王怡男
- 作品数：6 被引量：10H指数：2
- 供职机构：青岛农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金科技基础性工作专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 犬瘟热病毒疫苗免疫逃逸株的血凝素基因变异研究被引量：3
- 2016年
- 为了弄清是否有新基因型犬瘟热病毒出现,对山东省不同地区的免疫水貂、狐狸和犬进行了犬瘟热病毒检测,扩增了病毒核衣壳基因和血凝素基因（H）,并对13个犬瘟热病毒山东株（8株貂源,2株狐狸源,3株犬源）血凝素基因进行了测序。结果表明,13个犬瘟热病毒山东株之间H基因核苷酸同源性为99.1%~100.0%,均为Asia-1型,这也是我国目前水貂犬瘟热病毒唯一的基因型。与2012年之前的犬瘟热病毒中国分离株及疫苗株相比,13个毒株H基因有4个氨基酸的一致性变异,即P200S、M263I、I542N和Y549H,N-糖基化位点比Onderstepoort株多6或7个,比CDV3株多3或4个。抗原性分析表明,与疫苗株相比,13株山东株在540-549位氨基酸出现一个新的抗原区域,210-230,327-347位的抗原区域也与疫苗株不同,这些变异可能是我国貂狐犬瘟热免疫失败的原因。
- 黄娟隋晓梅王怡男单虎
- 关键词：犬瘟热病毒血凝素基因免疫失败
- 一例典型水貂犬瘟热病例诊断及H基因序列分析被引量：1
- 2013年
- 为了对感染犬瘟热水貂的临床症状、病理特征及H基因突变情况进行全面了解，本试验对一水貂养殖场疑似犬瘟热发病水貂进行了全面诊断和基因序列分析。临床观察水貂眼角出现黏性分泌物，脚垫红肿发胀，精神状态萎靡。剖检病理变化为肺脏严重出血，出现大面积肉样出血变性，胆囊肿大，胆汁呈浓稠深绿色，肾脏肿大，膀胱出现积尿现象，肠系膜出血、脱落。经HE染色发现，组织有明显增多的炎性细胞，局部有出血淤血现象。经胶体金、鲁戈氏碘凝集法和革兰氏染色镜检检测为单纯犬瘟热感染，RT-PCR检测CDV阳性。利用RT-PCR方法对CDVH基因进行扩增并进行测序，结果显示该株犬瘟热病毒为亚洲I型，与野毒株2544、48／05、98002、SD（07）1的同源性在92．6％～95．7%，与疫苗株CDV3、Convac、Lederle、Onderstepoort的同源性在90．9％～91．6％。
- 王聪张倩张洪亮王怡男黄娟
- 关键词：水貂犬瘟热病例诊断H基因
- 犬瘟热病毒H蛋白基因克隆、原核表达及其重组蛋白的抗原性研究
- 王怡男
- 文献传递
- 犬瘟热病毒和细小病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用
- 本研究根据CDV核蛋白(N)基因和CPV、MEV结构蛋白VP2基因的相对保守区设计了两对特异性引物，经试验条件的优化，建立了同时检测CDV和CPV／MEV的双重PCR方法。通过检测36份临床样品，对双重PCR方法和胶体金...
- 张洪亮王怡男王聪靳继惠刘林单虎
- 关键词：犬瘟热病毒双重PCR免疫检测特异性引物基因克隆
- 水貂犬瘟热病毒受体SLAM的原核表达被引量：6
- 2013年
- 为了获得犬瘟热病毒受体信号淋巴激活分子(SLAM)蛋白,本试验以pMD18-T-SLAM为模板,应用PCR方法扩增得到水貂SLAM基因,将SLAM基因连接到经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切处理后的pGEX-6p-1原核表达载体中,获得重组质粒pGEX-6p-1-SLAM,转化至大肠埃希菌BL21中进行诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果表明,目的基因插入位置和阅读框正确,经诱导成功表达出分子质量约为63.2ku的SLAM-GST融合蛋白,该融合蛋白能与鼠抗GST标签单克隆抗体发生特异性反应,具有良好的抗原性。
- 王聪张洪亮黄娟靳继惠王怡男单虎
- 关键词：犬瘟热病毒原核表达水貂
- 犬瘟热病毒疫苗株与野毒株H蛋白球状头部域的免疫原性比较研究
- 2015年
- 以犬瘟热病毒疫苗株CDV3和野毒株LYM基因组RNA为模板,RT-PCR扩增得到CDV3和LYM的H全基因序列,PCR分别扩增得到CDV3和LYM-Head Domain基因,将其分别克隆于p ET-30a载体进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western Blot分析表明,这两种重组蛋白均正确表达,分子质量约为50.8 ku。再将两种重组蛋白分别免疫小鼠,间接ELISA结果表明,这两种重组蛋白均能激发机体产生特异性抗体,具有一定免疫原性。中和试验结果表明,这两种重组蛋白的抗体中和效价差异不显著(P>0.05)。
- 秦晓冰王怡男张传美黄娟张洪亮王聪胡琳琳单虎
- 关键词：犬瘟热病毒免疫原性
