郭进军 作品数:45 被引量:195 H指数:9 供职机构: 重庆医科大学附属第二医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 重庆市教育委员会科学技术研究项目 山西省青年科技研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 农业科学 更多>>
一种乙型肝炎病毒转录后调节基序的体外合成方法 2005年 目的探索T7 RNA聚合酶体外转录方法制备乙型肝炎病毒(HBV)转录后调节基序(HPRE)。方法用聚合酶链反应法从含HBV全基因组的模板中扩增HBV HPRE基因,重组入pGEM-11 zf载体,并用T7 RNA聚合酶对其进行体外转录。结果成功地构建含HPRE基因的重组质粒,并成功地用体外转录方法制备了高纯度的HPRE。结论T7 RNA聚合酶体外转录方法可用于制备高纯度的HPRE,为以后的深入研究奠定了基础。 黄英 郭进军 张君 陈维贤 黄爱龙关键词:肝炎病毒 乙型 体外转录 转录后调节 基序 RNA聚合酶 教学查房中以问题为导向教学模式的应用 被引量:9 2014年 以问题为导师向的教学模式(PBL)教学已经应用在医学教学中,某些方面也取得了较好的教学效果。教学查房是医学生临床学习的重要方式之一,是日常临床教学的主要组成部分。将PBL教学应用于日常教学查房是一个提高教学质量的重要手段。在教学查房前进行充分的课程准备以及病例准备是PBL教学查房能够顺利实施的前提。在教学查房中贯彻"提问-回答-再提问-再回答"的循环模式有利于调动学生的积极性与主动性,能够强化知识点的应用,有利于培养学生的临床思维。教学查房后的问卷调查与效果评价是保证教学查房质量持续改进的必要措施。 郭进军关键词:教学查房 PBL教学 HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响 2012年 目的构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究HBx缺失对HBV复制和转录的影响。方法以包含HBV全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0为模板,用定点突变技术构建HBx基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,并酶切和DNA测序鉴定。用SapⅠ单酶切这两种质粒,获得线性的野生型和HBx缺失突变型HBV基因组,经转染试剂PolyJetTMReagent介导分别瞬时转染到HepG2细胞中。在转染后各时间点Western blot检测HBx蛋白的表达,Southern blot和Real-time PCR同时检测细胞质DNA复制和细胞核cccDNA的合成,Real-time PCR分析定量HBV前基因组RNA(pgRNA)的转录。结果在野生组中可检测到HBx蛋白的表达,而在HBx突变组中HBx蛋白的表达低于Western blot的检测范围。两组中各时间点合成的cccDNA水平无统计学差异(P>0.05)。而在转染后96 hHBx突变组中细胞质DNA的复制和pgRNA的转录都分别比野生组减少50%~70%(P<0.05)。结论 HBx缺失虽然不影响细胞核HBV cccDNA的合成,但是它能下调细胞质HBV DNA的复制和pgRNA的转录。 罗莉 何松 郭进军 雷宇 罗娜 龚倩关键词:HBV X蛋白 CCCDNA 定点突变技术 TNF-α基因多态性与慢性乙肝病毒感染的相关性 2014年 慢性乙肝病毒(HBV)感染是一个全球性的卫生问题,但HBV感染的具体机制仍不明确。目前研究证实其主要与病毒本身因素、宿主免疫因素和遗传因素相关。细胞因子在防御病毒感染中发挥重要作用,而肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是宿主防御中的关键细胞因子,对固有免疫和适应性免疫系统有广泛影响。本文通过查阅相关文献,探索TNF-α启动子区域的4个位点(-308,-238,-863,-857)的基因多态性与乙肝感染的相关性。结果表明各个研究结论有所不同,但大多数结果支持TNF-α基因多态性影响人体对HBV的易感性。 