田运娇
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
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- 靶向大鼠gnas基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
- 2010年
- 目的:构建并鉴定靶向大鼠gnas基因的小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体。方法:根据大鼠gnas基因mRNA序列设计并合成3条shRNA特异性寡核苷酸片段,退火形成双链后克隆进入线性化pGenesil-1.1载体,并进行酶切鉴定和测序,同时构建针对大鼠GAPDH基因的阳性对照质粒和不具有基因同源性的非特异性基因的质粒做阴性对照。结果:经酶切和测序鉴定分析,构建的shRNA已成功插入载体,并且与设计序列完全相符。结论:成功构建了靶向大鼠gnas基因的shRNA真核表达载体,为后续研究Gsα蛋白在心力衰竭中作用的体内外实验奠定了基础。
- 田运娇易岂建米青李娅莎
- 关键词：RNA干扰质粒心力衰竭
- Gsα基因干扰对心力衰竭幼鼠心肌钙调节蛋白的作用
- 目的构建Gsα蛋白基因干扰的慢性心衰幼鼠模型,阐明Gsα蛋白变化对心衰幼鼠心肌钙调控蛋白RyR2、FKBP12.6、PLB、SERCA2α的影响,探讨Gsα变化在心衰发生发展中的意义。方法健康雄性4周龄Wistar幼鼠,...
- 田运娇易岂建
- 关键词：钙调控蛋白
- 文献传递
- Nesprin-1在C_2C_(12)肌原细胞系分化过程中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的探讨Nesprin-1在肌细胞分化过程中的作用。方法将C2C12肌原细胞分化成肌小管,采用Western blot和免疫荧光技术检测Nesprin-1蛋白表达水平和亚细胞定位在肌小管分化成熟过程中的改变;同时利用RNA干扰技术抑制Nesprin-1蛋白的表达,观察其对C2C12肌原细胞分化的影响。结果 Nesprin-1各亚型在C2C12肌原细胞系分化过程中表达水平以及在细胞中的定位有明显改变。Nesprin-1 siRNA组与对照组相比,分化前后C2C12细胞中Nesprin-1蛋白表达明显降低,同时分化后肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白(myosin)的表达量以及肌小节的数量比对照组均明显减少(P<0.001)。结论本文证实Nesprin-1了对骨胳肌细胞分化至关重要,不同分子大小Nesprin-1亚型在C2C12肌原细胞分化过程中发挥各自的特殊作用,在该细胞质与细胞核中的也有不同的作用。
- 高放易岂建李晨田运娇王芳洁Catherine M.Shanahan张秋萍
- 关键词：分化RNA干扰
- RNAi选择性下调大鼠心肌细胞上Gsα蛋白的体外实验
- 2010年
- 目的:用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)选择性下调大鼠心肌细胞上乌苷酸结合蛋白(Gs)α亚基(Gs protein alphala subunit,Gsα)的表达,筛选出抑制Gsα蛋白效果最明显的特异短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒。方法:构建3条靶向gnas基因的特异与RNA质粒载体(shRNA1-3),以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体为阴性对照(HK),用脂质体LipofectamineTMLTX&PLUS转染原代培养的大鼠心肌细胞,并设空白对照组,转染后通过半定量RT-PCR和Western blot法检测GsαmRNA和蛋白的表达情况,以内参照三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)进行标化。结果:shRNA1-3均使Gsα的mRNA和蛋白质表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),且shRNA3的抑制效果最显著,阴性对照质粒组与空白对照组Gsα表达差异无统计学意义。结论:利用RNAi技术成功下调了原代培养的心肌细胞中Gsα的表达,并筛选出沉默效果最明显的shRNA真核表达质粒,为心肌细胞的转染提供了可行的方法。
- 田运娇易岂建米青刘官信李娅莎
- 关键词：心肌细胞RNA干扰
- Gsα基因干扰对心力衰竭幼鼠心肌钙调控蛋白的作用研究
- 研究背景:正常情况下,交感神经递质激活β-肾上腺素能受体(p-adrenoreceptor,β-AR)后,后者与Gs蛋白结合,Gs蛋白异源三聚体a、βγ解离,Gsa活化,β-AR-Gs蛋白-cAMP信号通路激活,引起L型...
- 田运娇
- 关键词：钙调控蛋白基因干扰肾上腺素能受体
- 文献传递
- Nesprin-1对小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的影响
- 2012年
- 目的探讨nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的作用。方法采用悬滴-悬浮-贴壁三步法,5-氮杂胞苷(5-aza)与丹参共同诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞,用Western blot与免疫荧光技术检测nesprin-1蛋白表达水平和在分化成熟过程中的改变。同时利用RNA干扰(RNAi)技术抑制nesprin-1蛋白的表达:Ⅰ组(RNA干扰目的序列AAAGCCAAGCACGCAACTA),Ⅱ组(RNA干扰目的序列GGGAACCAACAGTGAGATT),Ⅲ组(RNA干扰目的序列ACCAGGACATTGCGTACTA),对照组(使用无意义的ShRNA干扰序列),观察对胚胎干细胞分化的影响。结果 Nesprin-1各亚型在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达水平有所变化。RNAi后,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组心肌细胞分化率分别为(17.78±1.92)%、(36.67±3.34)%、(44.42±5.08)%和(77.78±1.92)%,各干扰组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),且各干扰组分化后心肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白(myosin)的表达量减少。结论 Nesprin-1在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中发挥重要作用,不同分子大小的nesprin-1亚型在此分化过程中可能有着不同的功能。
- 高放易岂建田运娇王芳洁刘官信
- 关键词：胚胎干细胞分化心肌细胞RNA干扰
