一种产后疲乏大鼠造模装置及造模方法 本发明公开了一种产后疲乏大鼠造模装置及造模方法,造模装置包括水箱和鼠箱,其内部均设有可移动的活动栅,水箱和鼠箱之间连接一通道,通道与水箱、鼠箱连接处均开设有通孔,通孔处设有活动门;造模时,将幼鼠放置于鼠箱中,将大鼠放置于... 张凤 吴璠 陈阳 柏婷 严淑涵 高倩文献传递 周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因的扩增、克隆及序列分析 被引量:2 2007年 [目的]克隆周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(cysteine protease of periodic Brugiamalayi,BmCP)基因到原核载体中,测定其序列,为进一步的研究奠定基础。[方法]从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,采用RT-PCR法体外扩增出BmCP基因序列,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pMD18-T-BmCP,经测序验证,并进行同源性比较。[结果]RT-PCR扩增出一条约1201bp大小的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GeneBank已知的基因序列同源性为99%。[结论]成功构建了周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶重组质粒pMD18-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。 黄为群 方政 陈阳 姜声扬 吴建军 谢东方关键词:周期型马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶 基因克隆 一种产后疲乏大鼠造模装置及造模方法 本发明公开了一种产后疲乏大鼠造模装置及造模方法,造模装置包括水箱和鼠箱,其内部均设有可移动的活动栅,水箱和鼠箱之间连接一通道,通道与水箱、鼠箱连接处均开设有通孔,通孔处设有活动门;造模时,将幼鼠放置于鼠箱中,将大鼠放置于... 张凤 吴璠 陈阳 柏婷 严淑涵 高倩文献传递 寄生虫副肌球蛋白的分子免疫学研究进展 被引量:4 2005年 副肌球蛋白存在于无脊椎动物,由同源二聚体构成。副肌球蛋白具有多方面的生理作用,是一个重要的显性抗原,具有调节免疫反应的特性。近来,对副肌球蛋白的分子生物学特点和免疫学作用做了较广泛深入的研究。该文将从其分布,作用及分子特征,疫苗的研究,T、B淋巴细胞表位,参与免疫调节等研究进展进行了综述。 陈阳 方政关键词:寄生虫 副肌球蛋白 分子免疫学 免疫调节 基因序列 周期型马来丝虫副肌球蛋白基因克隆、序列分析及编码产物B细胞表位预测 被引量:3 2007年 目的克隆周期型马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因,进行序列测定、分析及编码产物的B细胞表位预测。方法从周期型马来丝虫虫体中抽提总RNA,以mRNA为模板,RT-PCR法体外扩增BmPmy基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆入pGEM-T载体,转化E.coli DH5a,筛选阳性克隆,进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒pGEM-T-BmPmy,经测序验证,并进行同源性比较。应用5种参数和方法对其编码产物进行B细胞表位预测。结果RT-PCR扩增出一条约2640bp的特异性条带,重组质粒双酶切的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与基因库已知的基因序列同源性为99%。经表位预测分析,BmPmy的B细胞表位可能在54~66位、144~152位、770~780位和834~845位氨基酸区域。结论成功构建了BmPmy重组质粒pGEM-T克隆载体,为进一步研究该基因的功能提供了条件。 陈阳 方政 姜声扬 黄为群 谢东方 吴建军 石佑琴关键词:原肌球蛋白 周期型马来丝虫副肌球蛋白基因真核表达重组质粒构建 被引量:4 2007年 提取周期型马来丝虫总RNA。跟据已知的马来丝虫副肌球蛋白(BmPmy)基因序列,设计合成引物,并引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点,应用RT-PCR技术,扩增BmPmy基因片段,克隆至载体pGEM-T中,经PCR和双酶切鉴定后,亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-BmPmy,并转染COS-7细胞后进行RT-PCR分析。转染的COS-7细胞高水平表达周期型马来丝虫副肌球蛋白mRNA,结果与预期相符。 陈阳 方政 黄为群 谢东方 姜声扬 吴建军关键词:周期型马来丝虫 副肌球蛋白 真核表达质粒 COS细胞 周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析 被引量:2 2006年 目的 在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70(HSP70)基因,并对表达产物进行SDS—PAGE分析。方法以重组质粒pGEM—T—HSP70为模板,根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物,用PCR法扩增HSP70基因(包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2198bp),PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中,构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定。将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导GST.Tag融合蛋白的表达。经SDS—PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平。结果重组表达质粒pGEx-4lT-3-HSP70全长约7200bp,经双酶切后应得到长度为4968bp的载体和2198bp的目的基因2个片段,1%琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符。HSP70相对分子质量(Mr)为70×10^3,质粒pGEX-4T-3的融合部分(GST.Tag)表达产物的胁约为26×103,将重组质粒转化BL-21(DE3)菌。经IPTG诱导表达,菌体蛋白的SDS—PAGE图谱显示,诱导组出现特异性蛋白表达条带,其Mr约100×10^3,与预计大小相同。目的蛋白占菌体总蛋白的12%左右。结论 成功地构建了重组原核表达载体pGEX一4T一3-HSP70:周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达,为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础。 方政 吴建军 陈阳 黄为群 姜声扬 石佑琴关键词:周期型马来丝虫 热休克蛋白质70 基因重组 基因表达 周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶基因原核和真核表达质粒的构建 被引量:2 2007年 目的构建我国流行的周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶(BmCP)基因原核和真核表达质粒,为进一步研究奠定基础。方法从周期型马来丝虫虫体中提取总RNA,反转录成cDNA,设计合成引物,以cDNA为模板,通过PCR从cDNA中扩增出目的基因,扩增产物经初步鉴定后将其克隆人pMD18-T载体.进行双酶切及PCR扩增鉴定,获得阳性重组质粒,进行测序分析和同源性比较。阳性克隆的质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+).转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α,筛选阳性克隆,用PCR和双酶切鉴定阳性重组子。结果RT-PCR扩增出1条约1201 bp的特异性条带,重组质粒双酶切和以质粒为模板的PCR结果与预期相符,DNA序列分析与GenBank已知的基因序列同源性为99%。构建了真核重组表达质粒peDNA3.1-BmCP。结论成功构建了周期型BmCP原核和真核重组表达质粒,为进一步研究该基因的功能提供了条件。 方政 黄为群 陈阳 谢东方 姜声扬 吴建军关键词:马来丝虫 半胱氨酸蛋白酶 真核表达 质粒 周期型马来丝虫多基因克隆及真核载体构建与细胞转染的研究 大部分传统的寄生虫疫苗不能阻止寄生虫感染,这主要是由于寄生虫具有免疫逃避能力、生活史复杂、未找到合适抗原、以及免疫机制未阐明等原因造成的。新出现的DNA疫苗再次燃起了人们对疫苗抗寄生虫感染的希望。在过去的十年中,DNA疫... 陈阳关键词:马来丝虫 真核表达 细胞转染 文献传递