王莹
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 供职机构：首都医科大学附属北京天坛医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 三明治构型原代大鼠肝细胞培养细胞极性重建及功能的研究
- 2009年
- 目的研究三明治构型培养大鼠原代肝细胞的形态学变化、极性重建过程并对其功能进行测定。方法改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞，三明治构型培养肝细胞，观察肝细胞的形态学变化，测定特异性膜区域蛋白的重新分布，检测白蛋白mRNA及肝细胞功能。结果平均每个鼠肝可获取（2-3）×10^8个肝细胞，活率在93％±3％，纯度在96％±3％。培养6-8h后，肝细胞排列成肝索样结构。3d后，白蛋白mRNA表达明显增强。4d后，DPPIV几乎完全集中在胆小管膜区。5d后，胆小管完全连接成网络。形态维持达49d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境，肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能。
- 王莹张先杰孙家邦宋茂民安威
- 关键词：细胞三明治肝细胞原代培养MRNA
- 三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及功能测定被引量：2
- 2007年
- 目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化,并对其功能进行测定。方法采用改良原位两步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞,台盼蓝拒染实验观察细胞活力,利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞,倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化,定期收集培养细胞上清液,检测所培养肝细胞的分泌及生物转化功能,并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取(2～3)×108个肝细胞,存活率为(93±3)%;体外肝细胞培养第3天,细胞活力、清蛋白分泌功能恢复到最佳状态;三明治构型培养第7天,地西泮24h代谢量达到最高峰。三明治构型培养的肝细胞形成肝索样结构,并逐渐形成胆小管网络;在培养的21d内,清蛋白分泌、地西泮代谢始终维持较高的水平;肝细胞形态维持可达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能。三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究,而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。
- 王莹张先杰宋茂民孙家邦段钟平陈煜乔欣
- 关键词：肝细胞原代培养
- 精索内动静脉高位结扎iNOS的表达与睾丸生精细胞增殖和凋亡的关系
- 2006年
- 目的:探讨精索内动静脉高位结扎术后,诱导型一氧化氮合酶(induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达与生精细胞增殖和凋亡的关系。方法:免疫组化结合计算机图像分析系统检测iNOS阳性细胞光密度值;免疫组化方法检测并计算PCNA增殖指数(PCNA-Labelingindex,PI);原位末端标记法(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnick-endlabelingmethod,TUNEL)检测生精细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI)。分析iNOS的表达与增殖、凋亡的相关性。结果:iNOS在术后3￣15d表达增强,第7d呈强阳性表达。结扎组生精细胞PCNA增殖指数(PI)明显低于对照组(P<0.01),凋亡细胞指数(AI)明显高于对照组(P<0.01)。结论:精索内动静脉高位结扎,iNOS的表达与生精细胞PCNA增殖指数呈负相关,与生精细胞凋亡指数呈正相关。iNOS基因表达增强是生精细胞增殖减少和凋亡增加的重要原因。
- 王莹张先杰宋茂民李有国薛瑞华
- 关键词：高位结扎生精细胞INOSPCNA
- 三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养及生物学特性的研究被引量：5
- 2007年
- 目的观察三明治构型大鼠原代肝细胞长期培养的形态学变化，并对其功能进行测定。方法采用改良原位2步法门静脉胶原酶灌注分离单肝细胞，台盼蓝拒染实验观察细胞活力，利用三明治培养构型培养成年大鼠原代肝细胞，倒置显微镜下连续观察肝细胞的形态学变化，定期收集培养细胞上清液，检测培养肝细胞的分泌及合成功能，并与单层胶原培养肝细胞比较。结果平均每个鼠肝可获取2×10^8～3×10^8个肝细胞，活率在（93±3）％；体外肝细胞培养第3天，清蛋白分泌功能、尿素合成能力恢复到最佳状态。三明治构型培养的肝细胞清蛋白分泌功能、尿素合成能力在培养的14d内始终维持较高的水平，并形成肝索样结构，伴胆小管网络形成，肝细胞形态维持达28d以上。结论三明治构型肝细胞培养体系更接近于肝细胞体内生长环境，肝细胞可在较长时间内保持良好的形态结构和功能，三明治构型不仅可以应用于肝细胞的基础研究，而且为肝细胞移植和生物人工肝治疗肝衰竭奠定了一定的基础。
- 王莹张先杰宋茂民孙家邦段钟平陈煜罗艳侠郭秀花
- 关键词：肝细胞原代培养
