许文娟
- 作品数：12 被引量：9H指数：2
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省社会发展攻关项目广东省重点科技攻关项目更多>>
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- 实时荧光定量PCR检测外周血TREC的方法研究被引量：2
- 2006年
- 目的建立及优化检测移植后患者外周血TREC拷贝数的实时荧光定量PCR(FQ-PCR)的方法及实验影响条件,为临床研究造血干细胞移植的免疫功能重建机制提供方法学基础。方法在ABI7000PCR仪上实时扩增检测构建的TREC质粒标准品,摸索最佳扩增条件及建立标准曲线,然后用优化的FQ-PCR方法检测临床样本。结果T3、T4引物和R3、R4引物的扩增效率分别优于T1、T2引物和R1、R2引物。TaqMan-MGB探针比普通的TaqMan探针扩增效率高。金牌热启动Taq酶,比较普通Taq酶而言,提高了PCR的特异性和敏感性。FQ-PCR的反应条件设定:95℃10min后95℃5s,53℃30s,40循环结束。结论通过摸索与优化实验条件,建立了实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中TREC的方法。
- 阴继霞武大林许文娟孙竞
- 关键词：实时荧光定量PCR造血干细胞移植
- RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA
- ＜正＞目的各种类型白血病均可出现WT1基因异常高表达,且与临床预后相关,WT1基因过度表达可作为“泛白血病”的分子标志应用于白血病微小残留病（MRD）的检测。准确定量检测白血病患者的WT1基因表达水平对于指导临床判断预后...
- 徐兵许文娟李冰
- 文献传递
- 应用实时荧光定量PCR检测造血干细胞移植后患者外周血TREC的水平
- ＜正＞目的为了解移植之后患者的胸腺再生输出功能与相关的免疫功能重建机制,建立了实时荧光定量PCR检测移植后患者外周血TREC拷贝数的方法。方法以TREC标准品为阳性对照, 看家基因RAG2作为定量细胞数的参比对照。设计分...
- 阴继霞孙竞许文娟李扬秋
- 文献传递
- 多重实时荧光定量PCR同时检测急性白血病患者WT1和MDR1基因表达水平方法的建立被引量：1
- 2011年
- 目的 构建可同时检测AL患者WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR方法.方法 提取K562细胞的总RNA,并逆转录扩增WT1和MDR1的cDNA,通过Bam H Ⅰ及BglⅡ酶切后连接成WT1和MDR1重组片段,对WT1和MDR1重组片段进行PCR扩增,PCR产物纯化后与pMD18载体进行连接,转化宿主菌DH-5α,构建载有WT1和MDR1基因的标准品重组质粒,用限制性核酸内切酶法和PCR法鉴定质粒.用FAM荧光标记MDR1探针、VIC荧光标记WT1探针,建立能在1个试管中同时检测WT1和MDR1基因表达水平的多重实时荧光定量PCR反应体系.应用该体系检测47例AL患者及32例对照者WT1和MDR1基因表达水平,比较两组之间WT1和MDR1基因表达水平的差异,并随访7例AL患者不同病程中WT1和MDR1基因表达水平的变化与临床预后的关系.结果 经EcoR1酶切及PCR法证实WT1和MDR1基因重组质粒已成功构建.所建立多重实时荧光定量PCR方法的灵敏度为102拷贝/μl;所建立标准曲线的R2分别为0.999和0.998.AL患者WT1和MDR1基因的表达水平中位数分别为37 000（163～6 370 000）拷贝/μg RNA和76 200（179～18 000 000）拷贝/μg RNA,显著高于对照组的258（0～643）拷贝/μg RNA和333（0～779）拷贝/μg RNA,差异有统计学意义（Z=6.755、6.736,P＜0.01）.对应用相同的诱导和巩固化疗方案治疗的7例AL患者进行随访,3例持续缓解患者中,WT1和MDR1的表达水平在初治时分别为2 170和86 900、1 130和5 860、1 170和586拷贝/μg RNA,治疗后WT1和MDR1的表达水平明显下降,分别为370和560、138和980、150和690拷贝/μg RNA,此3例患者获长期完全缓解.在3例完全缓解后复发患者中,WT1和MDR1表达水平在初治时分别为1 600和11800、24 800和968、48 200和1 100 000拷贝/μg RNA,在化疗获得完全缓解后均降低,但在随后治疗过程中,WT1、MDR1表达量又逐渐升高,分别为20 314和25 660、184 364和31 530、15 680和878 000拷贝/μg RNA,此3例患者最终均出现临床复发.
