郑国旭
- 作品数：16 被引量：48H指数：4
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- HLA-G调控自然杀伤细胞免疫功能的研究进展被引量：8
- 2015年
- 人白细胞抗原G(HLA-G)属于非经典的HLAⅠ类分子,正常情况下主要表达于母胎界面绒毛外滋养层细胞。一些肿瘤细胞系、肿瘤组织、感染的组织细胞及正常组织细胞也可检测到HLA-G的表达。自然杀伤(NK)细胞是重要的固有免疫细胞,在免疫应答与免疫调节过程中发挥重要作用。HLA-G参与免疫调控引发了越来越多的关注,其功能由最初的"母胎耐受"逐渐扩展到肿瘤免疫逃逸、器官移植耐受等多个方面,本文重点回顾了HLA-G参与调控NK细胞免疫功能的各种机制:通过与受体相互作用抑制NK细胞的杀伤作用、调节NK细胞表面受体及细胞因子的表达、通过胞啃作用(trogocytosis)广泛引发免疫抑制、引发NK细胞凋亡。
- 郭张燕郑国旭温伟红杨安钢
- 关键词：HLA-GNK细胞肿瘤逃逸
- HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体构建及其基因工程菌种稳定性的鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的构建HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的原核表达载体并鉴定其基因工程菌种稳定性。方法应用PCR技术以pCMV-e23sFv-Fdt-tBid为模板扩增e23sFv-Fdt-tBid片段,并将其克隆入pET-22b原核表达载体;将该表达载体转化BL21大肠杆菌并挑取表达蛋白较高的克隆菌,划线接种传代50次;通过革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及蛋白诱导表达的Western blot分析鉴定e23sFv-Fdt-tBid免疫促凋亡蛋白表达工程菌的稳定性。结果成功构建pET-22b-e23sFv-Fdt-tBid原核表达载体,并在BL21大肠杆菌中诱导表达;革兰氏染色方法、扫描电镜形态观察、菌种质粒酶切鉴定及Western blot法鉴定结果表明基因工程菌种稳定性良好,可以稳定表达免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid。结论成功构建了HER2靶向免疫促凋亡蛋白原核表达载体,鉴定了表达该免疫促凋亡蛋白的基因工程菌种稳定性,为HER2靶向免疫促凋亡蛋白e23sFv-Fdt-tBid的应用研究奠定了基础。
- 席文锦彭红艳白文栋郑国旭史圣甲皇甫罗锴王曦贾林涛张英起杨安钢
- 关键词：原核表达
- E盒锌指结合蛋白1基因沉默抑制结肠癌HCT116细胞增殖并促进其凋亡被引量：3
- 2014年
- 目的使用针对E盒锌指结合蛋白1(ZEB1)的siRNA在结肠癌HCT116细胞中下调ZEB1的表达,研究其对HCT116细胞增殖和凋亡的影响。方法根据人ZEB1的mRNA序列设计并合成2对针对ZEB1的siRNA,瞬时转染HCT116细胞后,利用实时荧光定量PCR,Western blot法分别在mRNA和蛋白水平检测siRNA对ZEB1的抑制效果;利用MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果与对照组相比,针对ZEB1的siRNA可在mRNA和蛋白水平有效抑制ZEB1的表达,ZEB1的表达下调可有效抑制HCT116细胞的增殖,并促进细胞凋亡。结论 ZEB1对结肠癌细胞的生存和增殖具有重要作用,可能参与结肠癌的发生发展过程。
- 郑国旭史圣甲魏铭席文锦郭张燕杨帆孟艳玲温伟红杨安钢
- 关键词：结肠癌细胞增殖
- 阻断KIR2DL4(CD158d)增强NK细胞的杀伤功能被引量：4
- 2016年
- 目的利用抗体阻断人原代培养的自然杀伤(NK)细胞表面的杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4),抑制其与配体人白细胞抗原G(HLA-G)的结合,观察对NK细胞杀伤功能的影响。方法用免疫磁珠法分离人NK细胞并培养,流式细胞术检测所得NK细胞的纯度;流式细胞术检测NK细胞表面KIR2DL4的表达水平和人乳腺癌SK-BR-3细胞表面HLA-G的表达水平;将NK细胞与SK-BR-3细胞共培养,并加入KIR2DL4的阻断抗体,ELISA检测NK细胞分泌γ干扰素(IFN-γ)的水平,利用流式细胞术检测NK细胞表面CD107a的表达水平,以检测其脱颗粒情况。结果分离得到的人原代NK细胞纯度可达90%以上;共培养实验发现,KIR2DL4的阻断抗体可促进NK细胞分泌IFN-γ,且NK细胞表面CD107a的表达水平也明显提高,提示其脱颗粒能力增强。结论阻断KIR2DL4信号可明显促进NK细胞的杀伤功能,KIR2DL4在NK细胞杀伤靶细胞的过程中发挥抑制性作用。
- 郑国旭李维妙郭张燕席文锦左百乐温伟红杨安钢
- 关键词：自然杀伤(NK)细胞乳腺癌细胞
- Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达及其临床意义被引量：4
- 2014年
- 目的检测Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌组织中的表达情况,并分析Notch1的表达与临床病理特征的相关性。方法利用免疫组织化学染色,Western blot法和实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测肾细胞癌组织及对应的癌旁正常肾组织中Notch1的表达,用qRT-PCR检测Notch下游靶分子Hes1的表达,并用SPSS17.0软件分析Notch1的表达水平与临床病理特征的相关性。结果免疫组织化学染色,Western blot法和qRT-PCR结果均显示Notch1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,qRT-PCR结果显示Hes1在肾细胞癌组织中的表达低于正常肾组织,且Notch1的表达与肿瘤Fuhrman分级和AJCC分期呈负相关。结论 Notch1及其下游靶分子Hes1在肾细胞癌的发生发展过程中可能具有肿瘤抑制基因的作用。
- 魏铭王国栋郑国旭郑甲杨帆史圣甲席文锦杨安钢温伟红秦卫军
- 关键词：肾细胞癌NOTCH1HES1NOTCH通路
- UHRF1通过抑制TXNIP参与肾癌的恶性进展
- 背景：UHRF1(Ubiquitin-like protein containing PHD and RING finger domains 1)是一种多功能核蛋白，它在表观遗传学调控中发挥重要作用。
- 焦点魏铭郑国旭席文锦秦卫军王禾杨安钢温伟红
- 关键词：肾癌表观遗传学
- 环指蛋白2调控前列腺癌细胞增殖和凋亡及其机制研究
- 研究背景:环指蛋白2(Ring finger protein 2,RNF2)是PRC1(Ploycomb repressive complex 1)中具有泛素连接酶作用的重要组成分子。研究表明,RNF2蛋白在多种肿瘤中呈...
