袁清安
- 作品数：19 被引量：50H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 恶性疟原虫无性期疫苗研究及进展被引量：1
- 1996年
- 疟疾是威胁人类健康和生命的主要寄生虫疾病之一。近年来在世界上尤其是落后及发展中国家有卷土重来之势。恶性疟原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）是这类寄生虫中危害最大的病原体。它感染力强，增殖迅速，症状严重，初次感染者致死率高，是医务工作者和疫苗研究人员的主要征服目标［１］。世界各地的科技工作者为此付出了不懈的努力。本文拟对近几年来恶性疟原虫疫苗的研究作一综述。
- 袁清安
- 关键词：恶性疟原虫疫苗
- 肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的克隆与表达被引量：1
- 1998年
- 为探讨肝癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因的表达策略并比较二者的结合能力,在3种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究;对复性后的单链抗体以抗原捕获ELISA法进行检测。结果表明,在3种载体中表达的鼠源及人源化单链抗体都是包含体,诱导物浓度及培养温度不影响表达形式;抗原捕获细胞ELISA表明人源化的单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是:在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDRs的天然构象,表达的人源化单链抗体提供了免疫原性评价及临床应用的基础。
- 袁清安俞炜源黄翠芬
- 关键词：人源化单链抗体肝癌
- 抗人血管内皮生长因子单链抗体基因的构建、表达及活性鉴定被引量：1
- 1998年
- 鼠单克隆抗体E11能与人血管内皮生长因子(VEGF)特异结合,已用于临床检测恶性肿瘤细胞VEGF的表达,并初步证明其体内抑瘤活性。为便于大规模生产,特进行基因工程改造,构建小分子的单链抗体(scFv)。首先通过逆转录及多聚酶链式反应(PCR),分离并克隆E11的可变区基因。经测序表明,E11轻链可变区(VL)基因全长333bp,编码111个氨基酸,归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。重链可变区VH基因全长369bp,编码123个氨基酸,归属小鼠重链可变区基因Ⅱ(A)亚组。然后用一编码亲水性多肽接头的DNA片断将E11单抗轻、重链可变区基因连接,构建表达质粒pET-15YV,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。表达产物(包含体)经变性及复性后,用免疫组化法检测该单链抗体结合抗原(颊癌)能力。对颊癌组织检测的结果表明,基因工程抗体scFv与亲代抗体一样,具有较高的组织特异性。本研究获得的抗人VEGF单链抗体具有潜在的临床价值,为肿瘤放射免疫显像及以血管为靶标的抗血管生成治疗奠定了基础。
- 杨西川王大章郑光勇袁清安俞炜源
- 关键词：VEGF单链抗体基因表达
- 抗肝癌单链抗体的活性检测被引量：7
- 1999年
- 将抗肝癌单克隆抗体 ＨＡｂ２５的轻、重链可变区基因通过Ｌｉｎｋｅｒ连接起来，构建成抗肝癌单链抗体ｓｃＦｖ２５，然后亚克隆入含 Ｅ－ｔａｇ检测标签的 ｐＥＴ１５ｂ表达载体进行融合表达。表达产物（ｓｃＦｖ２５－Ｅ－ｔａｇ）采用 ＳＡＢＣ法对肝癌细胞涂片进行染色，利用鼠抗Ｅ－ｔａｇ抗体间接检测初步纯化的ｓｃＦｖ２５的活性，同时采用竞争结合实验检测ｓｃＦｖ２５的亲和活性。ｓｃＦｖ２５能够与靶细胞特异性结合，阳性部位主要定位于细胞膜上；ｓｃＦｖ２５可封闭５３％的亲本抗体的亲和活性。ｓｃＦｖ２５较好地保持了亲本抗体的特异性和亲和活性。