- 徐兵宋小燕杨柳许文娟黄芬郭绪涛周淑芸
- 关键词：白血病P糖蛋白聚合酶链反应
- 一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA被引量：2
- 2008年
- 目的构建RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因mRNA表达的方法,准确定量检测白血病患者微小残留病,指导临床判断预后和早期预测复发。方法从K562细胞提取的RNA用特异性引物扩增WT1基因,pMD18-T载体克隆法构建荧光定量PCR标准模板,建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法,并对该方法的灵敏度、重复性和稳定性进行检测。结果构建的RT-PCR一步法实时荧光定量PCR方法的灵敏度达10-4水平;以拷贝数为1.0×106~1.0×102cps/ml的标准品,分别进行RT-PCR一步法实时荧光定量PCR扩增后,标准品的Ct值与该标准品模板起始浓度的对数存在线性关系,r值达0.998;管间和批间的变异系数均小于8%。结论所建立RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测WT1基因方法的灵敏度、重复性和特异性好;RT和PCR反应过程一步完成,更简便快捷,减少加样和污染机会,更适合临床检测。
- 许文娟徐兵李冰
- 关键词：白血病WT1基因
- 实时荧光定量PCR检测白血病患者WT1基因表达及临床意义被引量：2
- 2007年
- 目的研究白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系。方法建立实时荧光定量PCR检测WT1基因表达技术,并分析65例白血病患者WT1基因的表达水平及与临床预后的关系。结果建立的实时荧光定量PCR方法的标准曲线相关系数>0.99。急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者WT1基因表达水平较正常对照组均显著升高(P=0.001)。慢性髓性白血病(CML)急变期患者WT1基因表达水平显著高于慢性期。WT1表达量与急性白血病发病时外周血白细胞计数、血红蛋白、血小板无明显相关关系。AML和ALL患者中WT1基因高表达患者与低表达病例CR率差异无显著性。急性白血病患者治疗缓解后WT1的表达量较治疗前显著下降(P=0.032)。随访显示WT1持续高表达或下降后又上升的患者呈现难治及复发。结论实时荧光定量PCR技术检测急性白血病患者WT1基因表达量可预测难治复发及用于MRD的检测。
- 李琳徐兵许文娟唐家宏
- 关键词：WT1基因急性白血病实时荧光定量PCRPCR检测
- RT-PCR一步法实时荧光定量PCR检测白血病WT1基因mRNA
- 目的:各种类型白血病均可出现WT1基因异常高表达,且与临床预后相关,WT1基因过度表达可作为“泛白血病”的分子标志应用于白血病微小残留病(MRD)的检测。准确定量检测白血病患者的WT1基因表达水平对于指导临床判断预后和早...
- 徐兵许文娟李冰
- 文献传递
- 联合定量检测急性髓系白血病患者MDR1和WT1基因表达及临床意义被引量：1
- 2008年
- 目的联合定量检测初治急性髓系白血病（AML）患者MDR1及WT1基因的表达水平，探讨MDR1与WT1的表达量在AML耐药中作用及相互关系。方法构建实时荧光定量PCR检测WT1和MDR1基因表达水平技术，并检测63例初治AML患者WT1和MDR1基因的表达量及与临床疗效的关系。结果63例初治AML患者MDR1基因表达（拷贝／μg RNA）的中位数为2863（413—3410000），WT1基因表达为52700（7731—1020000）。10例正常对照组MDR1和WT1基因表达水平为337（125—840）和849（635—1402）。初治AML患者MDR1和WT1基因表达水平均显著高于正常对照组（P〈0．001）。且MDR1与WT1基因表达水平呈相关性（P=0．004）；FAB各亚型中MDR1和WT1基因表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；遗传学危险度分级的高、中、低危3组的WT1和MDR1基因表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。FLT3-ITD突变阳性组MDR1基因表达水平与突变阴性组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。FLT3-ITD突变阳性组的WT1基因表达水平显著高于阴性组（P〈0．05）。AML患者中WT1和MDR1基因共同高表达组完全缓解率显著低于共同低表达组（P〈0．05）。结论AML患者MDR1和WT1基因表达水平存在相关性；联合检测AML患者MDR1和WT1基因表达量更能早期预测预后。
- 徐兵宋小燕李琳许文娟唐家宏
- 关键词：白血病聚合酶链反应
- 应用实时荧光定量PCR检测造血干细胞移植后患者外周血TREC的水平
- 目的:为了解移植之后患者的胸腺再生输出功能与相关的免疫功能重建机制,建立了实时荧光定量PCR检测移植后患者外周血TREC拷贝数的方法。方法:以TREC标准品为阳性对照,看家基因RAG2作为定量细胞数的参比对照。设计分别特...
- 阴继霞孙竞许文娟李扬秋
- 文献传递
- 同时检测WT1和mdr1基因多重荧光实时定量PCR标准品的构建
- 2007年
- 绝大多数急性白血病患者存在WT1基因异常高表达，其异常表达程度也与难治复发白血病有关，并可作为“泛白血病”标志检测指标监测微量残留病（MRD）”。最近有研究发现急性白血病mdr1和WT1基因表达水平有明显的相关性，但目前国内外研究一般是分别对WT1和mdr1基因进行单独检测，操作繁琐且不能准确了解同一标本两者的关系。多重荧光实时定量PCR是指在PCR体系中加入多个荧光基团，设计不同的引物在同一反应体系中同时对多个靶基因分子进行扩增，通过连续监测不同荧光信号强度的变化来实时监测不同待测基因的表达量，最后通过标准曲线对不同未知起始模板进行定量分析的方法。
- 宋小燕徐兵许文娟
- 关键词：荧光实时定量PCRMDR1基因WT1急性白血病患者标准品