- 魏铭郑国旭韩东晖焦点吴介恒杨安钢温伟红秦卫军
- 关键词：前列腺癌凋亡细胞周期
- 文献传递
- 环指蛋白2调控前列腺癌细胞增殖和凋亡及其机制研究
- 研究背景：环指蛋白2(Ring finger protein 2,RNF2)是PRC1(Ploycomb repressive complex 1)中具有泛素连接酶作用的重要组成分子。研究表明,RNF2蛋白在多种肿瘤中呈...
- 魏铭郑国旭韩东晖焦点吴介恒杨安钢温伟红秦卫军
- 关键词：前列腺癌凋亡细胞周期
- 悬浮驯化CHO细胞并用于抗前列腺特异性膜抗原的抗体表达被引量：3
- 2016年
- 目的将贴壁状态的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞驯化成用无血清培养基培养的悬浮CHO细胞(CHO-S),并验证用该悬浮细胞进行抗体表达的可行性。方法将贴壁状态的CHO-S细胞调整为悬浮培养后,再用逐步降低血清含量的方法将其驯化成用无血清培养基悬浮培养的CHO-S细胞。根据从噬菌体抗体库筛选获得的抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)单链抗体的基因序列,人工设计并合成其重链和轻链基因,分别克隆入真核表达载体pc DNA3.1中,所得载体命名为pc DNA3.1-HC和pc DNA3.1-LC。将构建好的2个载体按照轻、重链比例为3∶1的量用Free Style MAX转染试剂瞬时转染CHO-S细胞,转染7 d后收集培养上清,用SDS-PAGE和Western blot法检测抗体表达情况,用流式细胞术检测其与PSMA阳性细胞的结合活性。结果成功将贴壁CHO细胞驯化成悬浮CHO-S细胞,成功构建了表达抗PSMA人源性抗体重链和轻链基因的真核表达载体,并在CHO-S细胞中实现了抗体的分泌表达,流式细胞术检测证实其可特异性结合PSMA阳性前列腺癌细胞。结论成功驯化获得悬浮CHO-S细胞,驯化后的CHO-S细胞可用于抗体的真核表达,为后续抗体的大量表达纯化及功能研究提供了工具。
- 吴介恒韩东晖魏铭郑国旭焦点席文锦杨安钢秦卫军温伟红
- 关键词：CHO细胞抗体表达真核表达转染
- 下调环指蛋白2的表达促进U87脑胶质瘤细胞凋亡并增强其放射敏感性被引量：8
- 2014年
- 目的在U87脑胶质瘤细胞中下调环指蛋白2(RNF2)的表达,观察对U87细胞生长及放射敏感性的影响。方法用含有针对RNF2基因小发夹RNA(shRNA)的表达载体转染U87细胞,利用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法分别在mRNA及蛋白水平验证RNF2的表达下调,用MTT法检测细胞增殖,用annexin V-FITC/PI标记结合流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期情况;经X射线照射后,用流式细胞术检测对照细胞和RNF2表达下调细胞的凋亡情况。结果 2条针对RNF2的shRNA均可有效抑制U87细胞中RNF2的表达。RNF2表达下调后,U87细胞的增殖受到显著抑制,S期细胞明显减少(shRNA-NC:27.31±1.35;shRNF2-1:16.72±2.90;shRNF2-3:10.35±1.33),G1期细胞显著增加(shRNA-NC:56.13±1.80;shRNF2-1:76.32±3.11;shRNF2-3:80.45±2.83),同时出现细胞凋亡。经X线照射后,RNF2下调的细胞凋亡率明显增加(shRNA-NC:20.88±0.64;shRNF2-1:39.69±0.57;shRNF2-3:47.82±0.45)。结论下调RNF2表达可明显抑制细胞生长,并增强U87细胞对放射的敏感性。
- 周春辉杨帆席文锦魏铭郑国旭王微杨安钢张剑宁温伟红
- 关键词：胶质瘤RNA干扰
