袁勇
- 作品数：20 被引量：75H指数：5
- 供职机构：北京医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划四川省教育厅科学研究项目四川省青年科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 枸橼酸酐对原核表达重组GM－CSF的修饰作用被引量：1
- 1996年
- 根据枸橼酸酐对蛋白质中的游离氨基进行化学修饰后可使蛋白质溶解度提高的原理，以大肠杆菌表达的人重组ＧＭ－ＣＳＦ为模型，研究了枸橼酸酐修饰对含凝血酶识别位点的融合蛋白的作用，发现用微量枸橼酸酐修饰的重组ＧＭ－ＣＳＦ变性、复性更容易，溶解度明显提高，并对凝血酶的消化更为敏感，使凝血酶用量降低１００倍．ＧＭ－ＣＳＦ活性测定结果证明枸橼酸酐修饰不影响其生物学活性．这些结果为枸橼酸酐修饰法在大肠杆菌表达重组蛋白纯化中的应用提供了新途径．
- 冯丹袁勇张颖妹冯岚范慧狄春辉宋泉声马大龙
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子GM-CSF
- 起始密码下游序列与16srRNA3′端序列的匹配性对基因表达效率的影响被引量：2
- 2000年
- 目的 :研究起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配关系对基因表达效率的影响。方法 :我们一方面对人IL_2、人IL_8、人IL_6 ,人GM_CSF、人G_CSF、人IL_1ra、人IL_9等全长cDNA序列及 5′末端局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列进行匹配性进行分析 ,寻找序列匹配性与表达效率间的关系 ;另一方面 ,对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′端序列进行沉默突变 ,增强其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列间的匹配性 ,并克隆入pKpL4表达型质粒载体 ,通过大肠杆菌进行表达 ,实验验证序列匹配性与基因表达效率的关系。结果 :分析发现起始密码下游局部序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482核酸匹配性越好 ,则目的蛋白表达效率越高 ;目的基因编码区内与 16srRNA 3′ +146 9——— +1482间的最大匹配区域越靠近 5′末端 ,目的蛋白表达效率越高。通过对人IL_6、人GM_CSFcDNA 5′末端序列进行沉默突变 ,改善其与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482序列的匹配性后 ,目的蛋白的表达量均呈不同程度地提高。结论 :提高起始密码下游序列与 16srRNA 3′端 +146 9——— +1482局部序列间的匹配性 ,可增强目的基因的表达效率。
- 敬保迁袁勇
- 关键词：目的基因基因表达
- 狼疮性肾炎患者肾脏组织中白介素10 mRNA的表达被引量：1
- 1997年
- 我们对9例狼疮性肾炎患者的肾穿刺标本及4例正常人对照的肾组织标本进行了原位杂交检测,以探讨白介素10(IL-10)在狼疮性肾炎患者肾组织中的表达及其可能的致病作用。一、资料和方法 (一)检测对象:9例狼疮性肾炎患者均为女性,年龄20～45岁,平均年龄32.2岁,为我院1995年SLE专科病房患者,均符合美国风湿病学会1982年修订的诊断标准,均为刚入院患者。肾穿刺标本均经北京医科大学病理系确诊为狼疮性肾炎。正常人对照组4例,男2例(外伤肾摘除1例,外伤死亡肾穿刺1例);女2例(车祸死亡肾穿刺1例,脑出血死亡肾穿刺1例),取材均得到家属同意,经免疫荧光及普通病理检查未发现异常改变,无肾脏病史。
- 杨高云姜学义袁勇李世荫梁建平马大龙
- 关键词：肾组织白细胞介素10
- 提高人重组IL-6在真核细胞中表达的新途径被引量：3
- 1996年
- 为提高IL-6在真核系统中的表达效率,我们在构建真核表达载体pcDNA3IL-6的基础上,用表达载体pCI中的CMV启动子和下游所带的β-球蛋白的第一个内含子,置换了pcDNA3中的CMV启动子,构建了一种新的表达载体,使IL-6的表达水平提高了7.5倍。此外,我们还研究了pAdVAntage共转染对IL-6表达的影响,使之表达水平提高了3.6倍。以上结果为细胞因子在真核系统中的高效表达提供了有益的经验。