- 孙志伟刘彦仿袁清安俞炜源黄翠芬
- 关键词：肝细胞肝癌单克隆抗体单链抗体
- 鼠单克隆抗体人源化被引量：5
- 1997年
- 鼠源性单克隆抗体应用于临床由于ＨＡＭＡ反应的存在而受到阻碍。以ＣＤＲ移植为核心，以同源分析及分子模建为辅助设计的人源化方案，已成为克服ＨＡＭＡ反应的主要手段。
- 袁清安俞炜源黄翠芬
- 关键词：人源化HAMA单克隆抗体
- 小鼠单克隆抗体HAb25可变区的人源化计算机辅助设计被引量：5
- 1999年
- 目的：对一株肝癌特异性小鼠单克隆抗体ＨＡｂ２５可变区进行人源化设计，通过人源化降低其免疫原性。方法：进行抗体结构同源模建，以计算机分析为主要手段，结合多重序列比较，进行人源化设计。结果：预测了ＨＡｂ２５可变区的立体结构，分析了决定抗体互补决定区初始构象的可能残基，提出了ＨＡｂ２５可变区的人源化替代方案。
- 袁清安王国力俞炜源黄翠芬
- 关键词：人源化CAD肝细胞瘤单克隆抗体
- 恶性疟原虫多抗原表位基因的融合与表达被引量：3
- 1996年
- 以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）基因为载体，构建了含不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ／ＡＴＥ和ＣＴＢ／ＡＷＴＥ。前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外，还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位；后者在此基础上将我国发现的Ｂ细胞表位ＮＫＮＤＤ基因经８次串联后融合其中。两种形式的融合基因经测序正确后转入大肠杆菌ＴＫ１０４６中，产量分别为１０ｍｇ／Ｌ及５ｍｇ／Ｌ。表达产物ＣＴＢ／ＡＷＴＥ经亲和层析纯化双抗夹心ＥＬＩＳＡ测定表明，该融合蛋白在保留了与抗ＣＴＢ抗体结合的同时，与抗ＮＫＮＤＤ单抗的结合效价达１：８０００。
- 袁清安石成华曹诚张京生马清钧
- 关键词：恶性疟原虫抗原表位融合基因抗原性
- 肿瘤疫苗研究进展被引量：2
- 1996年
- 根据经典的免疫学理论,将致病原(全细胞或抗原分子)免疫机体就能调动机体的特异免疫识别和免疫保护。瘤苗主动免疫是以肿瘤细胞、相关抗原、肿瘤特异抗原或模拟抗原、抗原编码基因免疫机体使之产生针对肿瘤细胞的主动性特异性免疫治疗策略。本文综述了以上不同层次的肿瘤疫苗在近年的研制进展。
- 袁清安黄翠芬
- 关键词：肿瘤疫苗相关抗原特异抗原模拟抗原
- 肝癌特异性鼠源及人源化单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：21
- 2000年
- 为探讨一株肝细胞癌特异性鼠源及其人源化单链抗体基因在大肠杆菌中的可溶性表达策略并比较二者对抗原的结合能力,在三种载体中分别以融合、分泌及胞内表达的方式进行了研究,表达产物均以包涵体形式存在;对复性后的单链抗体以细胞ELISA及竞争抑制流式细胞仪法进行检测,表明人源化单链抗体和鼠源单链抗体有相近的抗原结合能力。结论是:在大肠杆菌中表达的基因工程单链抗体的可溶性可能主要由自身氨基酸一级序列决定;先前的设计所采取的人源化方案没有影响到鼠源抗体的CDR的天然构象。
- 袁清安俞炜源黄翠芬
- 关键词：单链抗体肝癌大肠杆菌可溶性表达
- 鼠源单克隆抗体HAb25可变区的CDR-移植法人源化计算机辅助设计被引量：1
- 1997年
- 目前鼠源抗体人源化是克服其免疫原性的主要手段。在结构模建基础上的计算机分析为抗体人源化设计提供了必不可少的辅助。本设计首先对肝细胞癌特异性抗体HAb25可变区进行了同源模建,然后分析决定CDR初始构象的可能残基,包括正则结构关键残基、CDR可接触残基、界面残基、包埋残基,以及与免疫识别密切相关的表面残基,综合考虑并结合多重序列比较,参照人源化模板,提出了人源化替代的方案。
- 袁清安王国力俞炜源黄翠芬
- 关键词：人源化同源模建肝细胞癌
