毕研伟
- 作品数：40 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省自然科学基金协和青年科研基金云南省重点新产品开发计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种B群脑膜炎球菌重组蛋白嵌合疫苗及其制备方法。系采用搭桥PCR构建含有B群脑膜炎球菌V1变异型全长FHBP蛋白和V2变异型的位于C结构域的一段抗原表位的融合基因片段，克隆入pET30a(+)载体后，IPTG...
- 李健峰彭世泽姬秋彦李智华毕研伟高丹丹徐维明
- 文献传递
- HPV16 L2肽段偶联AP205 VLP的原核表达及免疫原性分析被引量：1
- 2012年
- 目的:将编码HPV16衣壳蛋白L2的65～71、112～120免疫优势表位连接到RNA噬菌体衣壳蛋白AP205氮端,组装形成病毒样颗粒,通过在大肠杆菌中实现表达及纯化,对其免疫原性进行研究。方法:合成编码AP205衣壳蛋白基因和HPV16 L2的65～71、112～120位氨基酸表位的基因序列,PCR连接并克隆至pET30a(+)原核表达载体,构建重组表达质粒pET30-AP205-HPV16ΔL2,转化大肠杆菌BL21(DH3)感受态细胞,IPTG诱导表达。表达蛋白经凝胶层析纯化及SDS-PAGE、Western blot等理化性质检测,免疫接种ICR小鼠,通过间接ELISA法检测其免疫原性。结果:成功构建重组表达质粒,重组蛋白在大肠杆菌中以可溶性表达,透射电镜观察可见典型病毒样颗粒,该VLP在动物实验中表现出较好的免疫原性。结论:成功将HPV16 L2表位偶联AP205以形成VLP,在大肠杆菌中实现可溶性表达。
- 姜博毕研伟张营营蔡路奎姬秋彦李智华徐维明
- 关键词：人乳头瘤状病毒
- 一种丙肝病毒滴度测定方法被引量：1
- 2015年
- 目的:建立一种测定丙肝病毒(HCV)滴度的方法,为HCV的基础研究及临床药物评估提供有效的实验手段。方法:对HCV JFH1病毒株进行倍比稀释并感染Huh7细胞,甲醇固定后,采用抗HCV核心蛋白一抗进行孵育,加入二抗后采用DAB显色,通过计数病毒斑得到HCV的滴度。结果:采用甲基纤维素限制HCV于细胞间感染,利用免疫组化技术使被病毒感染的细胞形成肉眼可见的清晰斑块。结论:建立了一种简单、经济的HCV滴度测定方法。
- 李亚东李智华毕研伟陈晨寸韡
- 关键词：丙肝病毒滴度免疫组化
- RNA导向核酸酶介导的病毒基因组高效定点编辑
- 如何利用病毒基因组突变和重组筛选减毒疫苗株和抗病毒药物、构建重要疾病的基因治疗载体以及建立病毒生物学研究的有效方法，是研究病毒遗传和变异的主要目的之一。为了提高病毒基因组的突变效率，常用于诱导突变的经典方法包括物理诱导、...
- 毕研伟孙乐高丹丹丁晨李亚东寸韡李琦涵
- 利用丙型肝炎病毒复制子模型检测重组人λ2干扰素的体外活性
- 2017年
- 目的:利用丙型肝炎病毒(HCV)复制子细胞模型,体外研究重组人λ2干扰素(hIFNλ2)对HCV复制子的抑制作用。方法:构建重组质粒pcDNA3.1-hIFNλ2-HA,转染293T细胞,表达带有HA标签的hIFNλ2,表达后的上清通过Western印迹检测,然后稀释至不同浓度后作用于带有HCV复制子的Huh7.5细胞系,每隔24h取样并更换培养液,通过报告基因检测hIFNλ2对HCV复制子的抑制作用。结果:构建了pcDNA3.1-hIFNλ2-HA真核表达重组体,并在293T细胞中表达出hIFNλ2,该蛋白能有效抑制HCV复制子的复制。结论:hIFNλ2对HCV复制子具有抑制作用。
- 张辉李亚东李亚东宫悦毕研伟丁晨宫悦
- 一种用于检测甲型肝炎病毒滴度的细胞系及其构建方法与应用
- 本发明涉及一种用于检测甲型肝炎病毒滴度的细胞系及其构建方法与应用。本发明利用3ABC蛋白酶能与MAVS相互的性质，将MAVS C端与荧光蛋白构建融合蛋白，并将其包装成慢病毒颗粒，感染细胞后，表达的融合蛋白会锚定在细胞质中...
