胡萍
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Twist基因逆转录病毒载体的构建及其诱导正常乳腺上皮细胞发生上皮间质转化被引量：3
- 2013年
- 目的构建Twist基因逆转录病毒载体,研究其对人正常乳腺上皮细胞MCF10A的影响。方法酶切pcDNA3/mycTwist获得myc-Twist,克隆到逆转录病毒载体pBABE-puro中,构建重组质粒pBABE-myc-Twist。通过酶切、测序鉴定Twist基因正确后,在体外将质粒pBABE-myc-Twist和其对照分别与包装质粒pAmpho共同转染人胚肾上皮细胞系293T细胞,进行逆转录病毒的包装,并感染人正常乳腺MCF10A上皮细胞,用嘌呤霉素(puromycin)筛选,获得成功转入Twist的MCF10A-Twist细胞和MCF10A-Vector对照细胞。通过RT-PCR和Western blot法验证Twist细胞在MCF10A-Twist和MCF10A-Vector细胞内的表达。免疫荧光技术和Western blot法检测细胞内上皮间质转化(EMT)标志蛋白的表达。Transwell^(?)法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果重组逆转录病毒载体质粒pBABE-myc-Twist经酶切和测序鉴定构建正确;Twist基因被逆转录病毒成功导入MCF10A细胞,并在靶细胞内稳定表达,RT-PCR检测到Twist mRNA在MCF10A-Twist细胞中表达,Western blot法检测发现myc-Twist蛋白在MCF10A-Twist细胞中表达;免疫荧光和Western blot法检测显示在MCF10A-Twist细胞中E-cadherin表达显著下调、vimentin表达明显上调;与MCF10A-Vector细胞相比,Transwell^(?)法检测发现MCF10A-Twist细胞迁移和侵袭能力明显增加(P<0.01)。结论 Twist诱导MCF10A细胞发生EMT转化,并促进其迁移和侵袭。
- 杨佳佳胡萍周明莉黄杰涛柳满然
- 关键词：TWIST逆转录病毒
- 转录因子Twist基因慢病毒质粒构建及其促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化被引量：4
- 2014年
- 目的 :构建转录因子Twist基因的慢病毒质粒,其高表达促进乳腺肿瘤上皮细胞MCF-7上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)。方法 :pcDNA3/myc-tagged-Twist质粒扩增并亚克隆至载体pLVX-puro中构建成pLVX-puromyc-tagged-Twist慢病毒质粒。将其转染人胚肾细胞HEK293T,收取病毒上清感染乳腺癌MCF-7细胞。免疫荧光法和蛋白质印迹法(Western blot)检测转录因子Twist蛋白、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志蛋白波形蛋白(Vimentin)的表达。Transwell法检测细胞侵袭能力。结果:pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒酶切及测序结果完全正确;相对于对照细胞(MCF-7-Vector细胞),转染Twist基因的MCF-7细胞(MCF-7-Twist细胞)Twist蛋白、间质标志蛋白Vimentin表达水平明显升高,上皮标志蛋白E-cadherin表达水平明显降低(P<0.05),侵袭能力显著增强(P<0.05)。结论:pLVX-puro-myc-tagged-Twist慢病毒质粒构建成功,转录因子Twist通过MCF-7细胞上皮间质转化促进了乳腺肿瘤侵袭能力增强。
- 胡萍杨佳佳黄翼曾宗跃唐曦黄杰涛柳满然
- 关键词：TWIST慢病毒MCF-7上皮间质转化
- 微博微信对青少年在外就餐行为影响及干预研究
- 背景：随着经济的发展和人民收入水平的提高，各国居民在外就餐频率持续增长。长期在外就餐往往比在家就餐摄入更多的能量、脂肪和碳水化合物，从而造成膳食质量较差，被认为是导致人们超重与肥胖的主要饮食因素之一。WHO报道显示，全球...
- 胡萍
- 关键词：青少年营养在外就餐膳食结构医学统计
- 乳腺癌相关成纤维细胞miRNA表达的检测和分析被引量：7
- 2014年
- 目的研究人乳腺癌微环境癌相关成纤维细胞(CAF)与正常成纤维细胞(NF)miRNA表达的差异及其对CAF的生物学功能的影响。方法运用1型胶原酶消化法分别处理临床乳腺癌患者的癌组织和对应癌旁组织标本,原代分离培养CAF和NF细胞;利用免疫荧光法和Western blot法分析CAF和NF细胞成纤维细胞分泌蛋白(FSP)的表达情况,对所分离培养的细胞进行纯度和特性鉴定;利用TranswellTM实验比较CAF与NF细胞的侵袭能力;利用miRNA芯片和芯片结果显著性差异(SAM)分析法分析CAF与NF细胞miRNA表达的差异;对差异miR-205和miR-221,在原代培养的CAF和NF进行实时定量PCR(qRT-PCR)验证;利用多种生物信息学软件预测差异miRNA的靶基因;利用DAVID软件对靶基因进行信号通路富集度分析。利用ELISA检测TGF-β和IL-6信号通路的核心蛋白基质金属蛋白酶1(MMP-1)、MMP-2和MMP-9的表达差异。结果成功分离得到原代培养的CAF与NF细胞,纯度大于95%;与NF细胞相比,CAF细胞的侵袭能力明显增强;miRNA芯片分析结果显示,CAF有10个变化倍数>1.5的异常表达miRNA(P<0.05),其中3个上调表达(miR-221-5p、miR-31-3p、miR-221-3p),7个下调表达(miR-205、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-101、miR-342-3p、let-7g)。信号通路富集度分析发现,miRNA靶基因与细胞分化、细胞黏附、细胞迁移、细胞增殖、细胞分泌和细胞间相互作用等密切相关,其中,异常表达的miR-200b/c和miR-141等miRNA通过抑制其靶基因,影响TGF-β信号通路、IL-6信号通路,进而影响CAF的侵袭和转移。结论人乳腺癌微环境CAF的miRNA表达谱发生显著变化,CAF细胞中异常表达miRNA可能参与了NF向CAF的转化,并与CAF细胞的增殖、黏附、侵袭、转移有密切关系。
- 曾宗跃胡萍唐曦张海龙杜艳娥文思阳柳满然
- 关键词：癌相关成纤维细胞乳腺癌肿瘤微环境
- Twist诱导乳腺上皮细胞MCF10A发生上皮间质转化的1ncRNAs表达谱研究
- 目的:研究转录因子Twist诱导乳腺上皮细胞MCF10A发生上皮间质转化后，差异表达的lncRNAs对下游信号通路网络及其乳腺肿瘤的生物学功能的影响。 方法:利用免疫组化法检测正常乳腺组织、原位和浸润乳腺癌组织Twis...
- 胡萍
- 关键词：上皮细胞上皮间质转化生物学功能
