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黄滨滨: 作品数：16 被引量：37H指数：4; 供职机构：同济大学附属同济医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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贝伐单抗联合化疗药物诱导白血病细胞株凋亡的实验研究被引量：4: 2009年; 目的探讨以血管内皮生长因子（VEGF）为靶点联合贝伐单抗（Bevacizumab，商品名：阿瓦斯丁，Avastin）和化疗药物诱导多种白血病细胞株凋亡的可行性，研究体外应用VEGF、贝伐单抗和化疗药物Ara-C对白血病细胞株增生、凋亡以及细胞周期的影响。方法应用不同浓度药物作用于体外培养的白血病细胞，CCK-8法检测细胞增生抑制率，流式细胞术（FCM）检测VEGF和贝伐单抗以及联合应用化疗药物后细胞周期和细胞凋亡的变化。结果VEGF可刺激多种细胞株增生，以U937细胞增生最明显，呈明显的量效关系；FCM检测细胞周期显示VEGF作用组S期细胞较对照组明显增多，而贝伐单抗作用组S期细胞减少；FCM检测显示经VEGF作用组细胞凋亡率较对照组细胞减少，而贝伐单抗作用组细胞凋亡率较对照组增加，但二者与对照组相比差异无统计学意义（P〉0．05），联合应用贝伐单抗和Ara-C 48h后，细胞凋亡率较单用Ara-C组明显升高（P〈0．05），联合VEGF、Ara-C组作用48h后，细胞凋亡率较Ara-C组降低（P〈0．05），同时联合应用VEGF、贝伐单抗和Ara-C组细胞凋亡率与Ara-C组差异无统计学意义（P〉0．05）。结论VEGF可明显刺激部分白血病细胞增长，抵抗化疗药物诱导的凋亡作用，贝伐单抗可通过中和VEGF而在一定程度上抑制细胞的增生，提高白血病细胞对化疗药物的敏感性。; 陈敬德韩颖郑伟萍黄滨滨薄兰君付建非熊红梁爱斌; 关键词：白血病细胞株细胞增生贝伐单抗

SOCS超甲基化与经典型慢性骨髓增殖性肿瘤的研究被引量：1: 2011年; 目的探讨细胞因子信号转导抑制蛋白（suppressor of cytokine signaling，SOCS）基因超甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤（MPD）中的临床作用及其机制。方法采用甲基化特异性PCR方法检测SOCS1、2、3基因CpG岛甲基化发生情况，直接测序法检测100例MPD患者JAK2V617F突变情况，用实时定量PCR方法检测SOCS1、2、3的mRNA表达情况。结果100例MPD患者中有27例（27％）存在SOCS1基因超甲基化，9例（9％）存在SOCS2基因超甲基化，34例（34％）存在SOCS3基因超甲基化。在100例MPN患者中，64例（64％）JAK2V617F突变阳性。MPD患者中SOCS1和SOCS3基因超甲基化组与未甲基化组相比，其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少（P〈0．05）；SOCS1和SOCS3基因JAK2V617F突变组与野生型组相比，其SOCS1和SOCS3基因mRNA表达量明显减少（P〈0．05）。结论MPD患者中存在JAK2V617F突变及SOCS基因超甲基化，且JAK2V617F突变和SOCS基因甲基化导致SOCSmRNA表达水平降低，SOCS超甲基化和JAK2V617F突变可改变JAK—STAT信号通路等的转录活性而最终影响疾病的发展，这些改变可能代表了一种潜在的治疗方向。; 秦伟李伶理陆惠娜黄滨滨修冰薄兰君高清梅张文君傅建非; 关键词：骨髓增殖性肿瘤聚合酶链反应

IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制: 2012年; 目的探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤（DLBCL）细胞系SUDHL4细胞凋亡的影响及其相关机制。方法用不同浓度IL-21（终浓度1、10、100、1000ng／m1）处理SUDHL4细胞不同时间（24、48、72h），用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率，绘制细胞增殖抑制曲线，计算IC50值；用流式细胞术检测细胞凋亡；用Westernblot法检测IL-21处理后SUDHL-d细胞caspase-9、caspase-3、cleavedcaspase-3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达。用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Sur-vivin基因mRNA表达。结果IL-21可明显抑制SUDHL4细胞增殖，且呈时间-剂量依赖性，其48h半数抑制浓度（IC50）为140．9ng／ml。流式细胞术分析发现100ng／mlIL-21处理的SUDHL-4细胞48h凋亡率（AnnexinV-FITC^＋细胞率）明显增加[（19．7±2．3）％]，同时caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低，均呈时间依赖性。cleavedcaspase-3从48h开始出现明显的剪切带；Bax和c-myc蛋白表达明显增高，而Bid蛋白表达变化不明显。RT-PCR检测显示IL-21上调c-myc和Bax基因mRNA的表达，下调Bcl-2和Bcl-XL基因mRNA的表达，Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显。结论IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现。; 梁伟张文君高青梅秦伟陆惠娜黄滨滨修冰梁爱斌; 关键词：白细胞介素21 细胞凋亡