张余 郭进军关键词:肿瘤坏死因子-Α 慢性乙肝病毒感染 单核苷酸多态性 RtS246T变异对HBV恩替卡韦敏感性的影响--一种新的HBV体外表型分析策略 胡接力 黄爱龙 崔静 郭进军 张文露 袁作为 李青岭 邓小燕 曾爱中 唐霓一个约30kD膜蛋白作为汉坦病毒候选受体的筛选 2008年 目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76~118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标记汉坦病毒易感细胞Vero E6和非允许细胞CHO的细胞膜蛋白。将在BL21裂解上清中有表达的G2蛋白N端81~140位氨基酸片段(G2N81-140)纯化后与含有生物素标记的Vero E6细胞膜裂解液进行孵育,同时以非允许细胞CHO和无关蛋白GST-TLM做为阴性对照,通过GST Pull-down分离与G2蛋白特异性结合的细胞膜蛋白。结果:一个约30kD的Vero E6细胞膜蛋白与G2N81~140片段之间存在着特异性的相互作用。结论:该30kD蛋白可能是汉坦病毒细胞膜候选受体或受体辅助分子之一,是病毒入侵细胞的一个相关分子。 李青岭 冯涛 郭进军 黄爱龙关键词:GST 阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的耐药性分析 被引量:9 2009年 目的探讨阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎耐药性产生的原因。方法从阿德福韦酯Ⅲ期临床试验中筛选出30例原发治疗失败或继发耐药患者,应用巢式逆转录聚合酶链反应扩增HBVRT区,比对RT区核苷酸及氨基酸序列,找出变异位点。结果30株阿德福韦酯治疗失败者中有21株HBV表现出原发性耐药,其中5株具有多态性位点rtN118H(23.8%,5/21)。另外9株发生继发性耐药,继发耐药毒株在RT保守区(C结构域rtM207V)和非保守区多个区域均有变异。没有发现典型的rtN236T和rtA181V/T突变。结论多态性位点rtN118H与阿德福韦酯原发耐药可能有关。HBVRTC结构域rtM207V变异及其他处于非保守区的变异可能与HBV继发性耐药有关,天然耐药准种的存在可能是HBV对阿德福韦酯迅速耐药(继发性)的基础。上述结论有待进一步表型验证实验加以证实。 曾爱中 卢萍 邓蕙 蔡素芳 杨春 辛小娟 郭进军 李青岭 邓小燕 黄爱龙关键词:阿德福韦酯 慢性乙型肝炎 耐药性分析 全长乙型肝炎病毒基因组的扩增及序列分析 被引量:6 2003年 目的建立一种全长乙型肝炎病毒(HBV)基因组扩增及序列分析的新方法.方法在HBV负链开环缺口处设计引物,使用TaKaRa LA TaqTM DNA聚合酶进行扩增,聚合酶链反应产物克隆后进行全长序列测定.结果用此方法成功获得HBV全基因组DNA序列.将已知序列的HBV全基因组重组质粒作为模板进行敏感性和保真性测定,其敏感性为102个初始模板,核苷酸的人为突变率为1.2 bp/kb.结论此方法可用于大规模HBV全基因组扩增和序列分析,为HBV的基础和临床研究提供了一种新方法. 郭进军 黄爱龙 赵中夫 唐霓 申慧敏关键词:乙型肝炎病毒 聚合酶链反应 基因变异 乙脑病毒核酸诊断方法的建立及应用 被引量:17 2001年 目的 建立一种新的乙脑病毒基因诊断方法 ,并进行大样本检测。方法 使用一步反转录巢式PCR进行乙脑患者血液及脑脊液的病毒核酸检测 ,并与 2 -巯基乙醇耐性试验进行对比检测。结果 2 16例乙脑就诊患者血清的PCR阳性率为 77.8% ,2 -ME阳性率为 4 5 .3 7% ,脑脊液的PCR阳性率为 93 .2 0 % ,2 -ME阳性率为 3 7.3 8% ,有显著性差异。对不同病程日乙脑患者的检测 ,在初期和极期早期PCR的阳性检测率高 ,在极期后期和恢复期 2 -ME的阳性检测率高。结论 PCR法为一种适合于乙脑早期特异性诊断的新型基因诊断技术。 郭进军 张国英 赵中夫 阎小君关键词:乙型脑炎 聚合酶链反应 免疫学 诊断学 核酸 HBx基因缺失突变对HBV复制和转录的影响 目的 构建HBx 基因缺失突变质粒pUC-HBV1.0.X7,研究 HBx 缺失对HBV复制和转录的影响.方法 以包含HBV 全长基因组的野生型质粒pUC-HBV1.0 为模板,用定点突变技术构建HBx 基因缺失突变质粒... 罗莉 何松 郭进军 雷宇 罗娜 龚倩关键词:HBV X CCCDNA 定点突变技术