- 刘红涛袁勇张颖妹王应狄春辉马大龙
- 关键词：真核细胞基因转染细胞因子
- 腺病毒和腺伴随病毒基因元件提高白细胞介素6在真核细胞中的表达效率
- 1998年
- 目的：构建高效真核表达载体以提高细胞因子在真核细胞中的表达效率。方法：利用基因克隆技术构建了两个新的白细胞介素６（ＩＬ６）真核表达载体ｐＡｄＣＩＩＬ６和ｐ３３５ＣＩＬ６。将它们瞬时转染ＣＯＳ７细胞后，利用ＩＬ６依赖株７ＴＤ１对上清中的ＩＬ６进行检测。结果：两种新建载体分别能提高ＩＬ６在真核细胞中的表达效率５．５和３．４倍。结论：腺病毒的病毒相关Ⅰ和ⅡＲＮＡ（ｖｉｒｕｓａｓｏｃｉａｔｅｄⅠａｎｄⅡＲＮＡ，ＶＡⅠａｎｄＶＡⅡ）和腺伴随病毒（ａｄｅｎｏａｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）的倒转末端重复序列（ｉｎｖｅｒｔｅｄｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ。
- 刘红涛袁勇张颖妹狄春辉王应马大龙
- 关键词：白细胞介素6腺病毒分子克隆真核细胞
- IL-2与HBV前S抗原融合蛋白的真核细胞分泌表达被引量：2
- 1998年
- 为使完整的HBV前S抗原 (preSAg)能在真核细胞中分泌表达 ,构建了新型真核表达克隆 ,以人白细胞介素_2 (IL_2 )的前导序列为分泌信号肽 ,在IL_2C端与preS1AgN端之间以高亲水性氨基酸片段相连 .由此构建的质粒转染COS_7细胞能分泌表达IL_2preS融合蛋白 ,其表达效率与表达天然IL_2分子一致 .从而成功地克服了 preS1Ag分泌滞留效应 .这一结果为设计与构建抗HBV持续感染的特异性基因疫苗药物提供了理论与实验基础 ,也为蛋白质分泌表达的调控研究提供了实验依据 .
- 陈章国马大龙王晶张颖妹袁勇韩文玲刘洪涛
- 关键词：基因疫苗前S抗原融合蛋白蛋白疫苗
- Magic/WizardDNA纯化试剂盒的再生利用被引量：1
- 1998年
- ＤＮＡ的提取是分子生物学的常规操作，美国Ｐｒｏｍｅｇａ公司推出的Ｍａｇｉｃ／Ｗｉｚａｒｄ试剂盒大大简化了这一烦琐、费时的工作，但试剂盒一次性使用的价格使多数国内实验室难以承受，摸索出一种简单的试剂盒再利用的方法，使再生试剂盒的纯化效果与原装试剂盒无显著差别，在方便了研究工作的同时也大大降低了实验成本．
- 袁勇宋泉声刘红涛狄春辉王玉刚
- 关键词：DNA提取试剂盒再利用
- 基因治疗的新载体──腺联病毒被引量：2
- 1995年
- 基因治疗将一种全新的概念引入医学界，给现有条件尚难治愈的疾病患者带来一线希望。基因治疗主要是利用病毒介导的基因转移，腺联病毒ＡＡＶ载体，由于其得天独厚的特点，正广泛地用于基因治疗研究。文中简单地介绍了ＡＡＶ的生物学特点、载体结构及其在基因治疗研究中的优越性。
- 袁勇刘红涛
- 关键词：基因治疗腺联病毒包装细胞
- 人重组血管生成素在大肠杆菌的表达与鉴定被引量：5
- 1996年
- 利用ＰＣＲ技术从人肝细胞文库中扩增出血管生成素（Ａｎｇ）的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，在大肠杆菌成功地表达出人重组的Ａｎｇ融合蛋白和Ａｎｇ非融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％，有明显的促进新生血管生成作用和ＲＮＡ酶及Ｌ９２９细胞粘附活性。
- 王露马大龙张颖妹袁勇宋泉声王玉刚李建远
- 关键词：血管生成素大肠杆菌RNA酶
- 人硫氧还蛋白存在不同的选择性剪切形式被引量：7
- 1998年
- 利用RT_PCR技术、基因克隆化和基因表达技术 ,首次在人胎肝细胞中发现了人硫氧还蛋白 (hTRX)的另外一种选择性剪切形式 (hTRXδ3) .经测序证实hTRXδ3缺失正常hTRX第 3外显子的 6 0bp ,无其他编码区域改变 ,其酶活性位点依然存在 .经大肠杆菌表达重组蛋白的活性分析 ,hTRXδ3依赖DTT催化胰岛素还原的活性明显低于完整的hTRX蛋白 .
- 王应王玉刚张颖妹袁勇马大龙
- 关键词：人硫氧还蛋白选择性剪切大肠杆菌