构建shRNA慢病毒载体抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达被引量：3: 2010年; 目的构建针对血管内皮生长因子受体1(vascular endothelial growth factor receptor 1,VEGFR-1)基因的siRNA前体表达载体,鉴定其对U937细胞株VEGFR-1基因干扰效率。方法体外设计并合成针对VEGFR-1基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将慢病毒颗粒以最适滴度转染人单核白血病细胞株U937,应用Real-Time PCR、Western印迹法检测抑制效率。结果构建的慢病毒载体的序列通过PCR、测序等鉴定,与设计序列相同。Real-Time PCR检测显示U937细胞干扰组VEGFR-1 mRNA表达率下降75.98%,Western印迹法显示U937细胞干扰组VEGFR-1蛋白表达量较空白载体对照组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制U937细胞株VEGFR-1基因的表达。; 修冰陈敬德黄滨滨陆惠娜秦伟梁爱斌; 关键词：血管内皮生长因子受体1 RNA干扰慢病毒 U937细胞系

低氧对Jurkat细胞低氧诱导因子-1α及其类泛素化的影响及意义被引量：3: 2010年; 目的探讨低氧条件下Jurkat细胞低氧诱导因子-1α（HIF-1α）类泛素化的变化对其基因转录活性和蛋白稳定性的影响,以及对下游靶基因转录活性调控的影响和意义.方法氯化钴（CoCl2）化学缺氧法模拟肿瘤缺氧不同时间,分别用荧光定量PCR、Western blot法检测HIF-1α基因及蛋白稳定性的变化,类泛素-1（SUMO-1）、类泛素蛋酶-1（SENP-1）蛋白水平的表达,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1和survivin等基因转录活性的变化.结果在缺氧诱导4、8、16、48、72 h后,HIF-1α基因转录活性分别为缺氧诱导前的（0.79 ±0.19）、（2.65±2.05）、（4.19±4.72）、（2.77±3.37）、（0.09±0.05）、（0.69±0.55）倍（P〉0.01）,而蛋白稳定性逐渐增高后减低（P〈0.01）.SEN-1蛋白的表达与SUMO-1蛋白表达呈相反趋势,前者逐渐增高后减低,而后者逐渐减低后增高（P〈0.01）.除survivin 基因外,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1基因转录水平与HIF-1α蛋白稳定性相平行.结论缺氧引起SENP-1表达变化,通过减低HIF-1α蛋白类泛素化作用而影响HIF-1α稳定性,从而改变下游VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1等基因的转录活性而最终影响细胞牛物学过程.; 黄滨滨修冰陆惠娜秦伟梁爱斌; 关键词：低氧诱导因子-1Α 靶基因 JURKAT细胞

2种CCK-8试剂最佳实验条件比较被引量：5: 2012年; 在细胞学实验中，MTT（噻唑蓝）比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点，而被广泛使用，但其操作较繁琐，需加入二甲基亚砜（DMSO）溶解甲腆颗粒，且往往因溶解不全而对实验结果造成影响，为克服MTT法的不足，近年来出现了另外一些检测试剂，如XTr试剂、MTS试剂，国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8（cellcountingkit-8），其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性，; 梁伟高青梅张文君秦伟陆惠娜黄滨滨梁爱斌; 关键词：CCK-8 细胞活性试剂比较

低氧诱导因子-1类泛素化修饰在血液系统肿瘤中的潜在作用: 2009年; 低氧诱导因子-1（HIF-1）在人体内广泛存在，是氧稳态和缺氧反应调节的一种转录因子，它与血管生成、细胞存活、肿瘤侵袭和耐药形成等多种生理、病理生物学过程相关。HIF-1在肿瘤中的作用现已被广泛研究。而类泛素（Small Ubiquitin—related Modifier）作为翻译后修饰的重要调控因子，是近年基因表达研究的热点之一。; 黄滨滨梁爱斌; 关键词：低氧诱导因子-1 血液系统肿瘤泛素化 UBIQUITIN 生物学过程 HIF-1

