼠自身免疫性糖尿病被引量：2
- 2004年
- 抑制或删除自身免疫性T细胞对胰岛素生成细胞——β细胞的破坏可以有效预防1型糖尿病的发生.研究表明cTLA4-FasL双功能免疫抑制分子可以抑制T细胞活化及促进T细胞的凋亡.在多次小剂量(40 mg/kg)腹腔注射链脲佐菌素诱导的小鼠自身免疫性糖尿病模型中,初次给予链脲佐菌素的同时,经尾静脉输注(2-5)×108pfu/mL CTLA4-FasL腺病毒进行基因治疗后,糖尿病的发病率显著降低(13％,n=15),血糖和胰岛素水平维持正常;且显著诱导胰腺淋巴细胞凋亡及胰腺淋巴细胞IFN-γ与Vβ8.2TCR的mRNA表达明显下降.表明腺病毒介导CTLA4-FasL基因治疗,有效诱导自身反应性T细胞凋亡,提示其在预防自身免疫性糖尿病的潜在价值.
- 金永柱王光明李爱玲郝洁高翔谢蜀生
- 关键词：胰岛素依赖性糖尿病链脲佐菌素腺病毒载体
- 转染IL-6基因骨髓基质细胞系对骨髓移植后免疫功能重建的促进作用被引量：4
- 2002年
- 目的 探讨转染IL 6基因的骨髓基质细胞系对同基因骨髓移植 (BMT)后小鼠免疫功能重建的促进作用。方法 将IL 6cDNA片段连接到pcDNA3真核表达载体上。用脂质体将pcD NA3IL 6转入骨髓基质细胞系QXMSC1,ELISA法测定转染IL 6基因骨髓基质细胞QXMSC1IL 6培养上清中IL 6的含量 ,有限稀释挑选多个细胞克隆 ,选择表达量最高的转基因细胞系QXMSC1IL 6用于动物实验。BABL c小鼠经γ射线致死量照射后 ,输入同基因骨髓细胞 (10 7 只 )同时输入骨髓基质细胞QXMSC1IL 6 (5× 10 5 只 )。在骨髓移植后 30d、6 0d检测BMT小鼠淋巴细胞对LPS ,ConA增殖反应 ,T辅助细胞前体 (helpTlymphocyteprecursor,HTLp) ,杀伤性T细胞前体 (cytotoxicTlymphocyteprecursor,CTLp) ,迟发型超敏反应 (delayed typehypersensitivity ,DTH)及空斑形成细胞数 (plaqueformingcell,PFC) ,反映骨髓移植后小鼠免疫功能。结果 成功构建pcDNA3IL 6重组体。该细胞体外培养 2 4h分泌IL 6的含量为 11.15 (± 2 .4 1) μg 10 6 。QXMSC1IL 6细胞系能明显增强BMT后淋巴细胞对LPS、ConA反应性 ,小鼠对异基因小鼠脾细胞DTH反应增强 ,脾脏中HTLp ,CTLp及PFC数明显增加。转入外源IL 6cDNA基因的骨髓基质细胞系QXMSC1IL 6在体内能明显促进BMT后小鼠T、B淋巴?
- 秦凤华蒋激扬金永柱郝洁谢蜀生
- 关键词：骨髓移植骨髓基质细胞免疫重建
- 腺病毒载体介导的CTLA4-Ig基因转移促进异基因小鼠皮肤移植耐受被引量：5
- 2004年
- 目的 探讨CTLA4 Ig重组腺病毒 (AdCTLA4 Ig)促进“脾细胞 (spleencells ,SP) +环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统诱导移植耐受的作用及其机制。方法 BALB c(H 2 d)小鼠经尾静脉注射C57BL 6(H 2 b,B6)小鼠脾细胞和AdCTLA4 Ig颗粒 ,48h后腹腔注射环磷酰胺 ,并同天进行皮肤移植 ,于耐受 2 5d时对受体小鼠进行混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)、迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等耐受状态的检查。结果 B6小鼠的皮肤移植物在耐受的BALB c小鼠中存活期特异延长。MLR和DTH检验证明BALB c小鼠对B6小鼠的脾细胞产生特异性耐受 ,对无关第三者ICR小鼠的脾细胞仍表现出强烈免疫应答。结论 AdCTLA4 Ig颗粒可以明显促进“细胞 +环磷酰胺”诱导的异基因皮肤移植耐受 ;
- 马建波郝洁王光明李爱玲张庆殷金永柱谢蜀生
- 关键词：皮肤移植基因转移
- 双特异性抗体的应用
- 2001年
- 本文介绍了双特异性抗体在肿瘤的治疗与诊断、治疗血栓性疾病及免疫分析等方面的 应用进展。
- 金永柱
- 关键词：双特异性抗体肿瘤
- CTLA-4-FasL双功能分子的构建及其体外免疫抑制作用的研究被引量：1
- 2001年
- 金永柱谢蜀生
- 关键词：免疫抑制T细胞
- 腺病毒介导的CD40Ig基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植物的长期存活被引量：1
- 2003年
- 目的:通过腺病毒介导的CD40Ig基因治疗,阻断受体体内CD40/CD154共刺激途径,诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制。在将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠后,即经门静脉输注携带CD40Ig基因的腺病毒(AdCD40Ig,5×109 pfu)。观察、记录心脏移植物的存活时间。ELISA检测受体大鼠体内CD40Ig蛋白的表达。通过MLR,IL-2逆转实验及Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制。结果:与未处理对照组相比,携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdEGFP)给予组,移植物的存活时间未见明显延长;AdCD40Ig腺病毒给予组,异基因大鼠心脏移植物平均存活时间延长至(142.8±26.8)天。ELISA检测表明,CD40Ig蛋白在受体体内表达时间较长,但随时间的推移表达水平逐渐下降。Th1和Th2型细胞因子的检测结果显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子偏移的现象。MLR证明耐受大鼠对供体抗原表现为特异性低应答。IL-2逆转实验表明,该耐受形成的早期与克隆无能有关。结论:经.AdCD40Ig腺病毒基因治疗的受体大鼠可以产生特异性的移植耐受,使异基因大鼠心脏移植物长期存活。
- 金永柱张庆殷张海滨谢蜀生
- 关键词：心脏移植移植耐受腺病毒载体