- 寸韡毕研伟龙琼肖红剑李育中
- 文献传递
- Optiprep连续密度梯度离心方法的建立被引量：2
- 2016年
- 目的：试验不同条件,优化Optiprep密度梯度离心方法,建立最佳的Optiprep连续密度梯度,为纯化病毒提供良好的参数。方法：试验不同的旋转角度、重复次数、离心时间,以及用不同浓度的Optiprep制备连续密度梯度等条件,摸索制备连续密度梯度的最佳方案,将此最佳方案应用于纯化丙肝病毒（HCV）,并通过q RT-PCR验证纯化效果。结果：通过各种条件的摸索,确立了制备连续密度梯度的最佳方案,即制备10%~40%Optiprep连续密度梯度,在旋转角度为85°时,1号程序设置为30 r/min离心5 s,2号程序设置为0 r/min 15 s,重复1~2程序10次。将此程序用于纯化HCV,得到了较好的纯化效果。结论：建立了制备Optiprep连续密度梯度离心的方法,为进一步提高病毒的纯化效果提供了参数。
- 张辉毕研伟李智华李亚东宫悦寸韡
- 关键词：碘克沙醇纯化
- 金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达及活性鉴定被引量：1
- 2017年
- 目的:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为基础,在枯草芽孢杆菌中得到具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。方法:以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,PCR扩增得到SplB基因,同源重组到表达载体pHTSHIS上,再转化枯草芽孢杆菌;优化诱导条件发酵枯草芽孢杆菌,离心后超滤浓缩上清液,再经镍柱分离纯化;利用SDS-PAGE、Lowry法对蛋白的相对分子质量、浓度等进行分析,对蛋白的酶切活性进行鉴定。结果:金黄色葡萄球菌基因组DNA经PCR扩增得到与预计大小相符的DNA片段,通过同源重组构建了表达载体pHTS-SplB-His;选取诱导前菌液D_(600nm)为2.0、IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导4 h的最优条件发酵枯草芽孢杆菌,表达大量金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B;蛋白浓缩后,经镍柱分离纯化得到纯度较高且具有剪切功能的金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B。结论:采用枯草芽孢杆菌进行发酵表达,可提高金黄色葡萄球菌丝氨酸类蛋白酶B的表达量,并且能够得到具有剪切功能的蛋白。本研究可为外源蛋白在枯草芽孢杆菌中的发酵技术提供重要参考。
- 丁晨张辉肖红剑李智华毕研伟李育中闫玲梅龙琼姚月婷寸韡
- 关键词：金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌分泌表达
- 啮齿类肝炎病毒感染大鼠模型的建立
- 2022年
- 目的建立啮齿类肝炎病毒(rodent hepacivirus,RHV)感染大鼠模型。方法将体外转录获得的RHV rn1亚型(RHV-rn1)基因组全长RNA经大鼠肝内和尾静脉两种注射途径给药,于不同时间点经尾静脉采血,分离血清,RTqPCR法检测RHV-rn1基因组拷贝数。将肝脏注射感染病毒大鼠的血清(P0代RHV-rn1)经尾静脉注射进行大鼠个体传代,共传3代,获得P1、P2、P3代RHV-rn1。RT-qPCR法检测接种P0代RHV-rn1后不同时间点大鼠血清、RHV-rn1在体内传至P3代时大鼠不同脏器/组织及各代病毒血清的RHV-rn1基因组拷贝数。用不同剂量(10^(1)、10^(2)、10^(3)、10^(4)、10^(5)copies/μL)的P3代RHV-rnl经尾静脉感染大鼠,检测血清中的RHV-rn1基因组拷贝数。结果肝内注射组大鼠于注射后2 d出现高滴度病毒血症,至注射后14 d RHV-rn1基因组拷贝数开始稳定,约10^(6)copies/μL,可持续至49 d;尾静脉注射组大鼠至28 d未检测到病毒血症。接种P0代RHV-rn13 d后,大鼠血清中RHV-rn1基因组拷贝数为10^(5)copies/μL,随后逐渐上升,至14 d时,维持约在10^(6)copies/μL。RHV-rn1在体内传至P3代时,大鼠肝脏中的RHV-rn1基因组拷贝数达10^(7)copies/mg,高于其他组织器官1000倍以上。P1、P2、P3代RHV-rn1的拷贝数分别为1.12×10^(7)、7.5×10^(6)、1.65×10^(7)copies/μL。RHV-rn1半数感染的拷贝数为10^(2).5 copies。结论体外转录获得的RHV RNA经肝脏注射可使大鼠出现高滴度病毒血症,形成慢性感染,获得的RHV-rn1具有嗜肝性,且感染性较强,本实验成功建立了RHV感染的大鼠动物模型。
- 马鑫宇官月婵吴爽靖谢明学毕研伟寸韡
- 树鼩白细胞介素6的原核表达、纯化及免疫原性鉴定
- 2017年
- 目的:克隆树鼩白细胞介素6(IL-6)基因,在大肠杆菌中高效表达、纯化,并鉴定免疫原性。方法:根据GenBank预测的树鼩IL-6基因序列设计引物并扩增基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建的重组表达质粒pET-30a(+)-IL-6转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达;表达的融合蛋白经Ni柱纯化后,Western印迹和ELISA检测其免疫原性,并检测不同组织中IL-6的分布情况。结果:酶切及测序证实重组表达质粒pET-30a(+)-IL-6构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为29×10~3,纯化后复性的重组蛋白纯度可达95%以上,免疫兔子后Western印迹和ELISA鉴定其具有免疫原性,在气管、心、脾、肾中能检测到IL-6。结论:在大肠杆菌中高效表达了重组树鼩IL-6,纯化复性后具有良好的免疫原性。
- 龙琼徐盟郝嘉茂毕研伟肖红剑李智华闫玲梅丁晨李育中姚月婷寸韡
- 关键词：树鼩白细胞介素-6原核表达纯化免疫原性