胃癌组织中血管内皮生长因子C的表达及其临床意义被引量：7: 2015年; 目的探讨血管内皮生长因子-C(VEGF-C)与其受体-3(VEGFR-3)与胃癌临床病理因素的关系。方法采用免疫组织化学染色,检测20例正常胃组织和98例胃癌组织中VEGF-C表达。结果胃癌组织中VEGF-C阳性表达率为71.4%(70/98),而癌旁组织和正常胃粘膜组织中其阳性表达率为9.2%(9/98)和5.0%(1/20)。98例胃癌组织中VEGF-C表达与患者性别、肿瘤直径大小、肿瘤部位、分化程度、是否存在血管浸润以及浸润深度无显著相关,而与淋巴结转移、淋巴管浸润、远处转移、TNM临床分期显著相关(P<0.05)。结论 VEGF-C及其受体系统是淋巴管生成的重要调节因子,对于胃癌区域淋巴管生成、淋巴转移途径有非常重要的意义。; 葛艳丽张俊杰王志荣黄滨滨; 关键词：胃癌血管内皮生长因子C

白血病细胞株K562中HIF1-α的表达及其对下游基因的影响被引量：2: 2010年; 目的探讨白血病细胞株K562中低氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达的增加对下游靶基因的影响及意义。方法氯化钴(CoCl_2)做化学缺氧诱导剂,加入K562细胞培养基,分别培养0、4、8、16 h。Real-Time RT-PCR及Western印迹法分别检测HIF-1αmRNA和蛋白水平的表达。Real-Time RT-PCR检测不同时间HIF-1α下游靶基因VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2、Caspase-3、Bax等的表达。分析HIF-1α表达的变化对下游基因转录活性的影响和意义。结果随着CoCl_2作用时间的增加,K562细胞HIF-1αmRNA水平表达略有增加,但变化不大(P>0.05),蛋白水平增加明显。下游VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2转录活性增加(P<0.05),而Bax、Caspase-3表达先增加后减少。结论 CoCl_2主要增加K562细胞株HIF-1α蛋白的表达。HIF-1α蛋白使VEGF、MDR1/MDR3、survivin、Bcl-2等促肿瘤存活基因的转录活性增加,而最终减少了Caspase-3、Bax等促肿瘤细胞凋亡基因的表达。因此,HIF-1α可能是调控白血病进展的关键调节因子。; 黄滨滨修冰陆惠娜秦伟熊红梁爱斌; 关键词：K562 多药耐药基因 BAX

细胞信号转导抑制因子1基因超甲基化及去甲基化在经典型骨髓增殖性肿瘤中的作用被引量：3: 2011年; 目的:探讨细胞信号转导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling1,SOCS1)基因超甲基化在经典型慢性骨髓增殖性肿瘤(myelo-proliferative neoplasms,MPNs)中的临床作用及其机制。方法:采用甲基化特异性PCR法检测MPNs患者骨髓标本中SOCS1基因的超甲基化发生情况。应用粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony stimulating factor,G-CSF)化学诱导MPNs细胞生长不同时间后,实时定量PCR和蛋白质印迹法检测SOCS1mRNA及其蛋白表达情况。另外,加入去甲基化试剂2-deoxyazacytidin培养MPNs细胞不同时间后,实时定量PCR法检测SOCS1mRNA表达情况。结果:100例经典型慢性MPNs患者中有27例(27.0%)存在SOCS1基因超甲基化。G-CSF化学诱导处理后的MPNs细胞中,SOCS1基因超甲基化组与未甲基化组相比,其SOCS1mRNA表达量均明显减少(均P<0.05);MPNs患者中SOCS1基因超甲基化组的SOCS1蛋白表达量也减少,但与健康对照组相比差异尚无统计学意义(P>0.05)。另外,相对于G-CSF处理后的超甲基化组,加入去甲基化试剂后SOCS1mRNA表达量明显升高(P<0.05)。结论:MPNs患者中存在SOCS1基因超甲基化,且CpG岛超甲基化导致其基因表达水平降低,去甲基化后,其基因表达水平升高。提示SOCS1基因超甲基化可能和MPNs发病有关,去甲基化可能是一种潜在的治疗MPNs的新策略。; 秦伟陆惠娜黄滨滨修冰薄兰君高清梅张文君梁爱斌; 关键词：骨髓增殖性疾病 DNA甲基化粒细胞集落刺激因子

黄滨滨

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