郑超
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
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- 多西环素调控的重组杆状病毒载体Ac-EGFP及Ac-HGF的构建
- 2013年
- 目的将Tet-On系统与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或肝细胞生长因子(HGF)共同构建于一新型重组杆状病毒载体,并以不同浓度的多西环素(DOX)调控EGFP及HGF表达。方法酶切重组质粒pFast-Tet、pTRE-EGFP和pTRE-HGF,回收目的片段后连接pFast-Tet,分别转化含有AcMNPV Bacmid和helper质粒的DH10Bac感受态细胞,筛选后提取Bacmid DNA并鉴定(命名为Ac-EGFP和Ac-HGF)。将Ac-EGFP和Ac-HGF转染骨髓间充质干细胞,加入不同浓度的DOX调控EGFP(DOX浓度为0、200、500、1000ng/mL)和HGF(DOX浓度为0、10、100、500、1000、1200ng/mL)的表达。在荧光显微镜下观察EGFP的表达,用ELISA法检测HGF的表达量。结果经鉴定EGFP、HGF与Tet-On系统成功构建在同一杆状病毒载体,且在骨髓间充质干细胞中具有较高的转染率。在较高浓度DOX调控下改造后的重组杆状病毒可高表达EGFP和HGF,低浓度或无DOX时表达量逐渐减低。结论本研究证实可将Tet-On系统与EGFP或HGF共同构建于一新型重组杆状病毒载体,改造后的重组杆状病毒能稳定、高效转染骨髓间充质干细胞,不同浓度的DOX可调控EGFP及HGF的表达,无DOX时呈低本底。
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- 关键词：增强型绿色荧光蛋白间质干细胞杆状病毒
- 杆状病毒介导肝生长因子在兔骨髓间充质干细胞中的调控表达
- 2014年
- 目的:建立转染高效可调控的携带肝生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)为目的基因的重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并探寻其在转染骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)后的最佳诱导浓度。方法:用转基因的方法构建重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,随后转染BM-MSCs,用ELISA和Western blot检测不同浓度强力霉素(doxycycline,DOX)诱导体外培养兔BM-MSCs分泌的HGF浓度。结果:构建了高效可调控重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并且成功转染兔BM-MSCs,用系列浓度DOX诱导时ELISA和Western blot均检测到BM-MSCs中HGF的表达有DOX诱导剂量依赖关系并且连续7 d持续表达,且实验组的HGF的表达量明显高于对照组(P<0.001)。结论:成功构建一次性转染、高效可调控的重组杆状病毒vAcrtTA2s-Ptight-HGF,并实现对HGF表达的调控,当DOX诱导浓度为1μg/ml时为其体外最佳诱导浓度。
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- 关键词：骨髓间充质干细胞杆状病毒转染强力霉素
